【推荐1】蜂毒前溶血肽原是prepromelittin基因(以下简称PL基因)的表达产物，在蜜蜂体内合成后首先加工成蜂毒溶血肽原(蜂毒肽前体蛋白)，被进一步水解形成分泌蛋白蜂毒肽。与蜂毒肽相比，蜂毒前溶血肽原具有较大的溶解度，且对细胞的破坏能力小，可利用基因工程方法合成蜂毒肽的前体产物。
(1)生产蜂毒肽常选用微生物做受体细胞，优点是_____(答出两点即可);原核细胞_____(填"能"或“不能")将蜂毒溶血肽原加工成蜂毒肽，原因是_____。
(2)为了解决(1)中的问题，对蜂毒前溶血肽原基因进行改造(如下图1)，以便后期用羟胺(一种能专一性裂解特定两个氨基酸之间肽键的化合物)对生产出的蜂毒前溶血肽原进行加工。根据图1推测羟胺的识别位点是_____。为实现最终生产有活性的蜂毒肽，与原DNA序列相比，改造后的序列末端还删除了Gly的对应编码链序列_______，推测删除的理由是_____。改造后的DNA编码区序列长度为_____bp
   
注：①阴影：蜂毒肽序列；方框：Asn-Gly位点；
②图1中所示的“原DNA序列”为蜂毒前溶血肽原的编码区序列的编码链；
③甲硫氨酸，缩写为M，由起始密码子AUG编码；丙氨酸(Asn)，缩写为N;
④甘氨酸(Gly)，缩写为G，由密码子GGU、GGC、GGA、GGG编码。
⑤终止密码子UAA、UGA和UAG
(3)根据改造后的基因序列，利用人工化学合成方法进行全基因合成，设计并合成引物对合成基因进行PCR扩增，引物序列的长度越长、GC含量越高，PCR过程中退火温度的设定值越_____。将PCR产物和pGEX-4T-1载体利用酶_____进行基因表达载体的构建，获得蜂毒前溶血肽原与GST(一种标签蛋白)融合表达重组质粒pGEX-4T-1/PPMe.(见图2)。扩增PL基因时设计了引物对M1和M2，其中M1的部分序列是：5'-GAATTC-3'且EcoRI的识别序列是GAATTC，请续写出该引物的后8个碱基5'_____3'。
   
(4)将重组表达载体转化至_____(“含有”或“不含有”)pGEX-4T-1/PPMel的大肠杆菌的感受态细胞，借助PCR和电泳鉴定是否转化成功：凝胶中DNA分子的迁移速率与_____有关(答2点)。
(5)若培育相应的转基因植物；常用农杆菌转化法，需将目的基因插入质粒的_____中，最后通过植物组织培养技术培育转基因植株。

【推荐2】二十碳五烯酸（EPA）能促进体内饱和脂肪酸代谢，是人体自身不能直接从头合成但又不可缺少的营养物质。研究人员利用转基因技术从海洋细菌中提取了EPA合成途径的关键基因pfaB，并将其导入酵母菌内，通过酵母菌发酵生产EPA。请回答下列问题：

(1)利用PCR技术扩增pfaB基因时，需要选用图1中的引物______（填序号），引物的作用是______。
(2)图2所示的两种引物中，引物______设计不合理。若将pfaB基因扩增n次，共需要引物______个。
(3)构建基因表达载体时，为使pfaB基因成功表达，应将其插入载体的______之间。

【推荐3】DNA疫苗是利用基因工程等技术，将编码病毒的保护性抗原蛋白基因插入能在真核系统中表达的质粒上，构建重组质粒，再将重组质粒导入人体内表达出保护性抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答，达到预防相应病毒感染的目的。图1为病毒的保护性抗原蛋白基因，图2为质粒结构示意图，请回答下列问题：

(1)图2中，标记基因的作用是_____________；作为基因工程的载体，除图示标明的结构外，还需要具备的结构有____________。在基因工程中使用的载体除质粒外，还有_____________。
(2)限制酶EeoRⅠ能识别GAATTC序列，并在G与A之间切开磷酸二酯键产生____________末端，这是利用了酶的____________性。构建DNA疫苗时，最好选用限制酶____________切割目的基因和质粒。
(3)一般利用_____________法将重组质粒导入受体细胞。欲检验人或动物体内是否具有了抗原蛋白，在分子水平上检测的方法是从转基因人或动物中提取蛋白质，进行_____________。

【推荐1】人类在预防与诊疗传染性疾病的过程中，经常使用疫苗和抗体。已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，疫苗生产和抗体制备的部分流程如下图：

(1)过程①代表的是____________。
(2)过程③构建A基因重组载体时，必须使用限制性核酸内切酶和____________两种工具酶。由过程③构建A基因重组载体，其组成除了目的基因外，还必须有启动子、终止子、_________以及复制原点等。
(3)过程④要检测A基因是否进入受体细胞，常用的方法是________________法；要检测A基因在受体细胞内是否翻译出蛋白质，需用________________法。
(4)与血清抗体相比，单克隆抗体突出的优点是______________，并能大量制备。
(5)单克隆抗体的制备过程中，运用了动物细胞工程中的_____________和____________两大技术。
(6)单克隆抗体的制备过程中，两次筛选的目的不同，其中第二次筛选的目的是筛选出______。筛选时所用的培养基是特定的_______________培养基。
(7)举例说出基因工程培育转基因植物的过程中，微生物能起到的重要作用有________、_________。

【推荐3】研究人员利用基因工程借助大肠杆菌生产人的生长激素。回答下列问题。
（1）借助PCR技术可在短时间内大量扩增目的基因，原因之一是利用了____酶。
（2）要使目的基因在大肠杆菌细胞内稳定存在并表达，需要借助质粒载体，原因是______。将目的基因导入大肠杆菌，常用____处理细胞，使其成为感受态。
（3）研究人员在大肠杆菌提取液中未能检测到生长激素，但在细胞中检测到生长激素基因，推测可能是转录或翻译过程出错，通过实验进行判断的方法及预期结果是________。
（4）能否利用基因工程通过大肠杆菌直接生产人体细胞膜上的糖蛋白？请做出判断并说明理由_________。

【推荐1】发根农杆菌的Ri质粒是一种植物遗传转化系统，其有3个功能区：①T-DNA区是Ri质粒上唯一整合到植物基因组上的DNA片段；②Vir毒性蛋白区是发根农杆菌实现高效侵染所必需的区域；③Ori区即复制起始区与功能代谢区。常用的质粒载体pCAMBIA1301在大肠杆菌和发根农杆菌中都能生存和克隆，并且自身携带潮霉素抗性基因以及可以替换T-DNA的DNA片段，经处理后质粒pCAMBIA1301也可具备T-DNA。部分转化过程如图所示。

请回答下列问题：
（1）限制性核酸内切酶能识别图中LB和RB的酶切位点，并能使1个pCAMBIA1301质粒的_____个磷酸二酯键断开。
（2）应用过程中，将目的片段插入到pCAMBIA1301质粒的_______________中，再将构建好的重组质粒转入发根农杆菌细胞中。要确定重组质粒是否被成功导入发根农杆菌，可在培养发根农杆菌一段时间后，利用pCAMBIA1301上自身携带的_____________进行鉴定，也可利用基因探针通过_________________技术进行检测。
（3）可分别用70%乙醇和_________________溶液浸泡处理植物组织，并使其脱分化形成愈伤组织，再用重组发根农杆菌对其进行侵染，之后进行脱菌培养，然后以适当配比的________________________诱导，最终可获得转基因植株。
（4）图中Ri质粒上的T-DNA片段有缺损，因此无法被转化至植物细胞内，但Ri质粒上的__________仍可对侵染过程起到辅助激活作用。若Ri质粒结构完整，其功能类似于根瘤农杆菌中的_______________。

【推荐2】米中铁含量极低，科研人员通过基因工程等技术，培育出了铁含量比普通大米高60%的转基因水稻，改良了稻米的营养品质。下图为培育转基因水稻过程示意图。

（1）农杆菌中合成的铁合蛋白与动物细胞中的铁合蛋白完全相同，这一现象说明__________。
（2）为了筛检成功导入重组质粒的农杆菌，1号培养基需要________________。诱导组织细胞失去分化的培养基是________号培养基。
（3）让农杆菌侵入愈伤组织而非水稻胚与幼苗。其主要原因有__________
A. 胚与幼苗中导入重组质粒的细胞较难发育成完整转基因植株   
B.愈伤组织细胞膜因为损伤较多而有利于接受重组质粒
C.3号培养基的作用主要是促进愈伤组织的细胞接受重组质粒   
D.转基因水稻植株须由转基因细胞分裂与分化而形成   
（4）⑤至⑥的过程，属于_________________技术。
下图为质粒、含目的基因的DNA及其有关限制酶的作用位点，

（5）为提高实验的效能，应采用限制酶____________处理Ti质粒和含目的基因的DNA；限制酶作用于DNA分子的________________________之间的化学键。   
对Ti质粒采用相关限制酶完全酶切后的DNA片段长度如下表；

（6）若独立用EcoRⅡ完全酶切，能得到的DNA片段数（不定向组合）及其长度是是________
   A.6Kb、44Kb          B.22Kb、22Kb、6Kb            C.22Kb、28Kb          D.12Kb、38Kb

【推荐3】基因打靶技术是建立在基因同源重组（在2个DNA分子的同源序列之间直接交换的一种重组）技术以及胚胎干细胞技术的基础上而发展起来的一种分子生物学技术。请结合图示回答下列有关问题：

注：neo^r是新霉素抗性基因：tk基因的表达可基因组DNA以使无毒的丙氧鸟苷代谢为毒性物质，导致细胞死亡。
(1)将目的基因和与细胞内靶基因同源的DNA片段都重组到______上，构建打靶载体（基因表达载体）。
(2)打靶载体测序验证正确后，利用______酶，将之线性化，以提高重组率。通过______技术将打靶载体导入胚胎干细胞，这样打靶载体和与细胞内靶基因同源的区段就有机会发生同源重组。
(3)为了筛选发生同源重组的细胞，可在培养液中加入______，最后还需要通过______技术鉴定同源重组的细胞（去除靶基因），将这样的细胞通过动物细胞培养后，获得大量打靶成功的细胞。其中，暂时不用的细胞进行______保存。

【推荐1】下图甲在不同光照条件下测定的某种植物光合速率以O₂释放量为测定指标的变化情况；图乙表示夏季晴朗的一天，某种绿色植物在24小时内O₂吸收和释放速率的变化示意图（单位：mg/h），A、B点对应时刻分别为6点和19点。请回答：

（1）提取绿叶中的色素时加入___________可防止研磨时色素被破坏，叶绿体中含量最多的色素主要吸收___________________光。
（2）图甲中bc段限制叶片光合速率的最主要环境因素是_______________，此时提高环境中CO₂的浓度，光合速率将________________(明显增大/基本不变/明显减小)，在图甲中cd对应时段，植物体内有机物总量的变化情况是_____________________。
（3）乙图中测得该植物一昼夜的O₂净释放量为300mg，假设该植物在24小时内呼吸速率不变，则该植物一天通过光合作用产生的O₂总量是________mg，光合作用速率最高时，光合作用每小时利用CO₂的量是_________mg。
（4）如要对某绿色植物进行植物组织培养，培养基中的细胞分裂素和生长素用量的比值________（填“高”、“低”、“相当”）时，有利于芽的分化，对培养基彻底灭菌时，应采取的灭菌方法是_________________。

【推荐2】美国科学家将分离得到的成熟的胡萝卜根的韧皮部细胞进行培养，由单个细胞发育成了完整的新植株，过程图解如下。回答与之有关的问题：

（1）科学家所用的这种生物技术叫做____________。B过程称为______________，C过程称为__________。
（2）通过B过程产生的愈伤组织的细胞与根的韧皮部细胞，在染色体的数目上是否相同？_____；染色体上所含的遗传物质是否相同？_____；细胞的形态结构是否相同？______。

【推荐3】回答下列有关植物组织培养的问题。
（1）用于植物组织培养的植物材料称为________。
（2）组织培养中的细胞，从分化状态转变为未分化状态的过程称为________。
（3）在再分化阶段所用的培养基中，含有植物激素X和植物激素Y,逐渐改变培养基中这两种植物激素的浓度比，未分化细胞群的变化情况如下图所示，据图指出两种激素的不同浓度比与形成芽、根、愈伤组织的关系：
①当植物激素X与植物激素Y的浓度比等于1时，______________________________；
②________________________________________________________；
③________________________________________________________；

（4）若植物激素Y是生长素，在植物组织培养中其主要作用是________；则植物激素X的名称是________________。
（5）生产上用试管苗保留植物的优良性状，其原因是________________________________。