酿酒酵母不能利用木糖制约了利用植物原料生产乙醇的经济效益。木酮糖激酶是木糖转化、利用的关键酶,为提高酵母细胞中木酮糖激酶的表达量,科研人员将两种启动子与木酮糖激酶基因结合并导入酿酒酵母细胞,构建能同时利用葡萄糖和木糖的重组酿酒酵母。下图表示相关研究过程,表是几种限制性内切酶的识别序列及切割位点。四环素是种广谱抗生素。请回答:
(1)重组质粒中启动子的作用是______ 。复制原点的基本骨架是______ 。由图可知在木酮糖激酶基因和启动子A和B两端设计加入不同的限制性酶切位点,主要目的有______ 。
(2)过程④使用的限制性内切酶是______ 。过程⑤需先用LiAc处理酿酒酵母细胞,其目的是使酵母形成______ 细胞,便于吸收环境中的DNA。
(3)结合图示分析,进行工程菌筛选时,在含四环素的培养基上长出的菌落不一定是导入重组质粒的酿酒酵母,这是因为______ 。
(4)研究人员对筛选得到的两种重组酵母(甲中导入启动子A,乙中导入启动子B)细胞中木酮糖激酶活力及发酵乙醇得率进行比较(部分发酵条件:1LI5g·L-1的葡萄糖和50 g·L-1的木糖培养基中,120h)结果如下表。
从木酮糖激酶酶活力分析,可以得出的结论是启动子B的功能比启动子A______ ,但本实验中乙醇得率相差不大:其可能的原因有______ (填序号)
①实验中发酵时间过长;②培养基中的葡萄糖和木糖含量过少;③受木糖转化利用过程中的其它酶的限制;④部分发酵条件不适宜
限制酶 | 识别序列和切割位点 |
EcorRⅠ | G↓AATTC |
BamHⅠ | G↓GATCC |
HindⅢ | A↓AGCTT |
XhoⅠ | C↓TCGAG |
NdeⅠ | CA↓TATG |
SalⅠ | G↓TCGAC |
(1)重组质粒中启动子的作用是
(2)过程④使用的限制性内切酶是
(3)结合图示分析,进行工程菌筛选时,在含四环素的培养基上长出的菌落不一定是导入重组质粒的酿酒酵母,这是因为
(4)研究人员对筛选得到的两种重组酵母(甲中导入启动子A,乙中导入启动子B)细胞中木酮糖激酶活力及发酵乙醇得率进行比较(部分发酵条件:1LI5g·L-1的葡萄糖和50 g·L-1的木糖培养基中,120h)结果如下表。
重组酿酒酵母 | 木酮糖激酶酶活力U·mg-1 | 葡萄糖消耗量g·L-1 | 木糖消耗量g·L-1 | 乙醇得率g/g |
甲 | 0.24 | 14.59 | 48.61 | 0.34 |
乙 | 0.56 | 14.98 | 49.39 | 0.39 |
从木酮糖激酶酶活力分析,可以得出的结论是启动子B的功能比启动子A
①实验中发酵时间过长;②培养基中的葡萄糖和木糖含量过少;③受木糖转化利用过程中的其它酶的限制;④部分发酵条件不适宜
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更新时间:2020-09-27 18:54:28
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【推荐1】下图为动植物细胞的亚显微结构模式图,1~15表示细胞内的相关结构。回答下列问题:
(1)图中,_______________ (填“A”或“B”)表示植物细胞的结构模式,判断依据是________________ 。
(2)在细胞中,许多细胞器都具有膜结构,如_______________ (填编号,答出6种)等,这些细胞器膜和_______________ 等结构,共同构成细胞的生物膜系统。
(3)图中,6与_______________ 的形成有关,7的主要成分是_______________ ,8的功能是_______________ ,9中CO2产生的场所和O2消耗的场所分别为_______________ 。
(1)图中,
(2)在细胞中,许多细胞器都具有膜结构,如
(3)图中,6与
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【推荐2】下图甲为某高等植物叶肉细胞内光合作用与有氧呼吸的部分过程示意图,其中①~⑤表示相关生理过程,a~h表示相关物质;图2为该植物在CO2浓度适宜的情况下,单位时间内气体的吸收量或消耗量随温度变化的曲线图,请据图分析并回答问题:
(1)甲图过程⑤表示光合作用的_________ 阶段,物质b是_______ 。过程④中,生成h的过程叫做________________ ,物质c的作用是________________ ,图2中A点时能发生图甲中过程________ (填数字序号)。过程⑤产生的[H]能否用于①过程?_________ (填“能”或“否”)。
(2)图2中B点时,比较图1中过程④消耗的g和过程①消耗的b,两者的数量关系是________ (填g<b、g=b或g=2b)。
(3)图2中C点时植物的总光合速率______ (填大于、等于或小于)D点时总光合速率,原因是_________________________ 。
(4)据图2分析,限制AC段CO2吸收速率的主要因素是________ 。温室栽培该植物时,若一天中保持光照12小时,其余时间黑暗,为获得最大经济效益,光照时应控制的最低温度为________ 。
(1)甲图过程⑤表示光合作用的
(2)图2中B点时,比较图1中过程④消耗的g和过程①消耗的b,两者的数量关系是
(3)图2中C点时植物的总光合速率
(4)据图2分析,限制AC段CO2吸收速率的主要因素是
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【推荐3】细胞呼吸分有氧呼吸和无氧呼吸,两者进行的场所、过程等均存在差异.如图表示细胞部分结构和功能,据图回答:
(1)图中A是________ ,B的利用发生在有氧呼吸的第________ 阶段
(2)在有氧呼吸的过程中,释放的CO2是在第________ 阶段产生的;H2O是通过第________ 阶段形成的;产生ATP最多的是第________ 阶段
(3)该细胞产生CO2的场所是________ ,如果有氧呼吸和无氧呼吸产生等量的CO2,所消耗的葡萄糖之比是________
(4)结合图示过程,有氧呼吸的反应式可写成________
(1)图中A是
(2)在有氧呼吸的过程中,释放的CO2是在第
(3)该细胞产生CO2的场所是
(4)结合图示过程,有氧呼吸的反应式可写成
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【推荐1】科学家运用基因工程技术将结核杆菌MPT64基因(能控制合成MPT64蛋白)成功导入胡萝卜细胞,最终表达出肺结核疫苗。回答下列问题:
(1)基因工程的核心步骤是______________ ,所用到的工具酶有_____________________ 。
(2)通常采用PCR技术扩增MPT64基因,前提是要____________________________ ,以便根据这一序列合成引物。在操作步骤中冷却至55~60℃的目的是_____________________ 。
(3)根据农杆菌的特点,如果将MPT64基因插入到______________ 上,通过农杆菌的转化作用,可以使目的基因进入胡萝卜细胞,并将其插入到植物细胞中的______________ 上。要确认MPT64基因是否插入胡萝卜植株中,可用______________ 技术。
(1)基因工程的核心步骤是
(2)通常采用PCR技术扩增MPT64基因,前提是要
(3)根据农杆菌的特点,如果将MPT64基因插入到
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【推荐2】蒂蛀虫是荔枝的重要虫害,荔枝嫩叶受蛀时,中脉变褐色,干枯破裂;花穗受害, 顶端枯死;果实被蛀,造成落果或品质下降。科研人员利用转基因抗虫荔枝的研究过程中,采用了图示质粒,其上有SalI,HindⅢ和BamHI三种限制酶切割位点。
(1)在构建重组质粒时,选用____ 两种限制酶切割目的基因的两端及质粒,可防止_____ 。
(2)用分别含有氨苄青霉素和四环素的培养基筛选农杆菌时,发现含有目的基因的农杆菌不能在含四环素的培养基上生长,这说明______ 。
(3)采用农杆菌感染荔枝细胞的优点是:______ 。
(4)利用植物组织培养技术培育转基因抗虫荔枝植株,依据的原理是______ 。
(5)导入抗虫基因的荔枝是否可以表达其遗传特性,可利用________ 技术检测抗虫基因是否转录出mRNA,是否翻译出与抗虫有关的蛋白质则采用_____ 技术,除上述分子水平检测外,还需进行个体水平上的抗虫性状鉴定,可用的方法是_____ 。
(1)在构建重组质粒时,选用
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【推荐3】某一质粒载体如图所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamHI酶切后,与用BamHI酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌,结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题:
(1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有______________________________ (答出两点即可)。而作为基因表达载体,除满足上述基本条件外,还需具有启动子和终止子。
(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述四种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的,其原因是__________________ ;并且含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒(或重组质粒的细胞也是不能区分的,其原因是____________________ 。在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落,还需使用含有____________ 的固体培养基。
(3)基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其DNA复制所需的原料来自于_________ 。
(4)在基因工程的基本步骤中,_____________________ 是基因工程的核心。
(1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有
(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述四种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的,其原因是
(3)基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其DNA复制所需的原料来自于
(4)在基因工程的基本步骤中,
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【推荐1】凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶。研究人员运用基因工程技术,将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中并使之表达。下图是基因工程中获得的基因和构建重组质粒过程,请回答有关问题:
(1)分析上图可知,构建重组质粒(如图所示)最好选用____________ 限制酶,理由是______________ 。
(2)工业生产过程中,最初多采用重组大肠杆菌或芽孢杆菌生产凝乳酶,将目的基因导入大肠杆菌或芽孢杆菌前所做的处理方法是__________________ 。现在生产凝乳酶多采用重组毛霉或重组酵母菌,毛霉或酵母菌作为受体细胞的优势是______________________ 。
(3)研究发现,如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸,其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是_______________ ,该生物工程技术的实质是___________ 。
(4)转基因技术和细胞工程在动植物中都有广泛应用,但是胚胎工程只是指对动物的__________ 所进行的多种亚显微操作和处理技术。
(1)分析上图可知,构建重组质粒(如图所示)最好选用
(2)工业生产过程中,最初多采用重组大肠杆菌或芽孢杆菌生产凝乳酶,将目的基因导入大肠杆菌或芽孢杆菌前所做的处理方法是
(3)研究发现,如果将该凝乳酶20位和24位氨基酸改变为半胱氨酸,其催化能力将提高2倍。科学家可以生产上述高效凝乳酶的现代生物工程技术是
(4)转基因技术和细胞工程在动植物中都有广泛应用,但是胚胎工程只是指对动物的
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【推荐2】DNA疫苗是利用基因工程等技术,将编码病毒的保护性抗原蛋白基因插入能在真核系统中表达的质粒上,构建重组质粒,再将重组质粒导入人体内表达出保护性抗原蛋白,诱导机体产生免疫应答,达到预防相应病毒感染的目的。图1为病毒的保护性抗原蛋白基因,图2为质粒结构示意图,请回答下列问题:
(1)图2中,标记基因的作用是_____________ ;作为基因工程的载体,除图示标明的结构外,还需要具备的结构有____________ 。在基因工程中使用的载体除质粒外,还有_____________ 。
(2)限制酶EeoRⅠ能识别GAATTC序列,并在G与A之间切开磷酸二酯键产生____________ 末端,这是利用了酶的____________ 性。构建DNA疫苗时,最好选用限制酶____________ 切割目的基因和质粒。
(3)一般利用_____________ 法将重组质粒导入受体细胞。欲检验人或动物体内是否具有了抗原蛋白,在分子水平上检测的方法是从转基因人或动物中提取蛋白质,进行_____________ 。
(1)图2中,标记基因的作用是
(2)限制酶EeoRⅠ能识别GAATTC序列,并在G与A之间切开磷酸二酯键产生
(3)一般利用
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【推荐3】下图是转基因小鼠的培育过程示意图,Gfp是绿色荧光蛋白基因,请分析回答:
(1)过程①需要用到________ 酶。过程②将目的基因导入胚胎干细胞常用的方法是________ ;培养胚胎干细胞的培养液中除加入各种营养物质外,通常还需加入________ 。
(2)表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、________ 、________ 、终止子和复制原点等。
(3)自然状况下胚胎干细胞是由动物的早期胚胎或________ 中分离出来的一类细胞。胚胎干细胞在形态上表现为体积小,细胞核大,细胞核仁明显;在功能上具有________ 性。
(4)图中载体上的Neo基因是B抗生素抗性基因,图中步骤③所用的G418是B抗生素(对细胞有毒害作用),培养液添加G418的目的是________ 。
(5)步骤⑤将细胞注射入囊胚的____ 位置;步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理,目的是_______ 。
(6)检测目的基因是否翻译成蛋白质,可从小鼠c体内提取蛋白质,用________ 杂交的方法加以检测。
(7)单克隆抗体的优点是_____________________ 。
(1)过程①需要用到
(2)表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、
(3)自然状况下胚胎干细胞是由动物的早期胚胎或
(4)图中载体上的Neo基因是B抗生素抗性基因,图中步骤③所用的G418是B抗生素(对细胞有毒害作用),培养液添加G418的目的是
(5)步骤⑤将细胞注射入囊胚的
(6)检测目的基因是否翻译成蛋白质,可从小鼠c体内提取蛋白质,用
(7)单克隆抗体的优点是
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【推荐1】人β-酪蛋白是人乳汁中的重要营养成分,科学家已培育出转基因山羊生产人β-酪蛋白,下图为培育流程,其中①~④为相关过程,请回答下列问题:
(1)人β-酪蛋白基因是____________ (从基因工程角度作答),它可从人细胞中直接提取或从人的____________ 中提取。
(2)过程①获得的A为__________________________________ ;将A导入受精卵常用的方法是________________ 法。
(3)过程③为____________ ,进行此操作的早期胚胎应处于________________ 阶段。
(4)代孕母羊对早期胚胎无____________ 反应是转基因山羊能在其子宫内存活并发育的基础。
(5)从分子水平可通过________________ 技术检测转基因山羊中是否成功表达出人β-酪蛋白。
(1)人β-酪蛋白基因是
(2)过程①获得的A为
(3)过程③为
(4)代孕母羊对早期胚胎无
(5)从分子水平可通过
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【推荐2】如图为三种质粒和一个含目的基因的DNA片段,其中Ap为氨苄青霉素抗性基因,Tc为四环素抗性基因,lacZ为蓝色显色基因,EcoRⅠ(0.7Kb)、PvuⅠ(0.8Kb)等为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离。已知1kb=1000个碱基对,请回答下列问题:
(1)片段D为目的基因中的某一片段,则DNA聚合酶和DNA连接酶的作用部位依次是______________ (填数字)。
(2)图中能作为目的基因运载体最理想的质粒是______________ (填A/B/C),请据图分析,其他两种质粒一般不能作为运载体的理由分别是______________ 、______________ 。
(3)用EcoR I完全酶切目的基因和质粒B形成的重组质粒,并进行电泳观察,可出现长度分别为1.1kb和______________ kb的两个片段,或者长度分别为______________ 的两个片段。(重组质粒上目的基因的插入位点与EcoR I的识别位点之间的碱基对忽略不计)。
(4)将分别用限制酶PvuⅠ切开的质粒B溶液与目的基因溶液混合,加入DNA连接酶连接后,进行大肠杆菌受体细胞导入操作,之后,受体细胞的类型(对抗生素表现出抗性R或敏感性S,蓝白代表菌落颜色)包含______________ 。
A.ApR、蓝色 B.ApR、白色 C.ApS、蓝色 D.ApS、白色
(5)动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞的根本原因是_____________ 。
A.受精卵能使目的基因高效表达
B.受精卵可发育成动物个体
C.受精卵基因组更易接受DNA的插入
D.受精卵尺寸较大,便于DNA导入操作
(1)片段D为目的基因中的某一片段,则DNA聚合酶和DNA连接酶的作用部位依次是
(2)图中能作为目的基因运载体最理想的质粒是
(3)用EcoR I完全酶切目的基因和质粒B形成的重组质粒,并进行电泳观察,可出现长度分别为1.1kb和
(4)将分别用限制酶PvuⅠ切开的质粒B溶液与目的基因溶液混合,加入DNA连接酶连接后,进行大肠杆菌受体细胞导入操作,之后,受体细胞的类型(对抗生素表现出抗性R或敏感性S,蓝白代表菌落颜色)包含
A.ApR、蓝色 B.ApR、白色 C.ApS、蓝色 D.ApS、白色
(5)动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞的根本原因是
A.受精卵能使目的基因高效表达
B.受精卵可发育成动物个体
C.受精卵基因组更易接受DNA的插入
D.受精卵尺寸较大,便于DNA导入操作
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【推荐3】人绒毛膜促性腺激素(hCGβ)是胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白,近年研究发现,结肠癌等多种恶性肿瘤细胞的hCGβ基因也有表达,hCGβ与肿瘤的发生、发展及转移有一定关系。研发抗hCGβ疫苗已成为近年来肿瘤生物治疗新的热点,下图为其制备的基本方案。回答下列问题:注1:甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔;
注2:AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子,只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达;
注3:各种限制酶对应的线条所指为其识别序列。
(1)图示 hCGβ基因是人工合成的目的基因,在设计引物对其扩增时,为防止目的基因与质粒的自身环化并保证连接的方向性,可在其左右两端分别添加______________ 限制酶的识别序列。经实验得知该基因扩增引物长度为10个核苷酸时特异性强、效率高,已知目的基因①处的碱基序列为—CCTTTCAGCTCA——,同时考虑连接的方向性和引物的特异性,则设计该端对应引物的序列是5'-_________________ -3'。
(2)图示 hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因,其目的是__________________ 。从生产控制的角度分析,选用AOX1作为hCGβ基因启动子的优点是_________________ 。
(3)阶段Ⅱ将环化质粒导入用_________ 处理的大肠杆菌,从而实现重组DNA 的扩增,该过程需要在培养基中添加_________________ 来筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌,选择大肠杆菌作为受体菌是利用大肠杆菌具有___________________________ 的特点(至少答2点)。
(4)阶段Ⅳ需将处理后的酵母菌接种在培养基上培养,该培养基不需要添加以下哪些成分____ (①氨苄青霉素 ②组氨酸 ③无机盐 ④琼脂),可在此培养基上生长的酵母菌即为含有 hCGβ基因表达载体的目的菌株。将此菌株扩大培养后,离心取上清液,依据______________ 原理进行检测。若上清液中能检测到hCGβ蛋白,则说明hCGβ基因得以表达。
注2:AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子,只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达;
注3:各种限制酶对应的线条所指为其识别序列。
(1)图示 hCGβ基因是人工合成的目的基因,在设计引物对其扩增时,为防止目的基因与质粒的自身环化并保证连接的方向性,可在其左右两端分别添加
(2)图示 hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因,其目的是
(3)阶段Ⅱ将环化质粒导入用
(4)阶段Ⅳ需将处理后的酵母菌接种在培养基上培养,该培养基不需要添加以下哪些成分
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