转基因动物是指携带外源基因并能表达和遗传的一类动物,Palmiter等将大鼠的生长激素基因和小鼠的mMT启动子融合,获得了“超级小鼠”。回答下列问题:
(1)将生长激素基因导入小鼠体内常用的方法是___________ ,在导入目的基因前要构建重组质粒,重组质粒包括目的基因、启动子、_______ 和标记基因等,其中标记基因的作用是_________________________ 。
(2)进行早期胚胎培养时,需要加入的物质中除了各种营养物质外,还需要添加______ 等天然成分,早期胚胎培养要置于CO2培养箱中,其气体组成为___________________ 。
(3)转基因动物的培养需要对胚胎进行移植,胚胎移植技术的优点是________________ 。
(4)欲获得基因型完全一样的转基因动物,可利用胚胎分割技术,进行胚胎分割应选用的时期是_____________ 或囊胚期,其中对囊胚期进行分割时要将内细胞团均等分割,目的是___________________________ 。
(1)将生长激素基因导入小鼠体内常用的方法是
(2)进行早期胚胎培养时,需要加入的物质中除了各种营养物质外,还需要添加
(3)转基因动物的培养需要对胚胎进行移植,胚胎移植技术的优点是
(4)欲获得基因型完全一样的转基因动物,可利用胚胎分割技术,进行胚胎分割应选用的时期是
更新时间:2020-03-12 09:14:18
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【推荐1】普通烟草转入抗盐基因培育抗盐烟草的过程如图所示.已知含抗盐基因的DNA和质粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切位点,质粒上另有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因.
(1)构建重组质粒时,应选用限制酶______ 对______ 进行切割,以保证它们定向连接.限制酶切断的是DNA分子中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的键,具体说就是______ 和______ 之间的键。
(2)如果目的基因直接注入烟草细胞,一般会被烟草细胞______ .质粒的作用是______ 。
(3)切割后的目的基因与质粒由______ 酶连接成重组质粒.筛选导入重组质粒的细菌,应在其培养基中加入______ ,理由是______ 。
(4)从个体水平鉴定抗盐转基因烟草是否培育成功的方法是______ 。
(1)构建重组质粒时,应选用限制酶
(2)如果目的基因直接注入烟草细胞,一般会被烟草细胞
(3)切割后的目的基因与质粒由
(4)从个体水平鉴定抗盐转基因烟草是否培育成功的方法是
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【推荐2】马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ除作为植物储藏蛋白外,还可以作为植物抵抗昆虫侵害的重要手段。科研人员克隆了马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ基因的cDNA(PINI),构建了基因表达载体(如下图),并将其转化到水稻中,使水稻自身产生抗虫蛋白而达到抗虫目的。请回答问题。
(1)马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ在__________ (填细胞结构)中合成后运输到液泡中储存,以免被细胞中的__________ 降解;昆虫取食植物,马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ与昆虫消化道内的蛋白酶形成酶—抑制剂复合物,最终导致昆虫因缺乏代谢中必需的__________ 而死亡。
(2)过程①表示__________ 。
(3)为了便于扩增的PIN Ⅱ基因与载体1连接,需要在引物F和引物R的__________ 端分别添加AAGCTT序列和________ 序列;PIN Ⅱ扩增完成最后一次循环后,仍需在72℃下继续延伸5min,其主要目的是__________ 。
(4)下列物质中,属于过程③正常进行所必需的有_________ (填字母)。
a.限制酶Xho Ib.限制酶Hind Ⅲc.限制酶Xba Id.缓冲液e.T4DNA连接酶f.Taq DNA聚合酶
(5)过程⑦筛选时,首先将愈伤组织取出,用无菌水清洗两遍,以除去附着于愈伤组织表面的__________ 菌液,然后转移到含__________ 的选择培养基中进行暗培养,挑选抗性愈伤组织诱导再分化。
(6)马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ具有诱导表达的特性。转化的PIN Ⅱ基因仅在植物受到伤害(如虫害)后表达,其生物学意义在于既能减少__________ 的浪费,又能延缓害虫对马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ产生__________ 。
(1)马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ在
(2)过程①表示
(3)为了便于扩增的PIN Ⅱ基因与载体1连接,需要在引物F和引物R的
(4)下列物质中,属于过程③正常进行所必需的有
a.限制酶Xho Ib.限制酶Hind Ⅲc.限制酶Xba Id.缓冲液e.T4DNA连接酶f.Taq DNA聚合酶
(5)过程⑦筛选时,首先将愈伤组织取出,用无菌水清洗两遍,以除去附着于愈伤组织表面的
(6)马铃薯蛋白酶抑制剂Ⅱ具有诱导表达的特性。转化的PIN Ⅱ基因仅在植物受到伤害(如虫害)后表达,其生物学意义在于既能减少
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【推荐3】土壤农杆菌能将自身Ti质粒的T-DNA整合到植物染色体DNA上,诱发植物形成肿瘤。T-DNA中含有植物生长素合成酶基因(S)和细胞分裂素合成酶基因(R),如图1所示,它们的表达与否能影响相应植物激素的含量,进而调节肿瘤组织的生长与分化。基因工程常用Ti质粒作为运载体,图2表示抗虫棉培育中使用的三种限制酶A、B、C的识别序列以及Ti质粒上限制酶切割位点的分布,抗虫基因内部不含切割位点,两侧标明序列为切割区域。请分析回答下列问题:
(1)酶C切割DNA后形成的黏性末端是__________ 。
(2)据图2分析,切取抗虫基因时,使用限制酶______ ,切割Ti质粒时,使用限制酶________ 。
(3)为了获得重组质粒,将切割后的质粒与目的基因片段混合并加入________ 酶。成功构建的重组质粒中含有限制酶A的识别位点__________ 个,若用酶C处理该重组质粒,将得到________ 个DNA片段。
(4)若抗虫基因插入的位置在R基因内部,筛选出________ 植株即是成功导入抗虫基因的棉花植株。
(1)酶C切割DNA后形成的黏性末端是
(2)据图2分析,切取抗虫基因时,使用限制酶
(3)为了获得重组质粒,将切割后的质粒与目的基因片段混合并加入
(4)若抗虫基因插入的位置在R基因内部,筛选出
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【推荐1】P450是石油降解的关键酶,用SalⅠ和NdeⅠ联合酶切获得的P450基因,与下图所示的质粒(pCom8)重组,导入土著菌种Y9,获得了基因工程菌P450/Y9。图中mel是黑色素合成基因,该基因表达能使白色的菌落变成黑色,aacCl是庆大霉素(一种抗生素)抗性基因,限制酶NdeⅠ、XhoⅠ和SspⅠ在该质粒上均只有一个酶切位点。下表表示几种限制酶的识别序列和切割位点,据图回答下列问题:
(1)构建pCom8重组质粒时,需要用__________________________ (限制酶)对图示质粒进行处理,才能与__________________________ 在DNA连接酶的作用下形成重组质粒。基因工程中用两种不同的限制酶切割目的基因和质粒,获得不同的黏性末端的主要目的是防止_________________________ 和反向连接。
(2)为了扩增重组质粒,需将其转入用__________ 预先处理的土著菌种Y9中,提高质粒导入率,以便获得更多基因工程菌P450/Y9。为了筛选出转入了重组质粒的基因工程菌P450/Y9,应在筛选平板培养基中添加______________ 。作为载体的质粒除了含有标记基因,还应该含有____________________ (至少写两个)。
(3)为检测基因工程菌降解石油能力的大小,可观测的指标是____________________________ 。土著菌种Y9不能降解石油,但转入上述构建好的表达载体后则获得降解石油的能力,这是因为________________ 。
限制酶 | SalⅠ | Nde Ⅰ | Xho Ⅰ | Ssp Ⅰ |
识别序列及切割位点 |
(1)构建pCom8重组质粒时,需要用
(2)为了扩增重组质粒,需将其转入用
(3)为检测基因工程菌降解石油能力的大小,可观测的指标是
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【推荐2】请根据有关生物工程方面的知识回答下列问题:
(1)基因工程的核心是___________ ,所需的工具酶有___________ 。从分子水平上看,基因工程得以实现的遗传学物质基础是:______________________ (写出两点)。基因工程中限制酶切割后的运载体与目的基因能再次拼接的理由是_____________________ 。
(2)将目的基因导入植物细胞最常见的方法是___________ , 原理是利用其菌体中质粒的T- DNA片段可___________ 的特点;将目的基因导入动物细胞最有效的方法是___________ 。
(3)动物细胞工程中___________ 技术是其他动物细胞工程技术的基础。动物细胞工程的一项重要应用是制备单克隆抗体,在该过程形成的杂交瘤细胞中发生的遗传信息流动有DNA→DNA、___________ 。
(4)胚胎工程中,胚胎移植选择受体的条件是___________ 并具有健康体质和正常繁殖能力,受体对移入子宫的外来胚胎基本不发生___________ ,这为胚胎在受体内的存活提供了可能。为了获得产奶量高的奶牛,需取囊胚期___________ 细胞做性别鉴定。若对囊胚进行胚胎分割,要注意__________ ,否则影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。
(1)基因工程的核心是
(2)将目的基因导入植物细胞最常见的方法是
(3)动物细胞工程中
(4)胚胎工程中,胚胎移植选择受体的条件是
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【推荐3】2019年新冠疫情爆发以来,疫情防控成为社会关注的热点问题。下图所示某科研团队运用基因工程研制新冠病毒疫苗的过程。质粒中lacZ基因编码的酶可以分解X-gal产生蓝色物质,使菌落呈现蓝色,否则菌落为白色。回答下列问题:____ 过程获得cDNA(互补DNA),然后借助特异性引物进行扩增,PCR体外扩增的原理是____ ,其中PCR需要____ 酶。
(2)图中过程①有两种限制酶选择方案(注:图中几种限制酶切割产生的末端不同):方案一:选用一种限制酶____ ;方案二:选用____ 两种限制酶;方案二优于方案一的原因是____ 。
(3)若将重组质粒导入大肠杆菌,需要用一定浓度的____ (离子)处理大肠杆菌,使细胞处于能吸收周围DNA分子的生理状态;若将重组质粒导入双子叶植物细胞和裸子植物,则最常用的方法是____ 。
(4)筛选含重组质粒的大肠杆菌时,须在培养大肠杆菌的通用培养基中加入____ ,培养一段时间后,挑选出____ 色的菌落进一步培养获得大量目的菌。若想在分子水平上检测目的基因是否翻译为蛋白质,则通常采用____ 方法。
(1)获取目的基因时,首先提取新冠病毒的RNA,再通过
(2)图中过程①有两种限制酶选择方案(注:图中几种限制酶切割产生的末端不同):方案一:选用一种限制酶
(3)若将重组质粒导入大肠杆菌,需要用一定浓度的
(4)筛选含重组质粒的大肠杆菌时,须在培养大肠杆菌的通用培养基中加入
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【推荐1】动物乳腺生物反应器是基于转基因技术平台,使外源基因导入动物基因组中并定位表达于动物乳腺,利用动物乳腺天然、高效合成并分泌蛋白的能力,在动物的乳汁中生产一些具有重要价值产品的转基因动物的总称。
(1)动物乳腺生物反应器除了用到基因工程技术外,还需要用到________ (要求答两项)等技术。
(2)构建好的基因表达载体运用_______________ 注入到受精卵中,此受精卵的性染色体组成是_____________ 。
(3)外源蛋白基因的表达需要与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,其原因是_____________ 。
(4)若要检测外源药用蛋白基因表达是否成功,可利用______________ ,表达后的蛋白经过纯化,之后还需要与天然产品的________ 进行比较。
(1)动物乳腺生物反应器除了用到基因工程技术外,还需要用到
(2)构建好的基因表达载体运用
(3)外源蛋白基因的表达需要与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,其原因是
(4)若要检测外源药用蛋白基因表达是否成功,可利用
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【推荐2】2型糖尿病(T2DM)病因复杂,多是胰岛素拮抗引起机体对胰岛素的敏感性降低。患者表现出相对缺乏胰岛素、胰岛素抵抗等,其发病过程如图所示。请分析回答:
(1)据图分析,对糖尿病前期高危人群应检测其________ 血糖浓度。糖尿病前期 15~10年间人体已出现胰岛素抵抗但仍能保持血糖相对正常,主要原因是________ 。
(2)对糖尿病前期人群如果不加干预大部分都会发展成为糖尿病,据图分析主要原因是胰岛B细胞因为________ 而功能衰竭,造成胰岛素水平过低而引发糖尿病。
(3)糖尿病患者常表现“三多一少”症状,其中多饮的原因是患者血糖浓度过高使细胞外液渗透压________ ,直接引起下丘脑渗透压感受器产生兴奋并在_______ 产生渴觉促进主动饮水;多尿的原因是血糖浓度过高造成肾小管与集合管腔中________ ,直接抑制了水分的重吸收。
(4)抗人胰岛素单克隆抗体可用于快速检测血清胰岛素的含量。
①制备抗人胰岛素单克隆抗体时,需将________ 注射到健康成熟小鼠体内,获取能分泌抗人胰岛素抗体的B淋巴细胞,再将其与小鼠的________ 融合,以制取杂交瘤细胞。
②细胞融合完成后,需用特定的________ 筛选出杂交瘤细胞。为检验得到的杂交瘤细胞能否分泌抗人胰岛素抗体,可用________ 技术检测杂交瘤细胞培养液中的抗体。
③在体外条件下,当培养瓶中的小鼠杂交瘤细胞达到一定密度时,需进行_______ 培养以得到更多数量的杂交瘤细胞。
(1)据图分析,对糖尿病前期高危人群应检测其
(2)对糖尿病前期人群如果不加干预大部分都会发展成为糖尿病,据图分析主要原因是胰岛B细胞因为
(3)糖尿病患者常表现“三多一少”症状,其中多饮的原因是患者血糖浓度过高使细胞外液渗透压
(4)抗人胰岛素单克隆抗体可用于快速检测血清胰岛素的含量。
①制备抗人胰岛素单克隆抗体时,需将
②细胞融合完成后,需用特定的
③在体外条件下,当培养瓶中的小鼠杂交瘤细胞达到一定密度时,需进行
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【推荐3】我国在抗击新冠肺炎领域取得了举世瞩目的成就,三类具有自主知识产权的疫苗都有较好的安全性和免疫源性(能引起免疫应答的性能),阅读下面材料回答问题:
疫苗1:灭活疫苗(Vero细胞)。是将用Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)培养扩增后的活病毒通过物理和化学的方法杀灭以后,经过系列纯化技术制备的疫苗。
疫苗2:复制缺陷型腺病毒载体疫苗。将新冠病毒的S蛋白基因整合到复制缺陷型腺病毒DNA中,形成能表达S蛋白的重组复制缺陷型腺病毒,作为疫苗注射到健康人体内。
疫苗3:重组新型冠状病毒疫苗(CHO细胞)。将新冠病毒S蛋白基因重组到中国仓鼠卵巢细胞(CHO)基因组内,经CHO细胞表达形成S蛋白作为疫苗。
(1)疫苗1的免疫源性要稍高于另外两种疫苗的原因是_____ 。从疫苗生产过程的角度看:疫苗1的生产车间的安全等级高于另外两种疫苗的原因是_____ 。
(2)从生物工程的角度看,生产过程中需要用到基因工程技术的是?_____ (用“疫苗1/疫苗2/疫苗3”作答)﹔都要用到细胞培养技术的是:_____ (用“疫苗1/疫苗2/疫苗3”作答);
(3)培养抗原表达细胞系(Vero细胞或CHO细胞)时,培养基中要加入糖类、氨基酸等有机物,作用是_____ ;培养箱中CO2浓度为5%。作用是_____ 。在培养过程中,Vero细胞分裂生长到细胞表面相互接触时,细胞会停止分裂增殖,长成致密的单层,这种现象称为_____ ;若需要进行传代培养,需要用_____ 酶等处理后再收集细胞制成新的细胞悬液。
疫苗1:灭活疫苗(Vero细胞)。是将用Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)培养扩增后的活病毒通过物理和化学的方法杀灭以后,经过系列纯化技术制备的疫苗。
疫苗2:复制缺陷型腺病毒载体疫苗。将新冠病毒的S蛋白基因整合到复制缺陷型腺病毒DNA中,形成能表达S蛋白的重组复制缺陷型腺病毒,作为疫苗注射到健康人体内。
疫苗3:重组新型冠状病毒疫苗(CHO细胞)。将新冠病毒S蛋白基因重组到中国仓鼠卵巢细胞(CHO)基因组内,经CHO细胞表达形成S蛋白作为疫苗。
(1)疫苗1的免疫源性要稍高于另外两种疫苗的原因是
(2)从生物工程的角度看,生产过程中需要用到基因工程技术的是?
(3)培养抗原表达细胞系(Vero细胞或CHO细胞)时,培养基中要加入糖类、氨基酸等有机物,作用是
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【推荐1】根据下列有关胚胎工程的示意图,分析回答下列问题:
(1)C细胞应选择处于________________ 期的细胞;体外受精前要对B细胞进行________ 处理。B细胞和C细胞在体外受精后,应将受精卵移入发育培养液中继续培养,以检查________________ 。
(2)将早期胚胎移入D羊子宫内的技术叫________ ,D羊对外来胚胎基本不发生________ ,这使外来胚胎在其体内存活成为了可能。在此过程中若想得到具有相同遗传物质的两个子代E羊,可通过________ 技术来实现。
(3)图中的早期胚胎通常处于________ 阶段。获得的早期胚胎若暂不移植给受体,可使用________ 法保存。
(4)从早期胚胎中分离出的ES细胞可诱导分化出不同的组织细胞,这是因为在功能上,ES细胞具有____________ 。ES细胞具有体积小、________ 、核仁明显的特点。
(1)C细胞应选择处于
(2)将早期胚胎移入D羊子宫内的技术叫
(3)图中的早期胚胎通常处于
(4)从早期胚胎中分离出的ES细胞可诱导分化出不同的组织细胞,这是因为在功能上,ES细胞具有
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【推荐2】我国研究人员在世界上率先经体细胞核移植技术培育出第一批灵长类动物——食蟹猕猴,这种食蟹猕猴可作为研究癌症等人类疾病的动物模型,该实验的突破之处是使用了去甲基化酶(Kdm4d)的mRNA,操作过程如下图所示。请回答下列问题。
(1)克隆猴的培育成功利用的主要原理是体细胞细胞核具有______ 。
(2)进行过程①时,培养成纤维细胞必须提供严格的无菌、无毒条件,为了达到这样的效果,培养过程中采取的措施有______ 。
(3)图中的②过程通过______ 操作将卵母细胞的“核”去除,此时的卵母细胞所处的时期是______ ,去除的“核”实质上是______ 。如果取胚胎细胞的核进行移植,更容易获得成功,原因是______ 。
(4)过程⑤中,对代孕雌性食蟹猕猴需要进行的处理是______ ,使其处于能够接受外来胚胎的状态。若想进一步提高胚胎的利用率,可采用胚胎分割技术,对获得的胚胎进行分割时,应注意将______ 进行均等分割。
(5)为了确定Kdm4d的mRNA的作用,研究人员做了两组实验,其中A组用正常培养液培养融合细胞,B组用正常培养液培养注入了Kdm4d的mRNA的融合细胞。实验结果如图所示,图中X为融合细胞发育成的胚胎数,Y为囊胚数,Z为内细胞团数。实验结果表明,______ 。
(1)克隆猴的培育成功利用的主要原理是体细胞细胞核具有
(2)进行过程①时,培养成纤维细胞必须提供严格的无菌、无毒条件,为了达到这样的效果,培养过程中采取的措施有
(3)图中的②过程通过
(4)过程⑤中,对代孕雌性食蟹猕猴需要进行的处理是
(5)为了确定Kdm4d的mRNA的作用,研究人员做了两组实验,其中A组用正常培养液培养融合细胞,B组用正常培养液培养注入了Kdm4d的mRNA的融合细胞。实验结果如图所示,图中X为融合细胞发育成的胚胎数,Y为囊胚数,Z为内细胞团数。实验结果表明,
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【推荐3】国家863计划项目“利用崂山奶山羊乳腺生物反应器制备药用蛋白”取得重大进展。目前,已经成功获得经纯化的抗凝血酶ⅡI蛋白,达到国际先进水平。下面是制作崂山奶山羊乳腺生物反应器的流程图,回答下列相关问题。
(1)与崂山奶山羊相比,一般不选用小鼠作为乳腺生物反应器的主要原因是___________________ 。
(2)过程③为基因工程步骤中的________________ ,此过程需将该药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起,目的是__________________ 。
(3)过程④需将重组质粒注入受精卵内,而不是动物体细胞内,其原因是_____________________ 。
(4)在进行过程⑤之前,需取囊胚期的_________ 细胞做性别鉴定;随后对筛选的胚胎进行分割获得同卵双胎。胚胎分割时,要将囊胚的________________ 均等分割。
(1)与崂山奶山羊相比,一般不选用小鼠作为乳腺生物反应器的主要原因是
(2)过程③为基因工程步骤中的
(3)过程④需将重组质粒注入受精卵内,而不是动物体细胞内,其原因是
(4)在进行过程⑤之前,需取囊胚期的
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