【推荐1】人乳头瘤病毒（简称HPV，遗传物质为DNA）感染是引发宫颈癌的最主要因素。我国研制的HPV疫苗和抗L1蛋白单克隆抗体对宫颈癌的预防有良好的效果，已知L1蛋白是HPV表面的一种主要蛋白质。根据所学知识，回答下列问题。
(1)用基因工程制备HPV疫苗，首先可以通过PCR扩增目的基因。PCR利用了___________的原理，扩增过程中反应体系温度变化为升温→降温→升温，其中降温的目的是____________。
(2)基因工程操作的核心步骤是___________，此步骤需要的酶是___________和___________。
(3)在制备抗L1蛋白单克隆抗体时，需要将小鼠B淋巴细胞与鼠的骨髓瘤细胞融合，再用特定的培养基进行筛选。在该培养基上，未融合的细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞能正常生长。上述获得的杂交瘤细胞不能直接用来制备抗L1蛋白单克隆抗体，需要再次对细胞进行筛选，筛选的目的是___________。
(4)抗L1蛋白单克隆抗体主要的优点是___________（答出两点即可）。

【推荐2】家禽的饲料中富含谷物，纤维素是谷物的重要成分，但家禽消化道中缺少能降解纤维素的酶，阻碍了家禽对饲料的吸收与利用。研究人员利用转基因技术改造乳酸杆菌，将其添加到饲料中，以提高家禽养殖效率。枯草芽孢杆菌能分泌一种可降解纤维素的酶，这种酶由W基因编码。为在乳酸杆菌中表达W基因，需使用图1中质粒作为载体，图2为含W基因的DNA片段。回答下列问题：

(1)在将重组质粒导入乳酸杆菌之前，需要用______处理乳酸杆菌，使之处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。乳酸杆菌作为基因工程的受体细胞的优点有________（答出3点）。
(2)采用PCR技术可以大量扩增W基因，该过程包括将W基因解链（变性）、______（复性）和在______作用下合成互补子链（延伸）。
(3)所得重组质粒转化乳酸杆菌后，使用含____________的培养基筛选，以得到转入W基因的乳酸杆菌。由于载体上的启动子往往具有物种特异性，W基因上游的启动子应选择______（填“枯草芽孢杆菌”“乳酸杆菌”或“枯草芽孢杆菌或乳酸杆菌”）的启动子。
(4)W基因以乙链为转录模板链，转录时mRNA自身延伸的方向为5'→3'。下表是几种限制酶的识别序列及切制位点，图1、图2标注了相关限制酶的酶切位点。为获得能正确表达W基因的重组质粒，应分别使用哪些限制酶对质粒和含W基因的DNA片段进行切割____________。

【推荐3】干燥综合征（SS）是一种自身免疫病，患者血清中存在多种抗体， 其中SSB抗体特异性最强。科研人员为生产SSB抗体的检测试剂，利用基因工程获得重组SSB蛋白，流程如下，请回答：

(1)利用RNA 通过①过程获得cDNA 需要________酶，从而获得 SSB基因，SSB基因通过PCR扩增，其延伸阶段需要___________酶的参与，而且在缓冲液中添加_______________以便激活该酶的活性。 目的基因片段扩增n代，共需要________个引物。
(2)PCR循环之前，常要进行次预变性，预变性的目的是增加_________________的概率，用PCR方法扩增目的基因时____________（填“必须”或“不必”）知道基因的全部序列。
(3)为与PET41a质粒连接，获得的目的基因A 两端要含有________（写出限制酶名称）酶切位点。DNA 连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是_______。为了提高获得重组DNA的效率，除了考虑适宜的外界条件外，还需考虑_______________。（至少两点）
(4)获得含 SSB基因的重组质粒后，进行如下实验切割原质粒和重组质粒，获得片段大小见表格（1kb=1000碱基对），分析数据，计算可得SSB基因的长度为________。与人基因组文库中的SSB基因相比，通过①过程获得的SSB基因结构特点________（填“有”或“无”）启动子、终止子和内含子等非编码序列。

限制酶	EcoRI	BanHI 和 XhoI
原质粒	8.1kb	2.7kb、5.4kb
重组质粒	3.4kb、5.0kb	未做该处理

(5)②过程目的是将重组质粒转入到用____处理过的大肠杆菌内，并接种于添加______的培养基上，收集菌落进行鉴定，将阳性菌落进一步纯化后再将菌体________处理，筛选得到重组SSB蛋白。

【推荐1】蛛丝蛋白是一种特殊纤维蛋白，其具有强度高，韧性大等特点，在人工肌腱等医学领域有着诱人的前景。某研究小组提取非洲社会性丝绒蜘蛛中的蛛丝蛋白基因，通过转基因技术大量合成蛛丝蛋白，下图为制备生产蛛丝蛋白的过程示意图，请回答以下问题：
   
(1)图中的“剪刀”是指_____，“针线”是指_____。
(2)质粒一般需经过改造才能作为基因工程的载体，改造后的质粒除了能自我复制或整合到受体细胞染色体DNA上同步复制外，还需满足的条件有_____（填2项）。
(3)重组DNA导入大肠杆菌时，一般先用_____处理大肠杆菌，使细胞处于_____的生理状态，以便于重组的基因表达载体导入其中。
(4)鉴定蛛丝蛋白基因是否转录出mRNA的常用技术是_____，该方法的原理是_____。
(5)若需对蛛丝蛋白进行设计和改造以增强其韧性，可通过_____（填技术名称）来实现。

【推荐2】自然界中很少出现蓝色花。天然蓝色花产生的主要原因是花瓣细胞液中的花青素在碱性条件下显蓝色。我国科学家利用链霉菌的靛蓝合成酶基因（idgS）及其激活基因（sfp）构建了如图所示的基因表达载体，通过农杆菌转化法导入白玫瑰中，在细胞质基质中形成稳定显色的靛蓝。

(1)靛蓝合成酶基因（idgS）及其激活基因（sfp）可利用DNA杂交技术从_________中获取。构建基因表达载体时往往需要用同一种限制酶切割目的基因和载体，目的是_________。
(2)据图可知，idgS基因插入Ti质粒时应使用的限制酶是_________，与单酶切法相比，其优点是_________（答出2点）。
(3)sfp和idgS基因的表达是_________（填“独立进行”或“相互关联”）的，判断依据是_________。
(4)若受体白玫瑰细胞不变蓝，可能的原因是_________。在目的基因的检测和鉴定过程中，通过PCR技术可检测_________。（答出2点）

【推荐3】草甘膦是一种非选择性除草剂，杀死杂草的同时也杀死农作物。它与植物体内的PEP（磷酸烯醇式丙酮酸）结构相似，可与PEP竞争结合EPSP合酶，阻止PEP转化，影响植物细胞正常代谢。我国科学家从施用草甘膦的土壤中的微生物体内获取草甘膦抗性基因GR79，并将其导入玉米体细胞中获得抗草甘膦转基因玉米。回答下列问题：
(1)启动子位于基因的_____，终止子的功能是_____。欲用含基因GR79的土壤微生物构建cDNA文库，需要提取该微生物细胞的全部_____。
(2)若用PCR技术扩增基因GR79，扩增的起点和终点由_____决定，PCR过程包括变性、退火和_____，其中退火指_____。
(3)通过培养转入基因GR79的玉米细胞的原生质体，可以获得抗草甘膦转基因玉米。获得原生质体时需要在_____溶液环境下进行，目的是_____，然后用_____酶处理玉米细胞。
(4)待抗草甘膦的转基因植株长出新叶后喷洒适量含_____的水溶液，选取存活植株移栽到温室，以获得具有除草剂抗性的植株。若科研人员发现部分获得基因GR79的玉米幼苗不具有抗草甘膦的能力，原因可能是_____。

【推荐2】下图为“乙肝基因工程疫苗”生产过程图解，质粒上箭头所指部位为相应的限制酶的切割位点。质粒中lac Z基因编码产生的酶可以分解培养基中的X-gal，产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。请分析回答下列问题。

回答下列问题。
(1)基因工程的基本操作程序包括：______、______、______和______。
(2)过程①选用限制酶的最佳方案是______。

A．只有Bam HI

B．Bam HI和Eco RI

C．Eco RV和Bam HI

D．Eco RV和Eco RI

(3)构建基因表达载体时，一般将目的基因插在启动子和终止子之间。启动子的作用是______，终止子的作用是______。
(4)过程②需要先将大肠杆菌用______处理，目的是______。
(5)为了筛选含目的基因表达载体的大肠杆菌，可在培养大肠杆菌的通用培养基中额外加入______，培养一段时间后挑选出______（填“蓝色”或“白色”）的菌落进一步培养，从而获得大量目的菌。
(6)目的基因导入受体细胞后，首先要进行分子水平的检测，常用______技术检测目的基因是否翻译出乙肝病毒外壳；其次还需要进行______水平的鉴定。