1 . 稻米的直链淀粉是由蜡质基因（waxy）控制合成的淀粉合成酶（GBSS）催化形成，直链淀粉含量高的米饭质地和适口性不高。将 waxy反义基因片段导入水稻细胞抑制内源基因表达，可降低直链淀粉含量。为防止同时导入的标记基因影响，科研人员构建了2种载体，通过共转化以期获得含有目的基因、不含标记基因和报告基因（gus）的转基因水稻，相关流程如下图。请回答下列问题。

(1)waxy反义基因片段导入水稻细胞后可抑制内源基因表达，原因是____。为构建反义基因与gus的融合基因，在利用PCR技术获取反义基因与 gus过程中，需要在设计的两对引物____端分别添加限制酶____、____的识别序列。
(2)过程③中将农杆菌1、2按照1：9比例充分混匀感染水稻愈伤组织，3天后转入含有___的选择培养基筛选抗性愈伤组织。抗性愈伤组织转入再生培养基经____形成胚状体，继而发育成 T₀代植株。
(3)提取T₀代植株的基因组 DNA，根据反义基因和 gus基因部分序列设计引物进行PCR1检测， 同时根据反义基因和终止子的部分序列设计引物进行 PCR2检测，结果如下图，其中M为标准参照，1为阳性对照，2为阴性对照，3~8号为抗性植株 DNA的 PCR产物。其中2 是根据____的DNA 为模板进行 PCR 的结果，据图可以确定____号植株为共转化失败的水稻。

(4)过程⑤将共转化成功的 T₀代植株进行自交，收获种子，取半粒种子进行 GUS 检测（gus的表达产物能使白色X-Gluc 水解生成蓝色产物）。选择检测结果为____色的种子种植得到T₁代植株。最终还需检测____，才可判断是否改良成功。

2 . 叶色突变体是研究植物光合作用机理的理想材料，科研人员以小麦旗叶黄化转绿突变体LF2090及其野生型H261为材料，研究并得到以下实验结果，请回答相关问题。

表1：不同时期突变体LF2090与野生型H261叶片的光合特性

光合参数	旗叶黄化期		旗叶转绿期
	H261	LF2090	H261	LF2090
净光合速率Pn（μmol·m-2·s-1）	16.31	14.34	20.46	13.29
气孔导度Gn（mmol·m-2·s-1）	0.21	0.17	0.29	0.14
细胞间隙CO2浓度Ci/（μmol·mol-1）	202.99	191.14	229.58	187.37
蒸腾速率T/（mol·m-2·s-1）	5.037	5.08	5.47	4.31

注：气孔导度G_s是指单位时间单位面积叶片对气体的吸收或释放量；细胞间隙CO₂浓度Ci下降表示气孔关闭。
(1)旗叶是小麦最后长出、位于最上部的叶片，旗叶对麦穗籽粒产量有重要贡献。与其他叶片相比，旗叶光合作用更具优势的环境因素是________。
(2)由表1可知，突变体旗叶光合作用速率________（填“>”、“=”或“<”）野生型：与黄化期相比，突变体转绿过程中光合作用速率________（填“增强”或“减弱”）。
(3)分析图2可知，与野生型相比，突变体旗叶中叶绿体区别在于________;与黄化期相比，转绿期叶绿体变化在于________。
(4)结合表1和图2分析，突变体旗叶在黄转绿过程中光合作用速率发生变化的原因是_________。
(5)突变体LF2090（如图1）是由小麦品系H261经过EMS（甲磺酸乙酯）诱变获得的旗叶黄化转绿突变体，在批量处理之前常要进行预实验，具体过程如下表，请完善相关内容。

实验操作	实验步骤的要点及结果
实验材料处理	取H261饱满、无损伤的种子1000粒，用次氯酸钠浸泡种子10分钟用于①________，处理结束后用蒸馏水清洗3遍。
实验分组	取②_________个容量合适的锥形瓶，在瓶上标注对应的浓度梯度（0.0%、0.5%、0.7%、0.9%、1.1%）。
实验处理	依次在每个锥形瓶中加入经过处理后的种子200粒、蒸馏水和EMS试剂。100ml体系中，其中0.9%实验组应加入蒸馏水③________ml。
表型鉴定	将EMS处理后的种子冲洗后置于环境中开展发芽试验，在种植14天之后评估种子萌发的幼苗的生长状况。获得黄化转绿突变体之后，经过多代自交，获得④_________。

3 . 为实现多肉植物的规模化生产，科研人员开展了如下研究。相关叙述正确的是（       ）

   

A．过程①宜选择成熟叶片，分别用次氯酸钠和70%的酒精浸泡30s

B．过程②应避光培养，防止愈伤组织分化成筛管、维管等

C．过程③应配制2种培养基，其主要目的是满足不同阶段试管苗对营养的需求

D．过程④应在珍珠岩基质中添加适量蔗糖，为幼苗生长提供碳源

4 . 下列有关实验方法的描述合理的是（       ）

A．用适宜温度的清水浸泡新鲜黑藻，可提高胞质环流的速度并使其方向一致

B．菊花组织培养中的茎段外植体要用70%的酒精消毒，并用解剖刀切成1mm左右小段

C．双缩脲试剂也可以鉴定可溶性还原糖，随着双缩脲试剂B液量的增加，砖红色加深

D．在目镜10×、物镜40×的显微镜下观察血细胞计数板，可发现计数室中有9个大方格

5 . 为解决中药藿香种质退化、易感染病虫害等问题，研究者对组织培养不同阶段的藿香进行辐射处理，以期获得性状优良的突变株。

据图分析，相关叙述正确的是（       ）

A．①②应持续照光以诱导外植体的再分化	B．③④过程细胞表达基因种类和水平相同
C．培养材料在射线的作用下发生定向突变	D．筛选出的优良突变株可再进行快速繁殖

6 . 红景天中的HMA3基因能编码Cd转运蛋白，科研人员将红景天中的HMA3基因转入栾树，以实现栾树的定向改良，使其增强对Cd的富集能力，从而更有效治理Cd污染。实验的主要流程如下，其中Hyg^r为潮霉素抗性基因，Kan^r为卡拉霉素抗性基因，请回答：

(1)重组质粒的构建、扩增、保存
① 从红景天细胞中提取总RNA为模板，进行RTPCR。其中PCR的反应条件：98 ℃10 s，55 ℃30 s，72 ℃1 min，35个循环，其中55 ℃30 s过程称为________。若模板双链cDNA的数量为a个，经过35个循环需要消耗引物的数量是________。
② 为构建Cd转运蛋白与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白，需确保目的基因与质粒正确连接。构建重组质粒时用________酶切PCR纯化产物(已添加相应酶切位点)及Ti质粒，然后通过DNA连接酶进行连接制备重组质粒，并依次转入大肠杆菌和农杆菌。
(2)栾树愈伤组织的诱导
切割无菌苗将其茎段插入愈伤组织培养基，培养基应添加__________________(填植物激素的名称)，放入培养箱，经过21 d的黑暗诱导，茎段经________形成愈伤组织。
(3)农杆菌介导转化体系的建立
将农杆菌单克隆菌株对栾树愈伤组织进行侵染转化，并用添加________的培养基筛选出转化成功的愈伤组织，将愈伤组织继续培养成完整植株。待幼苗长出较为发达的根系后进行移栽炼苗，炼苗的目的是_________。
(4)原生质体制备及目的基因的检测和鉴定
①取4 g筛选后愈伤组织，用镊子轻轻捣碎，冲洗。用滤网过滤溶液，将愈伤组织转移至含__________的酶解液中处理一段时间获得原生质体。
②在激光共聚焦下观测到细胞膜发出绿色荧光。在本研究中选择GFP与Cd转运蛋白构建融合蛋白的目的是______________。若要从个体生物学水平上进行目的基因的检测与鉴定，则可以检测比较转基因栾树与野生型栾树________。

7 . 植物体细胞通常被诱导为愈伤组织后才能表现全能性。研究发现，愈伤组织的中层细胞是根或芽再生的源头干细胞，其在不同条件下，通过基因的特异性表达调控生长素、细胞分裂素的作用，表现出不同的效应（见如表）。已知生长素的生理作用大于细胞分裂素时有利于根的再生；反之，有利于芽的再生。下列推论不合理的是（       ）

条件	基因表达产物和相互作用	效应
①	WOX5	维持未分化状态
②	WOX5+PLT	诱导出根
③	WOX5+ARR2，抑制ARR5	诱导出芽

A．WOX5失活后，中层细胞会丧失干细胞特性

B．WOX5+PLT可能有利于愈伤组织中生长素的积累

C．ARR5促进细胞分裂素积累或提高细胞对细胞分裂素的敏感性

D．体细胞中生长素和细胞分裂素的作用可能相互抑制

8 . 组培苗的移栽驯化是植物组织培养成功的关键，其主要过程为：炼苗→基质灭菌→育苗盘准备→试管苗脱瓶→移栽。下列关于该过程中注意事项的叙述，错误的是（       ）

A．炼苗：正午强光和南方光照较强地区需采取阴蓬或温室以避免灼伤小苗

B．基质灭菌：将蛭石、珍珠岩、草木灰混匀，经干热灭菌后取出立即移栽组培苗

C．试管苗脱瓶：组培苗从液体培养基中取出沥干，避免残留营养物质滋生微生物

D．移栽：移栽前需喷雾洒水保持一定的湿度，之后需要逐渐降低湿度和增强光照