【推荐1】回答下列关于遗传信息的传递与表达的问题
如图是利用基因工程方法生产人生长激素的示意图．

1. 如图1方框内代表的基因工程过程是_____，构建重组质粒要用到的“化学浆糊”是_____
2. 据图所示推断EcoR I酶识别的核苷酸序列是_____
A．AGGAATTCGT       B．TCCAATTGCA        C．GAATTC        D．CTTAAG
3. 图1中，质粒经EcoR I和HindIII联合酶切后形成1.0kb、0.8kb和3.2kb三个片段，重组质粒经EcoR I酶单切后，形成1.0kb、4.8kb两个片段，目的基因的长度是_____kb．（1kb=1000碱基）
4. 关于制备图1中大肠杆菌培养基的叙述，正确的是_____
A．制作固体培养基时可以加入琼脂
B．操作的顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒置培养
C．倒好培养基的培养皿，要立即将平板倒过来放置
D．制备待用的培养基可用紫外线照射进行灭菌
5. 在目的基因增殖过程中，图2表示一个具有四个核苷酸对的DNA片段经硫酸二乙酯（EMS）处理后，在正常溶液中经过2次复制后的产物之一．则说明EMS能将G改变为_____．
A．胞嘧啶       B．腺嘌呤        C．胸腺嘧啶        D．鸟嘌呤
图3为大肠杆菌的遗传信息传递和表达过程．
6. 据图3下列说法正确的有_____．
①a、b过程所需的原料在细胞中有8种
②a、b过程发生的场所主要在细胞核
③b、c中均会发生碱基配对情况，但配对方式不完全相同
④在细胞增殖过程中，只会发生a过程，不会发生b和c过程．

【推荐2】植酸酶是饲料生产中必需的一种酶，为高效、大量获得耐高温植酸酶，研人员将耐高温植酸酶基因转入酵母菌中进行表达。请回答下列问题。
(1)科研人员以耐高温植酸酶的氨基酸序列为基础设计DNA序列，确保该序列转录出的mRNA中含有较多酵母菌的偏爱密码子（指翻译同一氨基酸的密码子中酵母菌使用较多的密码子），该做法的意义是______。在设计好DNA序列后，通过______（方法）获得DNA片段。
(2)将上一步中获得的DNA片段利用特定引物进行PCR反应，为了使其能顺利插入下图所示的表达载体中（图中箭头方向代表基因表达方向），应该选择的引物是______。将PCR后的产物插入表达载体中，需要使用的工具酶是限制酶和______。

限制酶	识别序列
EcoRI	5'-GIAATTC-3'
BglII	5'-AIGATCT-3'
Xhol	5'-CLTCGAG-3'
NotI	5'-GClGGCCGC-3'

引物a：5'-CTCGAGAAAAGAGAGGCTGAGGCTTGCGACACCGTTGACTTG-3'
引物b：5'-AGATCTCGATCGTAGCTCGTAGCTAGCTACGCTATATATCGTCAC-3'
引物c：5'-GCGGCCGCTTAGGAGAAGCATTCACCCCAGTTAC-3'
引物d：5'-GAATTCACGTAGCTGACTGCTGCTAGCCCGGATCCCTAGTCC-3'
(3)将重组质粒与酵母菌混合，并施加适宜的电击，使酵母菌转化为感受态，感受态指微生物______的状态，感受态细胞质膜的通透性变______（选填“大”或“小”）。
(4)研究使用的酵母菌是组氨酸营养缺陷型，并能利用甲醇作为唯一碳源，但植酸酶合成基因整合到酵母菌染色体上时，会破坏酵母菌利用甲醇的基因。如果酵母菌可以在不含组氨酸、且以甲醇为唯一碳源的培养基上生长，则其外源DNA导入情况是______（写出两种可能）。
(5)筛选出成功将植酸酶合成基因到染色体上的酵母后，还需要检测酵母菌菌株______。最终获得高效生产植酸酶的菌株。

【推荐3】某种昆虫（XY型）的翻翅与正常翅是一对相对性状，受一对等位基因（A、a）控制；昆虫眼睛的颜色伊红、淡色和乳白色分别由复等位基因e、t和i控制。为探究上述两对性状的遗传规律，用两组昆虫进行了杂交实验，其结果如下表。回答下列问题：

杂交组合	亲本		子代（F1）
	♀	♂	♀	♂
甲	翻翅乳白眼	翻翅淡色眼	翻翅淡色眼：正常翅淡色眼=2：1	翻翅乳白眼：正常翅乳白眼=2：1
乙	翻翅伊红眼	正常翅淡色眼	翻翅伊红眼：翻翅淡色眼：正常翅伊红眼：正常翅淡色眼=1：1：1：1	翻翅伊红眼：翻翅淡色眼：正常翅伊红眼：正常翅淡色眼=1：1：1：1

(1)昆虫眼色基因的遗传遵循______定律。若只考虑眼色的遗传，昆虫的基因型有______种。
(2)甲杂交组合中亲本雌昆虫的基因型为_____乙杂交组合中亲本雄昆虫产生配子的基因型为______。
(3)已知翻翅伊红眼雌昆虫与翻翅乳白眼雄昆虫杂交，F₁中出现了正常翅乳白眼雄昆虫。若再将F₁中的翻翅伊红眼雌昆虫与翻翅乳白眼雄昆虫杂交，则F₂中正常翅伊红眼雌昆虫的概率为_______。
(4)若将乙杂交组合子代（F₁）中翻翅淡色眼雌昆虫与甲杂交组合子代（F1）中正常翅乳白眼雄昆虫杂交，产生子代的表型及比例为________。
(5)测序结果表明，昆虫翻翅基因的产生是由于正常翅基因转录产物编码序列第727位碱基改变，由5＇-GAGAG-3＇变为5＇-GACAG-3＇，导致第______位氨基酸突变为______。（部分密码子及对应氨基酸：GAG谷氨酸；AGA精氨酸；GAC天冬氨酸；ACA苏氨酸；CAG谷氨酰胺）
(6)正常翅基因突变为翻翅基因产生了一个限制酶酶切位点。从翻翅昆虫细胞中获取控制翅形的基因片段，用限制酶处理后进行电泳（电泳条带表示特定长度的DNA片段），其结果为图中_______（填“I”、“Ⅱ”或“Ⅲ”）。

【推荐2】α-环糊精是食品、医药等常用原料。α-环糊精葡萄糖糖基转移酶（cgt）生产α、β和γ环糊精的混合物，分离纯化十分不便。cgt在芽孢杆菌中的产量较低，诱变效果不佳。cgt的372位天冬氨酸和 89 位酪氨酸是酶与底物作用的关键位点，江南大学一实验室将它们分别替换为赖氨酸和精氨酸后，形成的重组cgt催化特异性提高了27倍。

(1)重叠PCR是常用的 DNA定点突变技术，其原理如图所示。与细胞内的DNA 复制相比，PCR不需要用到_______酶。要完成两处位点的突变，至少要设计________种引物。图中第1对和第2对引物的PCR产物混合、变性、退火后可形成①②两种产物，其中产物①_________（能/不能）延伸，原因是_____________________________________________。
(2)如图是该酶编码（非模板）链的部分序列，请你设计替换372位天冬氨酸到赖氨酸（仅以密码子是AAG为例）的引物 FP2和RP1________________和_________________（只写371位到373位对应的9个碱基序列，并标出5'端和3'端）。

(3)上述过程需要用到____________工程。用大肠杆菌大量生产重组cgt需要解决酶的分泌问题，主要是因为大肠杆菌缺少________________（填细胞器）。成功获得工程菌后，还须对获得的α-环糊精葡萄糖糖基转移酶（cgt） 进行活性检测，这是属于____________水平的检测与鉴定。

【推荐1】下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图中甲、乙中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的不再重复标注。请回答下列问题。

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
识别序 列及切割 位点	G↓GATCC CCTAG↑G	T↓GATCA ACTAG↑T	↓GATC CTAG↑	A↓AGCTT TTCGA↑A

(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用限制酶为______，酶切后的载体和目的基因片段通过________酶作用后，获得重组质粒。
(2)若BclⅠ酶切的DNA末端与HindⅢ酶切的DNA末端可直接被DNA连接酶连接，原因是_______，这两种酶_____________(填“都能” “都不能”或“只有一种能”)切开连接的部位，原因是________________________。
(3)若用Sau3AⅠ切割图甲质粒最多可能获得______种大小不同的DNA片段。
(4)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加________平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图乙中的____________________________________。

【推荐2】来源于某种野生植物的A基因表达出的多肽对多种致病微生物具有杀灭作用，将A基因导入油菜可显著提高油菜的抗病能力。
（1）下图是含目的基因A的DNA分子，利用PCR技术扩增A基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成___________。PCR—般要经历三十多次循环，在第3轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段，这种DNA片段所占的比例为___________。

（2）通过SmaⅠ酶切割扩增后的DNA分子和质粒，利用___________酶连接切割后的DNA分子和质粒，将A基因插入质粒的启动子和终止子之间，构建___________。
（3）利用农杆菌转化法将A基因导入经___________形成的油菜愈伤组织细胞，在愈伤组织进一步培养过程中，MS培养基各成分用量减半，并添加质量浓度为0.15mg/L的 萘乙酸（NAA），目的是有利于________的分化。
（4）经检测，转入完整A基因的某些植物不能正确表达多肽，从A基因与质粒连接形成重组质粒的角度分析，最可能的原因是_________________________________。

【推荐3】三氯生是一种抑菌物质，具有优异的贮存稳定性，可以替代抗生素用于基因工程中筛选含目的基因的受体细胞。已知fabV（从霍乱弧菌中发现的烯脂酰ACP还原酶）基因可以使大肠杆菌抵抗三氯生。

(1)通过PCR方法获取fabV基因时，Taq酶只能从__________________延伸DNA链，而不能从头开始合成DNA，因此需要先根据__________________设计两种特异性引物序列。反应体系的初始温度设置在90～95℃的目的是____________________。
(2)在④步骤中，科研者需将大肠杆菌菌液利用稀释涂布平板法接种到加有三氯生的细菌培养基上，待菌落长成后，直接挑取菌落加入到PCR反应系统中进行基因鉴定。PCR过程中不需要先提取细菌DNA的原因是________________________________________________________________________________________。
(3)某科研团队将可以受温度调控的基因插入上述选出的重组质粒中，构建了温度调控表达质粒（如图2）。其中C基因在低温下会抑制P₁，R基因在高温下会抑制P₂。如果将lacZ基因和GFP基因插入图2质粒中，使得最后表现为低温下只表达GFP蛋白，而高温下只表达lacZ蛋白。则lacZ基因插在_____________之间，GFP基因插在______________________之间。