【推荐1】人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：
1．分离培养细菌时必须进行无菌操作，配制培养基时，调节pH和灭菌的先后顺序是_____。
2．采用_____（液体）将样液进行一系列的_____，然后接种培养。除了可以分离到单菌落，此法还可以计算_____。在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在_____旁边操作。
3．用_____培养基筛选获得能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于_____培养基。若培养基中存在能分泌脲酶的细菌，其菌落周围会出现_____，这是由于尿素被分解产生氨，遇培养基中的酚酞指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。变色区域越大，表面该菌株利用尿素的能力_____。
4．表格中各项成分能起生长因子作用的是_____；划线法接种培养，则此配方一定还需要加入_____。

成分	蛋蛋白胨	牛肉膏	NaCl	蒸馏水	pH
含量	10g	5g	10g	1000ml	7．0

5．请根据正确的顺序排列配制培养基和培养的步骤_____。
①倒置培养基   ②计算   ③熔化   ④称量 ⑤灭菌

【推荐2】以下是有关生物技术实践的几个问题，请回答：
Ⅰ．某年我国某地由于柑橘大实蝇的危害，橘农遭受到了很大的损失，当地政府想尽一切办法帮助橘农尽量减少损失。
有人想提取橘皮精油获取利润，一般提取橘皮精油的方法是______法，橘皮精油的提取之所以不采取水蒸气蒸馏法，是因为水中蒸馏会导致___________________________等问题。
Ⅱ．某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌的生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：
(1)分别配置_____________的培养基和__________的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用；
(2)分别向A、B培养基接种___________；
(3)把接种后的培养基放在恒温箱中3d～4d；
(4)从A、B培养基上生长的菌落中挑取生长良好的菌株，分别接种到__________中；
(5)____________________________________________________________。
(6)AB两培养基筛选出的微生物依次为____________________________________。

【推荐3】人类在对抗新型冠状病毒的同时消耗了大量的一次性口罩（主要成分是聚丙烯），被消耗的口罩如不及时处理会对环境造成污染。某科研小组准备从土壤中筛选出能够高效降解一次性口罩的细菌，进行了如图所示的实验。回答下列问题：
   
(1)土壤是微生物的天然培养基，图中土壤浸出液能为微生物的生长提供的四大营养物质分别是_________。
(2)上图是通过稀释涂布平板法来统计土壤中活菌的数目，该方法计数的原理是__________。根据图中菌落个数的结果分析，还需对稀释10⁴倍的土壤浸出液进行___________处理，这样处理的目的是__________，从而保证计数结果的准确性。
(3)科研小组将菌种接种到选择培养基上进行分离纯化，该选择培养基需以________________为唯一碳源；在培养基中加入能与该物质结合的染色剂，该物质被分解后会出现透明圈，假设菌落面积为X，菌落周围透明圈的面积为Y，Y/X的比值越大，说明______________。

【推荐1】在某地的农业生产中,为提高生产效率，广泛使用的除草剂莠去津（C₈H₁₄CLN₅）。已知该除草剂是一种有机物，在水中溶解度低，有毒；且在土壤中不易被降解，长期使用会导致土壤被污染。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下图程序选育能降解该除草剂的细菌A。

(1)在________环境里寻找目的菌细菌A。根据细菌A对营养物质的需求，培养基的配方为莠去津、磷酸盐、镁盐以及微量元素、水、碳源等，配制图中步骤Ⅱ的培养基时，通常需加入____；莠去津在筛选目的菌的作用是____________ 。
(2)接种前需要对培养基及培养皿等进行灭菌，对培养皿进行灭菌的方法__________。
(3)上图II中对细菌A接种的方法是___________。若对细菌A菌落进行计数，需采用________________接种，该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数少，原因是______________

【推荐2】胰岛素是治疗人类糖尿病的特效药，传统生产胰岛素的方法是从动物胰腺中提取。1978年，我国科学家将人胰岛素基因（S）导入大肠杆菌细胞中，构建基因工程菌并进行筛选，使大肠杆菌表达重组人胰岛素，这是我国拥有自主知识产权的基因工程药物，流程如图所示。为防止目的基因与载体质粒反向连接，选用图中MunI和NheI两种限制酶来切割目的基因和质粒，但INS基因的两侧无MunI和NheI两种限制酶的识别序列及切割位点，可在PCR扩增INS基因时增加MunI和NheI两种限制酶的识别序列，以便构建基因表达载体。回答下列问题：

注：LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色；否则菌落为白色。图中限制酶识别序列及切割位点：EcoRI：G^↓AATTC、MunI：C^↓AATTG、NheI：G^↓CTAGC、XhoI：C^↓TCGAG
(1)设计引物时需要在引物的________（填“3'”或“5'”）端增加相应限制酶的识别序列。
(2)已知INS基因编码区首端和末端（其中一条链）的序列为5'-AGCCCTCC…（中间核苷酸序列）…GAACCAGC-3'，下列可选用的一对引物是________（选填字母序号）。

A．5'-GAATTCAGCCCTCC-3'

B．5'-CAATTGAGCCCTCC-3'

C．5'-GCTAGCGCTGGTTC-3'

D．5'-CTCGAGGAACCAGC-3'

(3)流程中步骤③将目的基因导入大肠杆菌前，常用_________处理大肠杆菌细胞，以提高转化率。转化后的大肠杆菌，需要配制培养基进行培养，配制的培养基采用___________法进行灭菌。
(4)在经步骤③处理后的大肠杆菌中进一步分离筛选出导入重组质粒（含目的基因的质粒）的大肠杆菌，从菌落特征的角度设计一个实验方案进行筛选，要求写出实验思路及预期结果______。

【推荐3】精喹禾灵在土壤中可被微生物分解，从土壤中筛选出能高效降解精喹禾灵的微生物，可应用于污染的土壤和水体的修复。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解精喹禾灵的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和精喹禾灵，乙的组分为无机盐、水、精喹禾灵和Y。
   
回答下列问题：
(1)乙培养基中的Y物质是______。甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供4类营养物质，即________。
(2)实验过程中，通常采用_____方法对培养基进行灭菌。图中甲培养基的作用是_____。分离和纯化培养过程中必须使用固体培养基，理由是______。
(3)若要测定淤泥中能降解精喹禾灵的细菌细胞数，可采用什么方法？ ______。
(4)实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×10⁷个/mL，若要在每个平板上涂布0．1mL稀释后的菌液，且保证平板上长出的平均菌落数为200个，则应将摇瓶M中的菌液稀释_______倍。
(5)通过上述分离过程，乙培养基上获得10个菌落。如何从这些菌落中进一步筛选能高效降解精喹禾灵的菌种？请写出基本思路：_____。

【推荐1】敌草隆是一种除草剂，有毒性。下图所示流程为研究人员从长期施用敌草隆的棉田土壤中分离出敌草隆降解菌株的过程。实验过程中甲培养基为一定浓度的敌草隆和无机盐液体培养基，乙培养基为相同浓度的敌草隆和无机盐固体培养基。

(1)制备乙培养基的过程为计算→称量→_____→灭菌→倒平板。对培养基灭菌的方法一般为_____。
(2)甲培养基为_____培养基（填“选择”或“鉴别”），与乙培养基的成分相比，最大的区别是_____。
(3)步骤③的接种方法为_____。
(4)推测菌株对敌草隆的降解能力与_____及_____等环境因素密切相关，请设计实验分别探究以上两种因素对菌株降解能力的影响，简要写出实验思路。_____

【推荐2】硝基苯酚是工业污水中的重要污染物，某同学欲从污水处理厂的污泥中分离能分解硝基苯酚的细菌。请回答下列有关问题：
（1）为了筛选出污泥中可分解硝基苯酚的细菌，在配制培养基时应选择_____作为主要碳源。判断培养基灭菌是否合格的思路是_____。
（2）纯化菌株时，通常使用的划线工具是_____。某个平板经培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其他线上有菌落，分析造成第二划线区域第一条线上无菌落的可能原因有：①_____；②_____。
（3）进行梯度稀释时的一般操作是将1mL菌液移入盛有_____mL无菌水的试管中，常用_____法进行活菌计数。
（4）实验数据显示，当培养基中加入碳源——葡萄糖时，该细菌降解硝基苯酚的速率明显提高，原因可能是_____。

【推荐3】下表为某生物兴趣小组的同学在培养某种微生物时制定的培养基组分，请回答下列问题：

KH2PO4	NaHPO4	MgSO4·7H2O	KNO3	蒸馏水
1.4g	2.1g	0.2g	2.0g	定容至100mL

(1)该培养基缺少的营养成分是_____________，只能用来培养_____________型微生物，若要分离土壤中的尿素分解菌，该培养基中需加入_____________、_____________、琼脂，去掉KNO₃。
(2)制备固体培养基，需要计算→称量→_____________→灭菌→_____________。接种前，某同学取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，其目的是： _________________。
(3)若要长时间保存大肠杆菌，可以采用__________________；使用过的培养基及其培养物必须经过_________处理后才能丢弃，以防止_________________。

【推荐1】原生态椰子油是近年来活跃在国外市场上的一种新型植物油脂，常用酶解法进行提取，酶解法的原理是通过酶解除去椰奶中的蛋白质、纤维素和淀粉等物质，其流程如图所示，回答下列问题：


（1）由生产流程可知，椰子油的提取一般采用压榨法进行提取，不采用水中蒸馏法提取的原因是_________________________________________。用蒸馏法提取芳香油时，当蒸馏瓶中的水和原料量一定时，影响精油提取量的主要因素_________________________。
（2）一般在压榨前需将椰子皮干燥去水后要用石灰水浸泡，其目的是_______________________________________________________，在加水压榨过程中，为了使椰子油容易与水分离，应加入一定质量的______________________ 。
（3）分析题干，酶解法发酵过程中加入的酶应有_____________________________，酶解发酵过程中要严格控制发酵的温度，原因是_________________________________________________________。
（4）如图表示椰子油提取次数和出油率关系，据图分析欲同时考虑提取成本和经济效益，最佳的提取次数为____次。

【推荐2】酶是细胞合成的生物催化剂。请回答下列有关酶的应用的问题：
（1）在制作果汁时，为提高出汁率并使果汁变澄清，要使用的酶是________________。该酶能使果胶分解成为可溶性的_________________。若通过固定化细胞技术利用该酶，则在溶化海藻酸钠溶液时，最好采用________（“小火”或“大火”） 或间断加热的方法，否则可能出现焦糊。固定化细胞技术一般采用___________________法进行固定。
（2）探究温度对果胶酶活性影响的实验步骤：
a．用搅拌器制苹果泥，并适量且等量注入到6支试管中；同时另取6支试管各注入适量且等量的果胶酶溶液；
b．取6个烧杯分别编号1、2、3、4、5、6，依次注入适量30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃的水，恒温水浴；
c．每一烧杯中分别放入装有等量苹果泥和果胶酶的试管，在不同温度下保温3 min；
d．将各组烧杯中试管内的苹果泥和果胶酶混合均匀，振荡试管，反应一段时间；
e．过滤，比较获得苹果汁的体积。
①c中将分别装在不同试管中的苹果泥和果胶酶恒温处理的目的是_______________。
②在0℃和80℃时，酶的催化效率基本都降为零，但温度再回到适宜温度时，后者的催化作用已不能恢复，这是因为_____________________。
（3）使用加酶洗衣粉清洗衣物时，需要注意的问题有(      )
A．应该用温水来溶化加酶洗衣粉
B．用来溶化加酶洗衣粉的清水的pH越接近中性效果越好
C．最好先把衣物放在含有加酶洗衣粉的水中浸泡片刻
D．加酶洗衣粉一般只适宜用于清洗化纤衣物

【推荐3】工业生产果汁时，常常利用果胶酶破除果肉细胞的细胞壁以提高出汁率。为研究温度对果胶酶活性的影响，某学生设计了如下图所示的实验：
   
①将果胶酶与苹果泥分装于不同的试管，在10 ℃水浴中恒温处理10 min(如图中A)。
②将步骤①处理后的果胶酶和苹果泥混合，再次在10 ℃水浴中恒温处理10 min(如图中B)。
③将步骤②处理后的混合物过滤，收集滤液，测量果汁量(如图中C)。
④在不同温度条件下重复以上实验步骤，并记录果汁量，结果如下表：

温度/℃	10	20	30	40	50	60	70	80
果汁量/mL	8	13	15	25	15	12	11	10

根据上述实验，请分析并回答下列问题：
(1)果胶酶能破除细胞壁，是因为果胶酶可以促进细胞壁中_________的水解。
(2)实验步骤①的目的是_______________________________。
(3)实验步骤中也有玻璃棒搅拌的操作，其目的是使__________，以减少实验误差。
(4)实验结果表明，在上述8组实验中，当温度为________时果汁量最多，此时果胶酶的活性________。当温度再升高时，果汁量降低，说明________________。
(5)能不能确定该温度就是果胶酶的最适温度？如果不能，请设计出进一步探究果胶酶的最适温度的实验方案：
____________________________________________________________。