【推荐1】水稻是自花授粉作物，杂交水稻育种成功得益于对雄性不育性状的利用，育种工作者就某水稻品系中发现的雄性不育基因开展了下面的一系列研究。
（1）水稻在抽穗期，幼穗中的雄蕊进行减数分裂产生花粉，此期间水稻对温度敏感。温敏雄性不育系S₂表现为高温条件下（≥25℃）雄性不育，此雄性不育性状由RNZ基因控制。为了研究高温对RNZ基因表达的影响，研究人员选取长势基本一致的S₂植株，均分为两组分别在低温、高温条件下进行处理，请根据后续实验过程分析：
①检测RNZ基因的表达情况。请依据所学知识，写出以基因转录像对数量为指标，检测S₂叶片和幼穗RNZ基因表达情况的基本程序____________________________________。
②实验记录数据如图。与S₂叶片中RNZ基因表达情况比较，温度变化对S₂幼穗中RNZ基因表达的影响是______________________。

（2）已知RNZ基因编码的核糖核酸酶在生物体各组织细胞中广泛存在，催化tRNA的加工。依据上述实验结果，研究人员猜测，由于叶片光合速率不同于幼穗，RNZ编码产物可能也分布于叶绿体中。为验证此推测，研究人员做了如下实验：
①构建RNZ-GFP融合基因表达载体（GFP为绿色荧光蛋白基因）。此表达载体除具有融合基因、启动子、终止子外，还应具有_________________。
②将表达载体导入____________中，然后通过_________技术获得转入RNZ-GFP融合基因的水稻。
③实验者将转基因植物细胞置于适宜的波长光谱的激发下（该操作会使叶绿体会发出红色荧光），观察到____，证明RNZ蛋白定位在叶绿体中。
④本实验还应补充一组_____________作为对照，若结果为_______________能支持③的结论成立。
（3）根据以上研究成果，为了最终揭示温敏雄性不育的机制，请写出接下来可以进一步研究的问题__________________。（写出1个即可）

【推荐2】2019-nCoV（新型冠状病毒）的遗传物质为单链 RNA，该病毒通过表面的 S 蛋白与靶细胞膜上的 ACE2 受体结合实现入侵。目前针对新冠病毒的检测方法主要有核酸检测、抗原 检测、抗体检测三大类。研发和注射疫苗是预防主要手段。
(1)2019-nCoV 能通过 S 蛋白感染人的呼吸道黏膜细胞，却不能感染人的皮肤细胞， 其根本原因是___________________。
(2)某人的核酸检测呈阴性，但抗体检测为阳性，请解释可能的 2 种原因：①_____________；②______________。
抗原检测可采用双抗体夹心法。其原理如下图，其中，待测液体加到样本垫的 A 端，B 处含有游离（不与垫子结合）的过量的与胶体金（聚集后呈红色）结合的抗体 1，C 处垫子上固定有抗体 2，抗体 1 和抗体 2 可与病毒表面同一抗原的不同位点发生特异性结合，D 处 垫子上固定有抗体 1 的抗体。若 C 处和 D 处都变红色，则为阳性。

(3)检测过程中反复进行了抗原——抗体的特异性结合，若检测结果为阳性，则这 种结合共发生 。

A．1 次

B．2 次

C．3 次

D．4 次

(4)若待测样本中不含新冠病毒，显色结果出现 ，结果为阴性。

A．只有 A 处变红	B．只有 B 处变红
C．只有 C 处变红	D．只有 D 处变红

我国科学家研发了多种新冠疫苗。重组腺病毒疫苗的研发策略是：将 S 蛋白基因整合到复制缺陷腺病毒的 DNA 中，形成可表达 S 蛋白的重组腺病毒，该重组病毒侵染人体细胞后不在细胞内增殖但可进行基因表达。
(5)与直接注射 S 蛋白相比，该方法可以引起人体_____________免疫，效果更好。
(6)重组腺病毒疫苗研发过程中需要用到的酶有 。

A．逆转录酶

B．限制酶

C．蛋白酶

D．DNA 连接酶

【推荐1】回答下列（一）、（二）小题：
（一）科研人员从山西老陈醋的醋醅中分离出产酸能力强的醋杆菌，回答下列相关问题：
（1）已知溴甲酚紫 pH 变色范围是5.2（黄色）～6.8（紫色）。在分离醋杆菌用的培养基中加入溴甲酚紫作为_______以鉴别产醋杆菌。配制培养基时，加入经 _________灭菌的乙醇，乙醇的主要作用是___________。
（2）三角瓶、试管、培养皿等用牛皮纸或报纸包扎好后置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，要注意灭菌物品不能放太满太挤，要留出空隙以利于______。灭菌后，通常将实验用具放入60℃～80℃的烘箱中烘干，目的是_________。
（3）取 10g 山西老陈醋的醋醅等梯度稀释，用 ___________取 10 ^-3、10^-4、10 ^-5稀释度的样品稀释液0．1mL 涂布于平板分离培养基上，30℃倒置培养48h。若要筛选产酸能力强的菌种，需挑选若干个 ___________比值大的菌落，分别用________扩增，然后离心检测培养液中醋酸含量。
（二）胚胎干细胞（ES细胞）介导法的主要操作过程是：将外源基因导入胚胎干细胞，然后将转基因的胚胎干细胞注射于受体动物胚胎后可参与宿主的胚胎构成。如图是利用胚胎干细胞介导法培育出荧光小鼠的过程。回答下列问题：

（1）从水母中获取绿色荧光蛋白基因 有多种方法。将水母的全部基因用 _______切成片段，插入到载体分子中，并将所得的 _______转入大肠杆菌，通过_________使目的基因扩增，再用某种探针钓取目的基因。
（2）③过程常用________方法，④过程中饲养层的作用是_______，⑤过程注入的胚胎干细胞具有______   特点，从而可分化成个体的各种组织和器官。在进行⑥之前，需对受体母鼠进行_______处理。
（3）关于受体母鼠妊娠产下的子代小鼠的特点，下列叙述正确的是_____________。
A．各细胞都有绿色荧光蛋白基因，所以全身每个细胞都有绿色荧光蛋白产生
B．各细胞都有绿色荧光蛋白基因，但只有部分细胞有绿色荧光蛋白产生
C．不是所有细胞都有绿色荧光蛋白基因，所以只有部分细胞有绿色荧光蛋白产生
D．该小鼠产生的配子中含绿色荧光蛋白基因的概率为1/2

【推荐3】已知组成型启动子可以高效地启动目的基因在植物各种组织中的表达，但常会阻碍植物的生长发育。诱导型启动子可在特定环境条件下诱导目的基因的表达。沙冬青脱水素基因（AmDHN基因）能使植株具有较强的抗旱作用。科研人员通过构建AmDHN基因表达载体，以培育耐旱苜蓿新品种，所用载体如下图所示，请回答下列问题：
   
(1)用载体1构建含AmDHN目的基因的表达载体，可以成功转化苜蓿，但会出现抑制抗性芽生长和抗性植株生根的现象，推测³⁵S启动子属于_________启动子。
(2)下图是科研人员扩增Rd29A启动子所设计的引物，根据引物的碱基序列及限制酶的识别序列分析，构建载体2时选用的限制酶是________________。为了改造载体1中的启动子，需要用________________酶切割载体1、2为最佳。
上游引物P1：5＇-GACCCGGGTTTCCAAAGATTTTTTTC-3＇
下游引物P2：5＇-GAGAGCTCTGGGGTTTTGCTTTTGAATGT-3＇
(3)构建Rd29A启动子驱动AmDHN基因的表达载体后，先将其导入________，再转化苜蓿。转化后应在培养基中添加________进行筛选。
(4)为检测转基因苜蓿中AmDHN基因的表达水平，科研人员做了相关实验。下表呈现了部分操作步骤，请完成表格：

实验步骤的目的	简要操作过程
①_______	在转基因无菌苗根系长至 2～3 cm 时，将培养无菌苗三角瓶的封口膜打开，培养一周，观察其生长状况
提供适宜生长条件	将甲组幼苗根系置于300mL水中
模拟干旱胁迫条件	②____________
无关变量控制	将甲、乙两组置于温度、光照等条件适宜且相同的环境中培养8h，之后剪取两组叶片放在液氮中储存
③________	对叶片研磨、离心后，提取④________，以AmDHN和MtActin基因⑤________为依据设计引物，进行RT-PCR扩增，其中MtActin（一种细胞骨架蛋白）为内参。扩增产物用⑥ _______检测，EB（溴化乙锭）染色照相如图。

【推荐1】四尾栅藻具有环境适应能力强和生长速度快等优点，如果能将其进行品种改良，提高含油量，有望解决微藻生物柴油产业化进程的瓶颈。研究人员利用基因工程技术将油料作物紫苏DGAT1基因导入四尾栅藻，获得转基因的产油微藻，利用地热废水培养，不仅能生产生物柴油，还能治理地热废水。操作过程如下图，请回答下列问题：
   
注：LacZ基因编码产生的酶可以分解物质X-gal，从而使菌落显现出蓝色。若无该基因或该基因被破坏，则菌落呈白色。
(1)通过PCR技术扩增DGAT1基因，扩增过程中需要模板DNA、______（写出三种即可）等基本条件。其中引物的作用是_________。
(2)为了便于筛选含pMD19-DGAT1重组质粒的大肠杆菌，该选择培养基中应添加_____________物质。在培养基中挑取__________ 颜色的大肠杆菌菌落可提取该质粒并获取目的基因。
(3)由上图推测，用_______和_______酶切割pMD19-DGAT1获得DGATI基因，并与酶切后的载体pBI121连接再次构建基因表达载体，用这两种酶切割的目的是_____________。
(4)启动子往往具有物种特异性，在载体pBI121质粒中插入紫苏DGAT1基因，其上游启动子应选择______________（填字母）。

A．紫苏DGAT1基因启动子

B．四尾栅藻启动子

C．大肠杆菌启动子

(5)为检测转基因四尾栅藻对地热废水的去污能力，研究人员设计实验并得到相应实验结果如下表。

指标	总氮（mg/L）	总磷（mg/L）	氟化物（mg/L）
废水培养基	23.2	4.32	4.56
培养转基因四尾栅藻11天后	1.9	0.45	0.84

该实验不能说明转DGAT1基因显著提高了四尾栅藻的去污能力。
请进一步完善实验设计______________________。

【推荐2】某研究小组利用水稻细胞培育能产生HPV (人乳头瘤病毒)-LI 蛋白的水稻胚乳细胞生物反应器，为获得HPV-L1 蛋白提供一种新的高效、低廉的途径，用于制备 HPV 疫苗。其基本流程包括表达载体的构建、农杆菌转化、水稻细胞转化、转基因植株的筛选等步骤，最终获得能产生含 HPV-L1   蛋白胚乳细胞的转基因水稻。回答下列问题：
   
注：T-DNA中标出的启动子属于真核细胞表达系统
(1)目的基因的获取：PCR 是获取HPV-L1 基因的一种方法，PCR反应体系设计的两种引物，在引物间和引物内的碱基都不能互补，其原因是___________________。
(2)农杆菌转化：科研人员构建了图所示的表达载体，将其与经________处理成感受态的农杆菌细胞混合，并控制温度进行液体悬浮培养，完成转化和细胞复苏，随后将菌液涂布在含________的培养基上培养。
(3)为了检测是否成功导入 HPV-L1 基因并培育出能产生HPV-L1   蛋白的水稻胚乳细胞生物反应器，请完善以下实验思路：
I. 分别提取纯化________的总DNA和蛋白质，经处理后分别固定在硝酸纤维素膜上。
Ⅱ.通过_________（填技术名称），来确定目的基因已经成功导入。
Ⅲ.让待测蛋白质与放射性HPV-L1蛋白抗体发生________，来确定目的基因已经成功表达。

【推荐3】为获得转G₃-GFP融合基因纯合小鼠，科研人员将绿色荧光蛋白（GFP）基因和G₃基因拼接到一起，然后导入小鼠受精卵。目的基因和载体所在DNA上的限制酶识别位点及相关限制酶识别序列如图1所示，A、B、C、F、R为不同引物。实验获得能正常表达两种蛋白质的杂合子雌、雄小鼠各一只，利用荧光蛋白活体成像系统进行检测，发现两者均为GFP转基因阳性小鼠。

   

(1)为了使GFP基因能正确插入载体，在PCR扩增GFP编码序列的过程中，需要设计引物F和R,在两个引物的____（填“3′”或“5'”）端需分别插入限制酶________的识别序列。
(2)在GFP基因的扩增及重组载体的构建过程中，除限制酶外，还需要的酶有________。
(3)将实验获得的两只雌、雄杂合子小鼠（P）进行杂交获得F₁若干，利用荧光蛋白活体成像系统检测后，研究人员从这些小鼠中提取Gata3基因相关DNA片段，设计了引物A和C用于PCR扩增，扩增产物电泳结果如图2所示，则________小鼠是Gata3-GFP基因纯合子小鼠；若用引物A和B进行PCR扩增，________（填“能”或“不能”）区分GFP转基因阳性小鼠中的杂合子和纯合子，原因是________。
(4)研究人员常用DNA分子杂交技术检测目的基因是否整合到受体细胞的染色体DNA上，检测时用____标记的目的基因单链片段作为探针。不对称PCR能够大量制备单链DNA片段，其基本原理是采用不等量的一对引物，经若干次循环后，低浓度的引物（限制性引物）被消耗尽，以后的循环只产生高浓度引物（非限制性引物）的延伸产物，结果获得大量单链DNA（ss-DNA）。若反应体系中原有100个模板DNA,最初10个循环后限制性引物耗尽，再进行20个循环，理论上可制备ss-DNA________个（用科学记数法表示），在这30个循环中ss-DNA的产生量主要受________的影响。