苯酚(C6H6O)是重要的化工原料,被广泛应用工业生产中,易形成污染,具有致癌、致畸和致突变作用。苯酚降解菌能分解工业废水中的苯酚。自然界中能分解苯酚的微生物有几百种,多为细菌、放线菌等。分离和纯化高效降解苯酚的微生物的实验流程如图所示:
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请回答下列问题:
(1)在制作苯酚降解菌的富集培养基和平板分离培养基时,培养基中应以______ 为唯一碳源,后者除基本营养成分外,还应添加______ (物质),然后用____________ (方法)对培养基进行灭菌。
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(2)用平板划线法分离得到的单个菌落大小、颜色、隆起度等不完全一致的原因是__________________ 。
(3)对分离得到的某株苯酚降解菌进行菌株生长及苯酚降解实验,结果如图所示。实验结果表明此菌株适于降解的苯酚浓度为____ g/L,判断依据是_____________ 。
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请回答下列问题:
(1)在制作苯酚降解菌的富集培养基和平板分离培养基时,培养基中应以
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(2)用平板划线法分离得到的单个菌落大小、颜色、隆起度等不完全一致的原因是
(3)对分离得到的某株苯酚降解菌进行菌株生长及苯酚降解实验,结果如图所示。实验结果表明此菌株适于降解的苯酚浓度为
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更新时间:2020-12-15 21:25:05
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适中
(0.65)
【推荐1】请根据以下人类对生物技术实践的具体应用,回答下列问题:
(1)酸奶、泡菜的制作过程包含了乳酸菌的发酵过程,其反应式是__________________ ,制作泡菜时可以采用_________ 法对亚硝酸盐的含量进行检测。
(2)利用谷氨酸棒状杆菌生产食用味精,欲纯化谷氨酸棒状杆菌并计数,将菌液接种到固体培养基上的方法是_________ ,某同学想长期保存某高产谷氨酸棒状杆菌,应该采用_____________ 法。
(3)橘皮精油不宜用水蒸气蒸馏法进行提取,原因是__________________ ,所以一般采用_________ 法提取橘皮精油。
(4)提取胡萝卜素粉碎胡萝卜的目的是_____________________ 。为了验证萃取物是否是胡萝卜素,该同学将叶绿素 b、叶绿素 a、叶黄素、萃取物和色素混合液(含叶绿素 b、叶绿素 a、叶黄素和胡萝卜素)依次点样在滤纸的 1、2、3、4、5 位置(如图甲所示),并进行分离,滤纸条上各色素带的位置如_____________ (填字母)时,即可说明该萃取物最可能是胡萝卜素。
(1)酸奶、泡菜的制作过程包含了乳酸菌的发酵过程,其反应式是
(2)利用谷氨酸棒状杆菌生产食用味精,欲纯化谷氨酸棒状杆菌并计数,将菌液接种到固体培养基上的方法是
(3)橘皮精油不宜用水蒸气蒸馏法进行提取,原因是
(4)提取胡萝卜素粉碎胡萝卜的目的是
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适中
(0.65)
【推荐2】某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。
(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了_______ 和_______ 。除此之外,培养基还必须含有的基本成分是________ 和________ 。
(2)为了尽快观察到细菌培养的实验结果,应将接种了湖水样品的平板置于恒温培养箱中培养,培养的温度设定在37℃。要使该实验所得结果可靠,还应该同时在另一平板上接种__________________ 作为对照进行实验。
(3)培养20小时后,观察到平板上有形态和颜色不同的菌落,这说明湖水样品中有________ 种细菌。一般说来,菌落总数越多,湖水遭受细菌污染的程度越_________ 。
(1)培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了
(2)为了尽快观察到细菌培养的实验结果,应将接种了湖水样品的平板置于恒温培养箱中培养,培养的温度设定在37℃。要使该实验所得结果可靠,还应该同时在另一平板上接种
(3)培养20小时后,观察到平板上有形态和颜色不同的菌落,这说明湖水样品中有
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名校
【推荐3】幽门螺杆菌(Hp)感染是急、慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。请回答下列有关问题:
(1)图中4支试管分别代表4种微生物在半固体培养基(琼脂含量为3.5g/L)中的生长状态,其中②号试管代表Hp的生长状态,由图判断,Hp在_____ 条件下不能生长。
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(2)下表所示是某培养基的配方。
将Hp接种到pH适宜的该培养基中,置于37℃下培养一段时间后,该培养基中Hp的数目比刚接种时_____ ,主要原因是_____ 。
(3)研究人员在患者体内采集样本并制成菌液后,进行分离培养。实验基本步骤如下:
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①在配制培养基时,要加入尿素和酚红指示剂,这是因为Hp能合成_____ ,它能以尿素作为氮源;若有Hp,则菌落周围会出现_____ 色环带。
②步骤X表示_____ 。在无菌条件下操作时,先将菌液稀释,然后将菌液_____ 到培养基表面上。稀释菌液的目的是获得_____ 菌落。
③在培养时,需将培养皿倒置并放在_____ 中。若不倒置培养,将导致_____ 。
④临床上用
呼气实验检测人体是否感染Hp,其基本原理是Hp能将
标记的_____ 分解为
和
。
(1)图中4支试管分别代表4种微生物在半固体培养基(琼脂含量为3.5g/L)中的生长状态,其中②号试管代表Hp的生长状态,由图判断,Hp在
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(2)下表所示是某培养基的配方。
成分 | 葡萄糖 | ![]() | ![]() | NaCl |
含量 | 10g | 0.2g | 0.2g | 0.2g |
成分 | ![]() | ![]() | 琼脂 | 蒸馏水 |
含量 | 0.2g | 5g | 3.5g | 定容至1L |
(3)研究人员在患者体内采集样本并制成菌液后,进行分离培养。实验基本步骤如下:
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①在配制培养基时,要加入尿素和酚红指示剂,这是因为Hp能合成
②步骤X表示
③在培养时,需将培养皿倒置并放在
④临床上用
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适中
(0.65)
【推荐1】国家生活饮用水卫生标准(GB 5749—2006)规定:接种1mL水样在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上,经37℃、24h培养后,所生长出的菌落总数不得大于100。某兴趣小组对某蓄水池进行细菌总数测定,以了解池水是否符合饮用水卫生标准。
回答下列问题:
(1)用无菌三角瓶取水样前,水龙头需使用酒精棉擦拭消毒后,再通过_________ 灭菌。取水前的无菌操作的目的是__________________ 。
(2)该小组通过滤膜法测定细菌总数,将10mL的水样进行过滤后,将滤膜放在牛肉膏蛋白胨培养基上培养,培养时应将平板倒置,其主要原因是__________________ 。所用培养基中的牛肉膏除为微生物提供碳源和氮源外,还能提供磷酸盐和_________________ 。
(3)统计菌落种类和数量时要每隔24h观察统计一次,直到各类菌落数目稳定,以防止______________ 。经过一段时间培养,结果如下表:
据上表结果判断,所取水样测定结果_________ (填“符合”或者“不符合”)饮用水的标准。
(4)该小组若想检测水样中大肠杆菌的数目,可将滤膜放在含_______ 培养基上,统计培养基上_____ (颜色)菌落的数目。
回答下列问题:
(1)用无菌三角瓶取水样前,水龙头需使用酒精棉擦拭消毒后,再通过
(2)该小组通过滤膜法测定细菌总数,将10mL的水样进行过滤后,将滤膜放在牛肉膏蛋白胨培养基上培养,培养时应将平板倒置,其主要原因是
(3)统计菌落种类和数量时要每隔24h观察统计一次,直到各类菌落数目稳定,以防止
平板1 | 平板2 | 平板3 | |
菌落数(个) | 41 | 35 | 38 |
据上表结果判断,所取水样测定结果
(4)该小组若想检测水样中大肠杆菌的数目,可将滤膜放在含
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(0.65)
【推荐2】牛和羊的瘤胃中生活着多种微生物,其中许多微生物能分解尿素。某研究小组欲从瘤胃内筛选出能高效降解尿素的细菌,设计了如下实验。
Ⅰ.取样:从刚宰杀的牛的瘤胃中取样,将样品装入事先灭过菌的锥形瓶中。
Ⅱ.培养基的配制和灭菌:
配制全营养LB固体培养基。配方:水、蛋白胨,酵母提取物,NaCl,琼脂糖。(备注:琼脂糖是一种链状多糖,35—40℃时形成半固体状凝胶,90℃以上溶解;琼脂主要成分为琼脂糖和果胶,还有少量含氮化合物等)
配制尿素固体培养基。配方:水、葡萄糖,NaCl,K2HPO4,尿素,酚红,琼脂糖。(备注:酚红是一种酸碱指示剂,在酸性时呈黄色,碱性时呈红色。)
Ⅲ.制备瘤胃稀释液如图并接种。
Ⅳ.在无氧条件下进行微生物的培养、观察与计数。
回答下列问题:
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(1)LB全营养固体培养基和尿素固体培养基都含有的微生物生长所需的4类基本营养物质,它们是____________ 。尿素固体培养基需用琼脂糖做凝固剂而不用琼脂的原因是__________________ 。
(2)尿素培养基中加酚红的原因是以尿素为氮源的微生物培养一段时间后,由于细菌产生的______ 向周围扩散,将培养基中的尿素分解,产生的______ 使培养基中的酚红由黄色变成红色。
(3)该小组采用稀释涂布平板法对瘤胃中分解尿素的细菌进行分离和计数。在涂布接种前,随机取若干灭菌后的空白平板(2种平板)先行培养了一段时间,这样做的目的是__________________ 。为了判断尿素培养基是否具有选择作用,实验时还需要同时接种______ 平板。经适当培养,每隔24h统计一次菌落数目。为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数,将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h~48h,观察并统计具有红色环带的菌落数,结果如下表,其中______ 号试管的稀释倍数比较合适(请从上图中1—5号试管中选择填写)。
(4)接下来,该小组对周围红色区域______ (填“大”或“小”)的菌落进行平板划线法纯化和分离,以便获得单菌落。操作时,接种环通过______ 方法灭菌。在第二次及以后划线时,总是从上一次划线的末端开始划线,这样做的目的是____________ 。
Ⅰ.取样:从刚宰杀的牛的瘤胃中取样,将样品装入事先灭过菌的锥形瓶中。
Ⅱ.培养基的配制和灭菌:
配制全营养LB固体培养基。配方:水、蛋白胨,酵母提取物,NaCl,琼脂糖。(备注:琼脂糖是一种链状多糖,35—40℃时形成半固体状凝胶,90℃以上溶解;琼脂主要成分为琼脂糖和果胶,还有少量含氮化合物等)
配制尿素固体培养基。配方:水、葡萄糖,NaCl,K2HPO4,尿素,酚红,琼脂糖。(备注:酚红是一种酸碱指示剂,在酸性时呈黄色,碱性时呈红色。)
Ⅲ.制备瘤胃稀释液如图并接种。
Ⅳ.在无氧条件下进行微生物的培养、观察与计数。
回答下列问题:
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(1)LB全营养固体培养基和尿素固体培养基都含有的微生物生长所需的4类基本营养物质,它们是
(2)尿素培养基中加酚红的原因是以尿素为氮源的微生物培养一段时间后,由于细菌产生的
(3)该小组采用稀释涂布平板法对瘤胃中分解尿素的细菌进行分离和计数。在涂布接种前,随机取若干灭菌后的空白平板(2种平板)先行培养了一段时间,这样做的目的是
稀释倍数 | 1×103 | 1×104 | 1×105 | 1×106 | 1×107 |
菌落数 | >500 | 367 | 248 | 36 | 18 |
(4)接下来,该小组对周围红色区域
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名校
【推荐3】产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株,科研人员开展了相关研究。请回答下列问题:
(1)常规微生物实验中,下列物品及其灭菌方法错误的是_______ (填编号)。
(2)用于筛选和纯培养该类微生物的培养基从功能上看属于______ 培养基。
(3)培养过程中需要对酵母菌进行计数,取0.1mL稀释度为103的稀释液涂布在固体培养基表面,待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板_____ 培养,每隔24h统计一次菌落数,最后统计的三个平板上的菌落数分别是48、46、50,则该样本中含酵母菌_____ 个/mL。用此方法测定的酵母菌数量_____ (填“大于”“等于”或“小于”)实际活菌数量。
(4)为了进一步提高酵母菌产酶能力,对分离所得的菌株,采用射线辐照进行____ 育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以______ 为唯一碳源的固体培养基上,培养一段时间后,按照菌落直径大小进行初筛,选择直径______ 的菌落,纯化后获得A、B两突变菌株。
(5)在处理含油废水的同时,可获得单细胞蛋白,实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能,进行了培养研究,结果如图。据图分析,应选择菌株____ 进行后续相关研究,理由是______ 。
(1)常规微生物实验中,下列物品及其灭菌方法错误的是
编号 | ① | ② | ③ | ④ |
物品 | 培养基 | 接种环 | 培养皿 | 涂布器 |
灭菌方法 | 高压蒸汽 | 火焰灼烧 | 干热 | 臭氧 |
(2)用于筛选和纯培养该类微生物的培养基从功能上看属于
(3)培养过程中需要对酵母菌进行计数,取0.1mL稀释度为103的稀释液涂布在固体培养基表面,待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板
(4)为了进一步提高酵母菌产酶能力,对分离所得的菌株,采用射线辐照进行
(5)在处理含油废水的同时,可获得单细胞蛋白,实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能,进行了培养研究,结果如图。据图分析,应选择菌株
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名校
解题方法
【推荐1】白色污染问题已引起全社会广泛关注,降解塑料的研究和开发是解决白色污染的理想途径之一。地膜的主要成分是聚乙烯[化学式为(C2H4)n]。残留在土壤中的地膜难以被降解,为筛选出高效降解地膜的细菌,研究人员进行了如图所示的操作。X培养基是选择培养基,聚乙烯分解菌在该培养基上会形成抑菌圈。回答下列同题:__________ 的土壤,制作培养基时,应将________ 作为X培养基中的唯一碳源。
(2)为了证明所配制X培养基具有选择作用,在恒温培养前,需要将接种后的X培养基平板和接种后的完全培养基平板同时进行培养,待两种培养基平板上的菌落生长稳定时,比较两种平板培养基上的菌落数。若结果为_______________ ,则可证明上述观点。
(3)可挑选X培养基中的__________ (填序号)中的单菌落接种到Y培养基上进行培养。配制Y培养基时,其pH一般调至__________ 。
(4)在5个平板上各接种稀释倍数为103的菌液样品0.1mL,培养一段时间后,平板上的菌落数分别为28、50,52,54,313,则每升原菌液样品中细菌数为_________ 个。
(2)为了证明所配制X培养基具有选择作用,在恒温培养前,需要将接种后的X培养基平板和接种后的完全培养基平板同时进行培养,待两种培养基平板上的菌落生长稳定时,比较两种平板培养基上的菌落数。若结果为
(3)可挑选X培养基中的
(4)在5个平板上各接种稀释倍数为103的菌液样品0.1mL,培养一段时间后,平板上的菌落数分别为28、50,52,54,313,则每升原菌液样品中细菌数为
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适中
(0.65)
名校
【推荐2】谷物中淀粉酶活性是影响啤酒发酵产酒的重要因素。某科研小组为寻找啤酒发酵的优良原料,比较了小麦、谷子、绿豆萌发前后淀粉酶活性,其实验过程及结果如下。分析回答:
①谷物的萌发:称取等量小麦、谷子、绿豆三种谷物的干种子,都均分为两份,其中一份浸泡2.5h,放入25℃恒温培养箱,至长出芽体为止。
②酶提取液的制备:将三种谷物的干种子和萌发种子分别置于研钵中,加入石英砂和等量蒸馏水研磨、离心,制备酶提取液。
③反应进程的控制:分别取②制备的酶提取液1mL置于不同的试管中,加入1mL1%的淀粉溶液,25℃保温5min后,立即将试管放入沸水浴中保温5min。
④吸光度的测定:在试管中加入_____?、摇匀、加热,当溶液由蓝色变为砖红色后,用分光光度计依次测定各试管的吸光度。
⑤酶活性的计算:将测定值与标准麦芽糖溶液吸光度比对,计算出淀粉酶活性,结果如下:
(1)本研究的自变量有____________ 。
(2)步骤②中加入“石英砂”的目的是____________ ;步骤③中立即将试管在沸水浴中保温5min的作用是______ ,避免因吸光度测定先后对实验结果的影响;步骤④“?”加入的试剂是____________ 。
(3)实验结果表明,谷物萌发过程中淀粉酶活性____ ,其意义是_______ 。
(4)本实验对生产实践的指导意义是应优先选择____________ 作为啤酒发酵的原料。
(5)敲除酿酒酵母中的蛋白酶基因,减少发酵液中蛋白的水解,有助于增强啤酒泡沫的稳定性,从而改善啤酒的品质。用酪蛋白固体培养基筛选突变体,野生型可以水解酪蛋白,在菌落周围形成透明圈。需要筛选透明圈____________ (“较大”、“较小”)的菌落,表明其蛋白酶活性____________ (“强”、“弱”)。
(6)啤酒发酵时具有活力的酵母需达到一定的数量,故在菌种活化的过程中,需定时取样,检测酵母的生长状况。若某次样品经2次10倍稀释后,经等体积台盼蓝染色,在25×16型血细胞计数板上计数____________ 色细胞,5个中格中的细胞数为244个,该样品中活酵母细胞的密度为______ 个细胞/mL。
①谷物的萌发:称取等量小麦、谷子、绿豆三种谷物的干种子,都均分为两份,其中一份浸泡2.5h,放入25℃恒温培养箱,至长出芽体为止。
②酶提取液的制备:将三种谷物的干种子和萌发种子分别置于研钵中,加入石英砂和等量蒸馏水研磨、离心,制备酶提取液。
③反应进程的控制:分别取②制备的酶提取液1mL置于不同的试管中,加入1mL1%的淀粉溶液,25℃保温5min后,立即将试管放入沸水浴中保温5min。
④吸光度的测定:在试管中加入_____?、摇匀、加热,当溶液由蓝色变为砖红色后,用分光光度计依次测定各试管的吸光度。
⑤酶活性的计算:将测定值与标准麦芽糖溶液吸光度比对,计算出淀粉酶活性,结果如下:
名称 | 小麦 | 谷子 | 绿豆 |
未萌发谷物的淀粉酶活性/U·g-1 | 0.0289 | 0.0094 | 0.0074 |
萌发谷物的淀粉酶活性/U·g-1 | 5 | 1.7645 | 0.0395 |
(2)步骤②中加入“石英砂”的目的是
(3)实验结果表明,谷物萌发过程中淀粉酶活性
(4)本实验对生产实践的指导意义是应优先选择
(5)敲除酿酒酵母中的蛋白酶基因,减少发酵液中蛋白的水解,有助于增强啤酒泡沫的稳定性,从而改善啤酒的品质。用酪蛋白固体培养基筛选突变体,野生型可以水解酪蛋白,在菌落周围形成透明圈。需要筛选透明圈
(6)啤酒发酵时具有活力的酵母需达到一定的数量,故在菌种活化的过程中,需定时取样,检测酵母的生长状况。若某次样品经2次10倍稀释后,经等体积台盼蓝染色,在25×16型血细胞计数板上计数
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(0.65)
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【推荐3】为消灭传染性病菌,一些地区对消毒剂的使用量大幅度增加,大量使用消毒剂会造成抗性细菌的出现,这引起了人们的担忧。为了研究消毒剂对土壤中细菌的影响,某实验室进行了如表所示的实验,然后对培养基上的菌落数进行统计。其中“+”表示添加,“-”表示不添加;LB固体培养基为细菌培养基。回答下列问题:
(1)一般使用______ 来制备稀释度相同且适宜的两种土壤稀释液;在进行实验处理时,表中培养基接种的方法是______ 。
(2)喷施消毒剂后土壤中细菌数目恢复正常需要20天以上,研究人员依据实验结果绘制的柱状图如下。______ 。B组与D组的菌落数目明显不同,说明使用消毒剂会导致_______ 。②培养一段时间研究人员可以根据菌落的大小、形态、颜色等特区分所获得的菌落是否为目的菌种,原因是在一定的培养条件下,_____ 。培养过程中检测培养基是否合格的操作是_______ 。
组别 | A组 | B组 | C组 | D组 |
普通土壤稀释液 | + | + | - | ? |
喷施消毒剂后的土壤稀释液 | - | - | + | ? |
LB固体培养基 | + | - | + | ? |
含消毒剂的LB固体培养基 | - | + | - | ? |
(1)一般使用
(2)喷施消毒剂后土壤中细菌数目恢复正常需要20天以上,研究人员依据实验结果绘制的柱状图如下。
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