【推荐1】回答下列(一)、(二)小题
（一）有研究者从中药渣肥堆的样本中筛选高产纤维素酶菌株，以期为纤维素酶制剂研制提供基础。回答下列问题：
（1）从中药渣肥堆中能分离出纤维素分解菌，是因为___________________________________。
（2）以下是分离分解纤维素菌的流程示意图：

从物质上看，A培养基为________培养基，此培养基是为了____________。B培养基倒置培养的目的是____________。对A、 B培养基进行高压蒸汽灭菌时，从___________开始计时
（3）在建立和优化固定化纤维素酶处理工艺时，首先要确定的是固定化的方法，然后再考虑____，除此之外还要除考虑纤维素酶的活性和用量、酶反应的温度、pH、_____等环境因素。
（4）与共价偶联法相比，吸附法固定的纤维素酶可使用的时间较短，最可能的原因是________。
（二）回答下列与植物的克隆及基因工程有关的问题。
（1）取烟草叶片经表面消毒并去除下表皮，以利于__________，将其置于用______ 配制的混合酶液中，适当时间后用镊子轻轻挑动和压挤叶片，以释放出原生质体。
（2）依照上述方法分别获得烟草叶片和矮牵牛花瓣原生质体后可以选择多种方法诱导细胞融合，其中化学融合方法常用的试剂为________，融合处理后需筛选出成功融合的杂种细胞，筛选标志是________。
（3）将获得的杂种细胞置于适宜条件下培养，获得愈伤组织。随后利用农杆菌转化法将目的基因导入愈伤组织，其中农杆菌的侵染过程需在无菌且_________（填"黑暗”、“光照”）的环境中进行。转化完成后将愈伤组织取出用__________溶液清洗除菌，再移至相应培养基上诱导其再分化为试管苗。
（4）试管苗需锻炼后才可移栽至大田，锻炼时需逐渐降低湿度、_________光照强度。移栽时需先彻底洗去________以免栽后发霉。

【推荐2】某种植物甲能抗真菌病，其抗性是由细胞内的几丁质酶基因A决定的。利用基因工程将甲的A基因转移到乙植物体内，可提高乙抗真菌病的能力。请回答下列问题：
（1)在获取目的基因A时，可从甲的细胞中提取几丁质酶的mRNA，然后合成cDNA。利用mRNA合成cDNA的过程称为____；也可以利用PCR技术扩增目的基因A，进行PCR扩增时，反应体系加热到90～95℃时，DNA双链间的____键打开，延伸的过程中在热稳定DNA聚合酶的作用下形成 ___键。
（2）在利用农杆菌转化法时，需将目的基因插入到 Ti 质粒的 T-DNA 中，原因是____；将目的基因插入到T-DNA中用到的工具酶有____（答两种）。
（3）在获得转基因植物乙后，可利用分子检测来检测乙的细胞中是否存在A基因的表达产物蛋白质，可采用 ___。
（4）实验发现，将携带了A基因的乙植株体细胞进行离体培养，会获得具有抗真菌病能力的完整植株。植物细胞发育成完整植株的潜能称作____，其根本原因是____。

【推荐3】GRFT是一种来源于红藻的外源凝集素，能作为治疗艾滋病的候选药物。某实验小组将GRFT基因导入烟草细胞的染色体基因组中，发现烟草中GRFT基因的表达量可达60%~90%。请回答下列问题：
（1）将GRFT基因导入烟草细胞的染色体基因组的方法为__________，该方法能将GRFT基因导入烟草细胞的染色体基因组，利用的是T—DNA具有_________的特点。
（2）构建重组质粒时可插入NPTII基因，具有该基因的转基因植物的叶绿体离体培养时会出现退绿现象，据此可知重组质粒中的NPTII基因实质上是一种_________，其作用是_________。基因工程中的运载体除了质粒外，还有___________。
（3）欲大量获得GRFT，可利用植物组织培养技术将转基因烟草细胞培育到______阶段，原因是该阶段的细胞具有______________________的特点。

【推荐1】草莓是我国的优质水果，营养价值很高，被誉为“水果皇后”，但却容易受到病毒的感染。科学家常采用两种方法培育新品种：其一，培育无病毒组培苗；其二，将草莓轻     型黄边病毒的外壳蛋白基因(SMYELV－CP)导入草莓基因组中培育出转基因抗病毒草莓。请分析回答下列问题：
（1）若培育无病毒组培苗，通常采用植株_____进行组织培养，转化后的草莓外植体需经过_____________________过程才能长成完整植株。从遗传学角度看，它能形成完整草莓植株的根本原因是__________。
（2）可利用 PCR 技术扩增目的基因 SMYELV－CP，其前提是_________，以便根据这一序列合成引物。为保证目的基因的表达，重组载体上应含有特定的_________(填“复制原点”“启动子”或“标记基因”)，它能被受体细胞的_____所识别，以便于催化转录过程。
（3）获得转基因草莓后，通过分子检测，此后还需要在个体生物学水平上鉴定 SMYELV—CP是否发挥作用，方法是__________________________。

【推荐2】科研人员通过基因工程等技术，培育出了铁含量比普通大米高60%的转基因水稻，改良了稻米的营养品质。下图为培育转基因水稻过程示意图，请分析回答：

（1）在基因工程中，重组Ti质粒上的潮霉素抗性基因被称为_____基因；铁结合蛋白基因被称为________基因，获取该基因后常用_________技术进行扩增。
（2）为获得较纯净的农杆菌用于该项研究，可采用__________________法对农杆菌进行接种培养。为筛选出含重组Ti质粒的愈伤组织，应在培养基2中添加适量的_____________。
（3）检测培育转基因水稻的目的是否达到，需要检测转基因水稻 ___________。
（4）图中MS培养基中发生的过程为__________，培养基3中发生的过程为_____________。

【推荐3】铁皮石斛是一种名贵中药材，有生津养胃、降血糖和增强免疫力等作用，有效成分为石斛多糖、石斛碱等，温州雁荡山素有“中国铁皮石斛之乡”的美誉。请回答：
(1)用优良品种自然生长的茎快速繁殖铁皮石斛时，给茎消毒时无需使用的是_________ (A.乙醇B.无菌水 C.甘露醇 D.次氯酸钠)。在细胞分裂素相对较多和生长素相对较少的培养基中培养茎的切段，待长出较多的_________，将其进行_________ (处理）后再转入_________培养基中继续培养，直至长成幼苗。这种通过组织培养技术快速繁殖植物的方法，也称为_________。
(2)研究发现，铁皮石斛的生长发育与其体内的内生菌密切相关。为进一步研究内生菌作用, 需要大量内生菌进行相关实验。分离内生菌时最好采用_________ (A.G6玻璃砂漏斗过滤法 B.血细胞计数法 C.划线分离法 D.涂布分离法），再将纯化的内生菌转移到液体培养基中进行_________。
(3)研究发现，200mg/L浓度的卡那毒素能有效抑制铁皮石斛细胞的增殖与分化。科学家欲利用卡那霉素，采用农杆菌转化法对现有铁皮石斛品种进行基因改良。在基因工程操作中,导入受体细胞的_________分子应同时带有目的基因和________基因，这样才能利用含有卡那霉素的培养基将成功导入目的基因的受体细胞筛选出来。
(4)鉴定铁皮石斛的品质，可通过苯酚-浓硫酸法测定石斛多糖的含量。其原理是：石斛多糖水解成单糖并脱水生成糖醛衍生物后，与苯酚缩合生产橙黄色化合物，在490mm处测定光密度值，以不同浓度的葡萄糖溶液为标准溶液建立标准曲线，便可知道样品的石斛多糖含量。这种方法类似于泡菜汁中_____________含量的测定，称之为_____________法。
(5)为高效提取石斛多糖，可在提取液中加入___________，以提高铁皮石斛的出汁率。

【推荐1】回答下列有关基因表达和基因工程问题。
随着科学技术的发展，人类可以根据需求来改造生物的性状，在许多领域取得了可喜的成果。图1表示利用奶牛乳汁生产血清白蛋白的培育过程。

（1）获取②的途径主要有_____________________________。
（2）若将③体外培养，则必要的条件是_________________________。(至少写2个)
（3）受体用未受精的卵细胞的原因是________________________________。
（4）过程③到④常用____________(方法)进行。
（5）⑥与⑦的遗传性状是否相同，原因是_________________________________。
图2为3种质粒和1个含目的基因的DNA片段。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因。EcoRⅠ(0.7 Kb)、PvuⅠ(0.8 Kb)为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离。复制原点是在基因组上复制起始的一段序列。（1 kb＝1000个碱基对长度。）

（6）图2中质粒A、C一般不能作为此目的基因运载体的原因是_____________。
（7）据图分析，要将目的基因和质粒B形成重组质粒，需用图2中_______限制酶。所形成的重组质粒再用EcoR I完全酶切，并进行电泳观察，可出现的片段长度有( )
A．1.1 kb和5.6kb       B． 2.7 kb和4.0kb     C．3.1kb和3.6     D． 3.7kb和3.0kb

【推荐2】某科研小组欲用图1所示的质粒构建人胰岛素基因表达载体，让其在大肠杆菌中表达出人胰岛素前体物质，对人胰岛素基因所在的DNA片段进行测序，发现其两端附近无限制酶EcoRI、BamHI的酶切位点。已知人胰岛素基因表达时以②链为模板，且其3'端存在启动子，图1所示质粒上的amp^R为氨苄青霉素抗性基因，tel^R为四环素抗性基因。请回答下列问题：

(1)可采用_______来获得人胰岛素基因，这一方法需要先针对人胰岛素基因两端的序列来设计引物对。这一方法获得的产物一般通过______进行鉴定，若鉴定发现其中有许多种相对分子质量比人胰岛素基因小的DNA片段，则原因可能是______（答出一点）。
(2)为保证人胰岛素基因能正确连接到用限制酶EcoRI和BamHI处理的图1所示质粒上，且利用表达载体上的启动子在受体菌中以②链为模板进行转录，则应在配对到①链的引物5'端添加6个碱基，序列为5'-_______-3'。
(3)图1质粒上的amp^R和tet^R一般充当基因表达载体上的标记基因，其作用是______。利用质粒上的标记基因，结合微生物的培养，可以淘汰只转入质粒的大肠杆菌而获得被成功转入人胰岛素基因表达载体的受体菌，则应将重组载体导入经________处理后的________（填“不抗氨苄青霉素”“不抗四环素”或“不抗氨苄青霉素和四环素”）的受体大肠杆菌中。

【推荐3】如图为两个优良的基因片段所在的DNA分子，基因1来自植物甲，基因2来自植物乙，图中A、B、C、D代表两个基因片段的两端，科学家试图将两个基因进行拼接形成一个新的融合基因，并将融合基因转入水稻中，使得水稻具有了某种优良性状。Ned I 、EcoRI、 Hind III代表三种不同的限制酶且切割产生的末端各不相同，图中的箭头代表不同酶的酶切位点

（1）首先应选用某一种限制酶对上述两个DNA分子进行切割，选择的这种限制酶是_____，同时还要用______________酶处理才能得到____________端相连的融合基因。
（2）在进行上述操作时，由于提取的DNA分子数量较少，需要利用PCR技术对目的基因片段进行扩增，该技术的原理是模拟生物体内的____________过程。在进行扩增前要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物，利用引物进行目的基因扩增时，若以扩增基因1为例，至少在第________轮循环后才能获得纯目的基因片段（仅含引物及之间的序列）。
（3）将该融合基因导入水稻后，若要保证该基因能在该种水稻中稳定遗传应保证该基因能整合在______________上，若要保证所转入的基因尽可能少发生转移应将目的基因优先转入__________（填“细胞核”或“细胞质”）中，这样才确保转基因生物的安全性。

【推荐1】应用生物工程技术能获得人们需要的生物新品种或新产品。请据图回答下列问题：

(1)在培育转基因牛的过程中，①过程需要的酶及其作用的化学键分别是______，在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必须有______识别和结合的部位，②过程常选取牛的______细胞作为受体细胞。
(2)通常采用PCR技术扩增目的基因，前提是______，步骤包括______、______、______， 在操作步骤中冷却至50℃左右的目的是______。
(3)prG能激发细胞不断分裂，通过基因工程导入该调控基因来制备单克隆抗体，Ⅱ最可能是______细胞，Ⅲ代表的细胞具有______的特点。
(4)在抗虫棉培育过程中，④过程最常用的方法是______，⑤过程所采用技术的原理是______。

【推荐2】启动子可分为组成型启动子和诱导型启动子。35S启动子是组成型启动子，能够持续、高效地启动目的基因在植物各种组织中的表达，但往往也会阻碍植物的生长发育；Rd29A启动子是一种逆境诱导型启动子，沙冬青脱水素基因（AmDHN基因）能使植株具有较强的抗旱作用。科研人员构建Rd29A启动子驱动AmDHN基因表达的载体，过程如图。再利用农杆菌转化法转化“敖汉苜蓿” 耐旱新品种，以期在干旱地区发展首着产业。

请回答：
(1)科研人员扩增Rd29A启动子所设计的引物如下，根据引物的碱基序列及限制酶的识别序列分析，构建载体2时选用的限制酶是__________为了提高构建载体3的成功率，选用__________酶切割载体1、2。上游引物P1：5＇-GACCCGGGTTTCCAAAGATTTTTTTC-3＇下游引物P2：5＇-GAGAGCTCTGGGGTTTTGCTTTTGAATGT-3＇
(2)载体5需先转入__________后再转化苜蓿，转化后应在培养基中添加__________以筛选转化成功的愈伤组织。
(3)为检测转基因苜蓿中AmDHN基因的转录水平，挑选10株转基因植株，利用自来水和20％PEG（模拟干旱条件）处理8h，提取RNA通过RT-PCR检测AmDHN基因和MtActin 基因（一种骨架蛋白基因）的表达水平，其结果如下图：

选择MtActin基因转录水平作为参照的依据是MtActin基因在各种细胞中表达相对恒定。
②自来水处理和20％PEG条件下的AmDHN基因表达水平的差异说明：____________________。

【推荐3】“杂交水稻之父”袁隆平领导的海水稻团队于今年5月在迪拜热带沙漠种植的海水稻测产成功，最高亩产超过500公斤。引起全世界广泛关注。回答下列问题：
（1）若培育转基因海水稻，可将耐盐基因导入高产水稻细胞内培育。要大量获得耐盐基因可采用__________技术。构建的____________________中通常含有标记基因，标记基因的作用是__________________。
（2）将耐盐基因导入水稻细胞常用的方法是______________；检测耐盐基因是否在水稻细胞内中转录成功，通常采用______________技术检测。
（3）目前，以袁隆平院士为首的科研团队利用杂种优势提高产量。基因工程技术相对于杂交育种的突出优点是_________________。通过转基因技术，耐盐基因能在水稻细胞或其他细胞中成功表达的原因是______________________。