【推荐1】实验小组将启动子rd29A和拟南芥植株的抗寒基因DREBI相连后导入大豆，获得了抗寒转基因植株，下图1表示构建重组质粒时所用的载体，已知Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ为四种不同的限制酶，其各自识别的DNA序列如下表所示。回答下列问题：

限制酶	Ⅰ	Ⅱ	Ⅲ	Ⅳ
识别序列及切割位点	↓ GGATCC CCTAGG ↑	↓ TGTACA ACATGT ↑	↓ GTAC CATG ↑	↓ AAGCTT TTCGAA ↑

(1)构建重组质粒过程中最好同时使用__________两种限制酶切割质粒，原因是____________________。
(2)欲将重组质粒导入大豆的愈伤组织细胞中，一般使用__________法导入。培养基中需要加入__________（填“四环素”或“氨苄青霉素”），其作用是____________________。
(3)实验小组进一步研究了不同的温度诱导下转基因植株中抗寒基因DREBI的表达情况，实验结果如图2所示：

从分子水平上检测转基因大豆中DREBI基因的表达产物，可采用的方法是__________。试根据检测结果阐述目的植株导入DREBI基因的优点在于____________________。

【推荐2】人血清白蛋白（HSA）具有重要的医用价值，只能从人血浆中制备。图是以基因工程技术获取重组HSA的两条途径，其中报告基因表达的产物能催化无色物质K呈现蓝色。
据图回答下列问题：

（1） 目的基因的获取与扩增用___________________方法，以从生物材料中提取的DNA作为模板，除要加入引物外，还需要在反应体系中添加的有机物质有 _______________、     _________________ 。循环4次，理论上至少加入______________个引物。
（2） 构建基因表达载体时，需要将目的基因插入到_____________________________中，过程①中需将植物细胞与农杆菌混合后共同培养，之后须转接到含_____________的培养基上筛选出转化的植物细胞。
（3） ③过程中将目的基因导入绵羊受体细胞，采用最多，也是最为有效的方法是______________，还可以使用__________________作为载体，实现转化。
（4） 为检测HSA 基因的表达情况，可提取受体细胞的 __________________，用抗血清白蛋白的抗体进行杂交实验。

【推荐3】2019 年中国科学院神经科学研究所利用 CRISPR—Cas9 基因编辑技术，成功构建了世界首例核心节律基因 BMAL1 敲除猕猴模型，并成功用基因敲除猴的体细胞通过克隆技术培育了5只克隆疾病猴，为节律紊乱相关疾病机理的研究提供了比较理想的动物模型。CRISPR—Cas9 基因编辑系统由单链向导 RNA（sgRNA）和 Cas9 蛋白组成。回答下列问题：
（1）科学家常用______法将 CRISPR—Cas9 基因编辑系统导入猕猴细胞，编辑系统利用 sgRNA 来识别靶基因 DNA，并引导 Cas9 蛋白剪切 DNA，使靶基因发生改变，实现基因敲除。sgRNA 能识别靶基因 DNA 的原因是______________________ 。
（2）在体外培养猕猴体细胞时，需要一定比例的 O₂ 和 CO₂，故通常采用________或_________________________（填实验器材），将其置于 CO₂ 培养箱中进行培养。所使用的培养基属于_________________________（填“合成”或“天然”）培养基，培养基除了灭菌外，还需要通过_____________________________来保证无菌无毒环境。
（3）进行体细胞克隆选择去核卵母细胞作为受体细胞，可能原因是 _____________________   （答出两点）。
（4）克隆猴被用于人类疾病研究与治疗中所具有的突出优点是_____________________。（答出一点）

【推荐3】人体内的t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。如图所示为科学家培育转入t-PA蛋白基因山羊的过程，该转基因山羊可大规模生产t-PA蛋白（从乳汁中提取）。亮氨酸是维持山羊细胞生命活动必不可少的一种必需氨基酸，其合成与质粒 S中的 Leu基因有关，GFP 基因控制合成绿色荧光蛋白。回答下列问题。

(1)A 为mRNA，则过程①需要的酶是________。过程②需使用的限制酶是________。
(2)为检测基因表达载体是否构建成功，培养基中不应含有________。将山羊成纤维细胞培养一段时间后，筛选出________（填“显示”或“不显示”）绿色荧光的细胞用于过程⑤。
(3)心梗患者注射大剂量的经基因工程生产的t-PA 蛋白会诱发颅内出血，将t-PA 蛋白第84位的半胱氨酸替换成丝氨酸后，能显著降低出血的副作用。据此，需要先对________进行改造，进而制造出性能优异的改良t-PA 蛋白，该过程即________工程。
(4)过程⑨表示________。该过程之所以能够成功依赖于一定的生理学基础，即________（答一点）。

【推荐1】甲、乙是染色体数目相同的两种二倍体药用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B．某研究小组拟利用植物体细胞杂交技术培育同时含有A和B的新型药用植物。回答下列问题：

   

(1)植物体细胞杂交的第①步是去掉______ ，分离出有活力的原生质体。目前此步骤最常用的方法是酶解法，也就是在温和的条件下用______ 酶等分解植物的细胞壁。
(2)②过程的发生，必须进行人工诱导。人工诱导原生质体融合的物理方法是：利用______ 等（写一种即可）促使原生质体融合；化学方法是：用______ 试剂作为诱导剂诱导融合。动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同，诱导融合的方法类似，不同的是还常用到______ 诱导动物细胞的融合。
(3)③表示融合后的原生质体再产生新的细胞壁，新细胞壁的产生与细胞内______ （细胞器）有密切关系。形成的融合细胞进一步经过④ ______ 形成愈伤组织，然后经过⑤ ______ 形成完整的杂种植株。从杂种细胞培养成杂种植株，这种培养技术称为______ 。
(4)上述杂种植株属于_____ 倍体，上述杂种植株是______ （可育/不可育）的。

【推荐2】下图表示利用基因工程培育抗虫棉的过程，请据图回答下列有关问题：

（1）若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—↓GATC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，那么在①过程中，应用限制酶________切割质粒，用限制酶_______切割抗虫基因。①过程在____（体内/体外）进行。
（2）将通过②过程得到的大肠杆菌涂布在含有________________的培养基上，若能够生长说明已导入了普通质粒或重组质粒，反之则说明没有导入。
（3）要确定抗虫基因导入后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，则在个体水平上的鉴定过程可简述为：____________________________________________________。经筛选分析，该植株细胞中含有一个携带抗虫基因的DNA片段，因此可以把它看作是杂合子。理论上，该转基因植株自交产生的F₁代中，仍具有抗虫特性的植株占总数的_________。
（4）⑤过程所用的现代生物技术称为__________________，从遗传学角度来看，根据细胞通过⑤过程，能形成棉植株的根本原因是细胞具有______________________________________

【推荐3】小麦纯合自交系川农16具有穗大、粒多、抗病等优良特性，可通过导入抗除草剂基因bar使其获得抗除草剂性状，具体技术路线如图所示。其中抗除草剂基因bar来源于野生型植物甲，抗草甘膦基因aroA是选择标记基因，报告基因能在特定情况特定组织中表达。

(1)图中构建表达载体的过程需要用两种不同的限制酶切割，比用一种限制酶切割的优点是_______。很多启动子具有物种特异性，在图中Ti质粒的T-DNA中插入除草剂抗性基因bar时其上游启动子应该选择_______。
A．野生植物甲启动子                    B．农杆菌启动子                    C．小麦川农16的启动子
(2)农杆菌转化愈伤组织时，T-DNA携带插入其内的片段转移到受体细胞。筛选已转化的愈伤组织，需使用含_________的选择培养基。但在转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化愈伤组织也可能在选择培养基上生长。含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能催化无色物质K呈现蓝色。用K分别处理以下愈伤组织，出现蓝色的是_________。
①无农杆菌附着的未转化愈伤组织
②无农杆菌附着的转化愈伤组织
③农杆菌附着的未转化愈伤组织
④农杆菌附着的转化愈伤组织
(3)转化后经筛选的愈伤组织需转换培养基继续培养，此时培养基需添加的植物激素为________，部分接种在无激素培养基上的芽也能长根，原因是___________。培养获得的转基因植株不一定稳定遗传，须将转基因植株进行__________，继续筛选，最终选育出抗除草剂纯合系。
(4)T-DNA序列可随机插入到愈伤组织DNA中导致插入位点基因功能丧失。上述实验中偶然获得了一个突变体F，产量明显低于小麦川农16。研究者用某种限制酶处理突变体F的DNA，得到图2，若以此为模板进行PCR扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列，需选择的引物是__________。