已知SARS是由一种RNA病毒感染所引起的疾病。SARS病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原,在SARS病人康复后的血清中有抗S蛋白的特异性抗体。某研究小组为了研制预防SARS病毒的疫苗,开展了前期研究工作。其简要的操作流程如下,请回答下列问题:
(1)实验步骤①所代表的过程需要__________________ 酶催化。
(2)步骤②构建重组DNA分子A和重组DNA分子B必须使用限制性核酸内切酶和____________ 酶,后者的作用是将限制性核酸内切酶切割的______________ 和________________________________ 连接起来。
(3)如果省略步骤②而将大量扩增的S基因直接导入大肠杆菌,一般情况下,不能得到表达的S蛋白,其主要原因是S基因在大肠杆菌中不能_________________ ,也不能__________________ 。
(4)为了检验步骤④所表达的S蛋白是否与病毒S蛋白有相同的免疫反应特性,可用_______________ 与__________________ 进行抗原—抗体特异性反应实验,从而得出结论。
(5)步骤④和⑥的结果相比,原核细胞表达的S蛋白与真核细胞表达的S蛋白的氨基酸序列________ (填“相同”或“不同”),根本原因是_____________________________________ 。
(1)实验步骤①所代表的过程需要
(2)步骤②构建重组DNA分子A和重组DNA分子B必须使用限制性核酸内切酶和
(3)如果省略步骤②而将大量扩增的S基因直接导入大肠杆菌,一般情况下,不能得到表达的S蛋白,其主要原因是S基因在大肠杆菌中不能
(4)为了检验步骤④所表达的S蛋白是否与病毒S蛋白有相同的免疫反应特性,可用
(5)步骤④和⑥的结果相比,原核细胞表达的S蛋白与真核细胞表达的S蛋白的氨基酸序列
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更新时间:2021-02-19 17:10:32
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【推荐1】人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白,可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下:
(1)htPA基因与载体用_________ 切割后,通过DNA连接酶连接,以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA,可采用_________ 技术。
(2)为获取更多的卵(母)细胞,要对供体母羊注射促性腺激素,使其__________ 。采集的精子需要经过________ 才具备受精能力。
(3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________ 。为了获得母羊,移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________ 。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体,该过程的生殖方式是__________ 。
(4)若检测到转ht-PA基因母羊_________ ,说明目的基因成功表达。
(1)htPA基因与载体用
(2)为获取更多的卵(母)细胞,要对供体母羊注射促性腺激素,使其
(3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是
(4)若检测到转ht-PA基因母羊
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【推荐2】将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗,饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。
表几种限制酶识别列及切割位点数
请根据以上图表回答下列问题:
(1)根据表,图步骤③所用的DNA连接酶对所连接的平末端两端的碱基序列是否有专一性要求?_________ (填“有”或者“没有”)。限制酶断开的化学键名称是________________________
(2)图步骤⑤中用_________ 处理农杆菌,使其成为___________ 细胞。农杆菌转化法的原理是:在农杆菌的Ti质粒上存在________________ 片段,它具有可以整合到受体细胞____________________ 的特点,使目的基因进入植物细胞并稳定维持和表达。
(3)画出用PstI酶切得到的两个黏性末端___________________________
(4)对符合设计要求的重组质粒 T 进行酶切。假设所用的酶均可将识别位点完全切开, 请根据图中标示的酶切位点和表所列的识别序列,对以下酶切结果作出判断。
①采用 EcoRⅠ和 PstⅠ酶切,得到_______ 种 DNA 片段。
②采用 EcoRⅠ和 SmaⅠ酶切,得到_______ 种 DNA 片段。
表几种限制酶识别列及切割位点数
限制酶 | Abul | Ecor I | PstⅠ | SmaⅠ |
切割位点 |
请根据以上图表回答下列问题:
(1)根据表,图步骤③所用的DNA连接酶对所连接的平末端两端的碱基序列是否有专一性要求?
(2)图步骤⑤中用
(3)画出用PstI酶切得到的两个黏性末端
(4)对符合设计要求的重组质粒 T 进行酶切。假设所用的酶均可将识别位点完全切开, 请根据图中标示的酶切位点和表所列的识别序列,对以下酶切结果作出判断。
①采用 EcoRⅠ和 PstⅠ酶切,得到
②采用 EcoRⅠ和 SmaⅠ酶切,得到
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【推荐3】下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别位点,Apr表示抗青霉素的抗性基因,Tcr表示抗四环素的抗性基因。
(1)基因工程中使用的限制酶,其特点是_________ 。
(2)将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X-1混合连接,连接后获得的质粒类型有____ 。
①X-1 ②X-2 ③X-3 ④X-4
(3)若将上图所示X—1、X—2、X—3、X—4四种质粒导入大肠杆菌,然后分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上。在这两种培养基上均不能生长的大肠杆菌细胞类型有____________ 。
(4)如果X-1用E1酶切,产生850对碱基和3550对碱基两种片段:那么质粒X-2(Tcr基因的长度为1200对碱基)用E2酶切后的片段长度为____________ 对碱基。
(1)基因工程中使用的限制酶,其特点是
(2)将两端用E1切开的Tcr基因与用E1切开的质粒X-1混合连接,连接后获得的质粒类型有
①X-1 ②X-2 ③X-3 ④X-4
(3)若将上图所示X—1、X—2、X—3、X—4四种质粒导入大肠杆菌,然后分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上。在这两种培养基上均不能生长的大肠杆菌细胞类型有
(4)如果X-1用E1酶切,产生850对碱基和3550对碱基两种片段:那么质粒X-2(Tcr基因的长度为1200对碱基)用E2酶切后的片段长度为
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【推荐1】2020年初,新型冠状病毒(2019nCoV)引发的新冠肺炎疫情逐渐蔓延全球,对人们的健康和生活造成了极大的影响。回答下列问题。
(1)感染2019nCoV会不自主地引起咳嗽反射,这说明咳嗽反射属于__________ (填“条件”或“非条件”)反射。进行咳嗽反射时,兴奋在传入神经纤维上的传导方向是___________ (填“单向的”或“双向的”)。
(2)如图为采用“实时荧光定量RT-PCR”技术检测2019nCoV核酸的基本流程,1~2h内即可得到检测结果。
Ⅰ.过程①在中心法则中称为__________ 。
Ⅱ.过程②表示利用PCR扩增DNA片段,需要用到的酶有__________ (填“DNA聚合酶”、“RNA聚合酶”或“DNA水解酶”)。下列利用到荧光标记的研究有__________ 。
A.证明细胞膜具有流动性 B.观察染色体两端的端粒
C.探究DNA的复制方式 D.观察基因在染色体上呈线性排列
(3)细胞因子是免疫细胞产生的具有增强免疫功能的物质(如淋巴因子)。患者感染2019nCoV后,细胞因子会活化某些免疫细胞产生更多细胞因子,最终导致免疫反应过度。细胞因子分泌的调节属于_____________ (填“正反馈”或“负反馈”)调节。
(1)感染2019nCoV会不自主地引起咳嗽反射,这说明咳嗽反射属于
(2)如图为采用“实时荧光定量RT-PCR”技术检测2019nCoV核酸的基本流程,1~2h内即可得到检测结果。
Ⅰ.过程①在中心法则中称为
Ⅱ.过程②表示利用PCR扩增DNA片段,需要用到的酶有
A.证明细胞膜具有流动性 B.观察染色体两端的端粒
C.探究DNA的复制方式 D.观察基因在染色体上呈线性排列
(3)细胞因子是免疫细胞产生的具有增强免疫功能的物质(如淋巴因子)。患者感染2019nCoV后,细胞因子会活化某些免疫细胞产生更多细胞因子,最终导致免疫反应过度。细胞因子分泌的调节属于
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名校
【推荐2】下图A、B分别代表原核生物基因结构和真核生物基因结构。原核基因的结构组成比较简单,包括启动区、转录区和终止区。转录区可进一步分为5'-非翻译区(5'-UTR)、编码区和3'-非翻译区(3′-UTR)。在真核基因的序列中,其转录区的编码序列是间断的、不连续的,其中编码氨基酸的序列叫做外显子,非编码序列叫做内含子,最初转录出来的mRNA,通过剪切将内含子去除,只留下外显子部分,在外显子部分的上下游还各有一段不翻译的区域(5'-UTR和3'-UTR)。原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。已知在人体中胰岛素基因(有内含子)可以表达出胰岛素。回答下列问题:
(1)某同学从人的基因组文库中获得了人的胰岛素基因,以大肠杆菌作为受体细胞却未得到胰岛素,其原因是____ 。无论真核基因还是原核基因首端都有一个启动子,它是___ 。
(2)现在常用PCR特异性地快速扩增目的基因,获得的人胰岛素基因可以在PCR扩增仪中自动完成,完成以后,常采用____ 来鉴定PCR的产物。在凝胶中DNA分子的迁移速率与____ 、DNA分子的大小和构象等有关。
(3)若用家蚕作为表达胰岛素的受体,通过PCR等技术检测家蚕的染色体DNA已经插入胰岛素基因且已经转录出mRNA,若要继续检测家蚕细胞中胰岛素基因是否翻译出胰岛素,可用的检测方法是____ 。
(4)科研人员利用蛋白质工程合成速效胰岛素,该技术的实验流程为:
其中,流程A是_____ 。
(1)某同学从人的基因组文库中获得了人的胰岛素基因,以大肠杆菌作为受体细胞却未得到胰岛素,其原因是
(2)现在常用PCR特异性地快速扩增目的基因,获得的人胰岛素基因可以在PCR扩增仪中自动完成,完成以后,常采用
(3)若用家蚕作为表达胰岛素的受体,通过PCR等技术检测家蚕的染色体DNA已经插入胰岛素基因且已经转录出mRNA,若要继续检测家蚕细胞中胰岛素基因是否翻译出胰岛素,可用的检测方法是
(4)科研人员利用蛋白质工程合成速效胰岛素,该技术的实验流程为:
其中,流程A是
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名校
【推荐3】抗体分子含有两条短肽链和两条长肽链,科研人员将小鼠编码抗体(抗禽流感病毒抗原)可变区的基因片段与人编码抗体恒定区的基因片段整合,构建如图1所示的基因表达载体(Hind Ⅲ等表示不同限制酶的切割位点),导入中国仓鼠卵巢细胞后,筛选能够稳定表达的细胞株,成功获得大量嵌合抗体,如图2所示。请根据资料回答下列问题:
(1)为构建人—鼠嵌合抗体基因的表达载体,需要对编码抗体不同片段的基因进行重组,为此应该从分泌小鼠单克隆抗体的杂交细胞中提取____ ,经逆转录得到____ 用于PCR扩增,并分别与人抗体的恒定区DNA序列拼接。
(2)在PCR反应体系中需加入模板、4种脱氧核苷三磷酸、____ 、____ 及缓冲液等。
(3)构建人—鼠嵌合抗体基因的表达载体时,先将人抗体的短、长链基因部分序列分别与相应鼠抗体的可变区序列整合后插入到两个启动子的下游。这一过程需要将鼠抗体长链基因经____ 双酶切,鼠抗体短链基因经____ 双酶切。①是____ 识别和结合的部位,它可以驱动相关基因转录。
(4)将重组质粒导入中国仓鼠卵巢细胞后,可采用____ 技术检验基因是否成功转录。通过基因工程技术成功表达并组装出有生物学活性的嵌合抗体,该嵌合抗体的优点是____ 。
(1)为构建人—鼠嵌合抗体基因的表达载体,需要对编码抗体不同片段的基因进行重组,为此应该从分泌小鼠单克隆抗体的杂交细胞中提取
(2)在PCR反应体系中需加入模板、4种脱氧核苷三磷酸、
(3)构建人—鼠嵌合抗体基因的表达载体时,先将人抗体的短、长链基因部分序列分别与相应鼠抗体的可变区序列整合后插入到两个启动子的下游。这一过程需要将鼠抗体长链基因经
(4)将重组质粒导入中国仓鼠卵巢细胞后,可采用
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【推荐1】黑麦草具有抗除草剂草甘膦的能力,是因为黑麦草拥有编码抗草甘膦酶的基因。科学家利用该基因.通过转基因技术获得了抗除草剂草甘膦的玉米新品种。培育新品种过程中用到了PCR技术(如图所示),请回答下列问题:
(1)通过反转录法得到_______________ 文库,它属于部分基因文库,可从中选取抗草甘膦酶的基因。
(2)体外获得大量编码抗草甘膦酶的基因要利用PCR技术,该技术所依据的原理为_________ ,图中物质A是__________ ,B酶是__________ 。
(3)将目的基因导入植物细胞有多种方法,最常用的是_______________ 。
(4)若需要对转入抗草甘膦基因的玉米进行个体生物学水平的鉴定,需要对玉米_____ 。
(5)若实验结果不理想,为了提高抗草甘膦酶活性,可以通过___________ 工程设计和改造编码抗草甘膦酶的基因。
(1)通过反转录法得到
(2)体外获得大量编码抗草甘膦酶的基因要利用PCR技术,该技术所依据的原理为
(3)将目的基因导入植物细胞有多种方法,最常用的是
(4)若需要对转入抗草甘膦基因的玉米进行个体生物学水平的鉴定,需要对玉米
(5)若实验结果不理想,为了提高抗草甘膦酶活性,可以通过
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【推荐2】埃博拉病毒是一种强致病性RNA病毒,以埃博拉病毒外壳某蛋白为主要抗原制备疫苗和抗体是预防和诊疗埃博拉出血热的一种有效策略。其疫苗生产和抗体制备的流程之一如图:
(1)过程①需要在______________ 酶的催化下合成DNA,将获得的DNA与载体连接后导入受体菌群建立病毒的_________ 文库,再从中筛选出A基因。
(2)过程②利用PCR技术扩增A某因时,需在_________ 酶的作用下进行,PCR技术的原理是_________ 。
(3)过程③采用的技术手段是_________ ,获得的X是_________ 。
(4)可选用图中基因工程生产的_________ 所制备的疫苗注射到健康人体内,对埃博拉病毒进行免疫预防,对该传染病疑似患者确诊时,可从疑似患者体内分离病毒,与图中的_________ 进行特异性结合检测。
(1)过程①需要在
(2)过程②利用PCR技术扩增A某因时,需在
(3)过程③采用的技术手段是
(4)可选用图中基因工程生产的
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名校
【推荐3】CD47是一种跨膜糖蛋白,肺癌、结肠癌等多种肿瘤细胞表面的CD47含量明显高于正常细胞。研究发现,利用抗体抑制肿瘤细胞表面的CD47蛋白的活性,可促进巨噬细胞吞噬肿瘤细胞。为制备抗CD47的单克隆抗体,科学家按如下流程进行相关实验。请回答下列问题:
(1)上图EcoRI等均为限制酶,Kanr、Tcr分别为卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因。为了构建基因表达载体,应该选用___________ 酶切割外源DNA和质粒DNA。
(2)为筛选成功导入重组质粒的大肠杆菌,利用图中两种标记基因,筛选出_________________ 的大肠杆菌,利用该菌种获得大量CD47蛋白。
(3)下图①是指从小鼠________ 中获得免疫后B细胞,经过选择性培养的杂交瘤细胞,还需进行操作②______________ 才可获得能分泌抗CD47抗体的杂交瘤细胞。体外培养该细胞获得大量单克隆抗体,需要满足以下条件:无菌无毒环境,充足的营养和适宜温度与pH,含有____________ 的气体环境。
(4)为验证抗CD47抗体对巨噬细胞吞噬肿瘤细胞的促进作用,研究人员将巨噬细胞和肿瘤细胞共同培养,加入适量抗CD47抗体,测定巨噬细胞的吞噬能力。要得出该结论还需要进行的操作是________________________________ 。
(1)上图EcoRI等均为限制酶,Kanr、Tcr分别为卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因。为了构建基因表达载体,应该选用
(2)为筛选成功导入重组质粒的大肠杆菌,利用图中两种标记基因,筛选出
(3)下图①是指从小鼠
(4)为验证抗CD47抗体对巨噬细胞吞噬肿瘤细胞的促进作用,研究人员将巨噬细胞和肿瘤细胞共同培养,加入适量抗CD47抗体,测定巨噬细胞的吞噬能力。要得出该结论还需要进行的操作是
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名校
【推荐1】重组DNA技术使实验上从基因到蛋白和从蛋白到基因都成为可能。从少量的纯化蛋白可得到部分的氨基酸序列,这为获取目的基因提供了序列信息。一旦该基因被分离并测序,它的蛋白编码序列就可用于设计一个DNA分子,然后在遗传工程化细胞中产生蛋白质产物。这样就可以在生化或者结构上研究该蛋白质了。该基因还可以经过操作后转入细胞或者生物体内研究其功能。据图回答下列问题:
(1)由图可知,获取目的基因序列的方法可以是________________________ 。
(2)如果从cDNA文库中获取目的基因,需要对cDNA文库进行筛选,其原因是_______________ 。
(3)大肠杆菌作为受体细胞,一般用Ca2+进行处理,使之变成_______ 细胞。
(4)PCR扩增基因的前提是:根据已知目的基因的序列合成__________ ,还需要在________ 的作用下进行延伸。
(5)合成的探针与转基因生物的基因组DNA杂交,如果显示出杂交带,则表明__________ 。
(6)该技术使科学家可以设计一个新的DNA,进而产生大量蛋白质,研究其功能,这就是二代基因工程—____________ ,它是以蛋白质分子的________ 及其与生物_________ 的关系作为基础。
(1)由图可知,获取目的基因序列的方法可以是
(2)如果从cDNA文库中获取目的基因,需要对cDNA文库进行筛选,其原因是
(3)大肠杆菌作为受体细胞,一般用Ca2+进行处理,使之变成
(4)PCR扩增基因的前提是:根据已知目的基因的序列合成
(5)合成的探针与转基因生物的基因组DNA杂交,如果显示出杂交带,则表明
(6)该技术使科学家可以设计一个新的DNA,进而产生大量蛋白质,研究其功能,这就是二代基因工程—
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【推荐2】学习以下材料,回答下列小题。
人类基因组古病毒“复活”驱动衰老
细胞衰老是机体衰老及各种衰老相关疾病发生发展的重要诱因。人类基因组潜藏着诸多“老化”信号,这些“老化”信号常受到表观遗传的严密监控而处于沉默状态,但在年龄增加的过程中,这些“老化”信号逐渐逃离监控,进而激活细胞内的一系列衰老程序。
数百万年前,远古逆转录病毒入侵整合到人类的基因组并潜伏下来,这些病毒被称为“内源性逆转录病毒(ERV)”。我国科学家首次发现了ERV在细胞衰老过程中能被再度唤醒,其机制如下图所示。衰老细胞中表观修饰改变后导致基因组中ERV DNA被激活,通过一系列过程产生新的病毒颗粒。在衰老细胞的细胞质基质中,ERV RNA还能形成ERV DNA,使细胞误以为有外界病毒入侵,从而激活cGAS-STING天然免疫通路,使细胞产生并分泌SASP,SASP则会进一步加速细胞衰老。另一方面,衰老细胞释放的ERV病毒颗粒可通过旁分泌或体液运输的方式在器官、组织、细胞间传递,最终使得年轻细胞因受“感染”而老化。该研究为衰老及老年疾病的评估和预警提供了科学依据,在此基础上,可开发有效延缓组织乃至系统衰老的干预技术,为衰老相关疾病的防治提供新的策略。
(1)细胞衰老的过程是细胞的生理状态和化学反应发生复杂变化的过程,请从细胞形态结构和功能两个角度,各写出一点衰老细胞的主要特征:_____ 。
(2)请依据中心法则用文字和箭头画出衰老细胞基因组中ERV DNA被激活后遗传信息的流动过程图_____ 。
(3)在观察到衰老细胞中存在病毒颗粒后,研究者通过PCR技术和_____ 技术检测了衰老细胞培养液和年轻细胞培养液中ERV RNA及ERV表面特异性蛋白的含量,并通过电子显微镜观察细胞膜和周围环境中是否存在ERV病毒颗粒。研究者进行以上三个实验的目的是_____ 。
(4)请选择相应处理和实验结果完善以下实验,为验证“衰老细胞释放的ERV病毒颗粒能够使年轻细胞老化”这一观点提供支持证据。
a.年轻细胞的细胞匀浆 b.衰老细胞的细胞匀浆
c.培养了年轻细胞一段时间的培养液 d.培养了衰老细胞一段时间的培养液
e.抗ERV抗体 f.无关抗体
g.吸附在实验组细胞上的ERV比对照组多 h.吸附在实验组细胞上的ERV比对照组少
i.实验组细胞的衰老相关指标高于对照组 j.实验组细胞的衰老相关指标低于对照组
(5)请根据图示信息提出一种干预策略用于抑制ERV“复活”引起的衰老_____ 。
人类基因组古病毒“复活”驱动衰老
细胞衰老是机体衰老及各种衰老相关疾病发生发展的重要诱因。人类基因组潜藏着诸多“老化”信号,这些“老化”信号常受到表观遗传的严密监控而处于沉默状态,但在年龄增加的过程中,这些“老化”信号逐渐逃离监控,进而激活细胞内的一系列衰老程序。
数百万年前,远古逆转录病毒入侵整合到人类的基因组并潜伏下来,这些病毒被称为“内源性逆转录病毒(ERV)”。我国科学家首次发现了ERV在细胞衰老过程中能被再度唤醒,其机制如下图所示。衰老细胞中表观修饰改变后导致基因组中ERV DNA被激活,通过一系列过程产生新的病毒颗粒。在衰老细胞的细胞质基质中,ERV RNA还能形成ERV DNA,使细胞误以为有外界病毒入侵,从而激活cGAS-STING天然免疫通路,使细胞产生并分泌SASP,SASP则会进一步加速细胞衰老。另一方面,衰老细胞释放的ERV病毒颗粒可通过旁分泌或体液运输的方式在器官、组织、细胞间传递,最终使得年轻细胞因受“感染”而老化。该研究为衰老及老年疾病的评估和预警提供了科学依据,在此基础上,可开发有效延缓组织乃至系统衰老的干预技术,为衰老相关疾病的防治提供新的策略。
(1)细胞衰老的过程是细胞的生理状态和化学反应发生复杂变化的过程,请从细胞形态结构和功能两个角度,各写出一点衰老细胞的主要特征:
(2)请依据中心法则用文字和箭头画出衰老细胞基因组中ERV DNA被激活后遗传信息的流动过程图
(3)在观察到衰老细胞中存在病毒颗粒后,研究者通过PCR技术和
(4)请选择相应处理和实验结果完善以下实验,为验证“衰老细胞释放的ERV病毒颗粒能够使年轻细胞老化”这一观点提供支持证据。
实验组 | 对照组 | 实验结果 |
① | ③ | ⑤ |
c.培养了年轻细胞一段时间的培养液 d.培养了衰老细胞一段时间的培养液
e.抗ERV抗体 f.无关抗体
g.吸附在实验组细胞上的ERV比对照组多 h.吸附在实验组细胞上的ERV比对照组少
i.实验组细胞的衰老相关指标高于对照组 j.实验组细胞的衰老相关指标低于对照组
(5)请根据图示信息提出一种干预策略用于抑制ERV“复活”引起的衰老
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【推荐3】酵母双杂交技术是筛选能与已知蛋白互作的蛋白质的方法,其主要原理如图1。黄瓜花叶病毒(CMV)可侵染200多种植物,病毒的外壳蛋白(CMVCP)直接参与病毒的细胞间转移、症状表现等。研究人员利用酵母双杂交技术,从CMV感染的番茄叶片cDNA文库中筛选出CMVCP互作蛋白基因,图2为构建CMVCP诱饵载体(能表达出BD-CP融合蛋白)的流程。请据图回答下列问题。
(1)图1中,获得BD-X蛋白的关键是将相应序列连接形成融合基因,融合基因获得过程属于______ (变异类型)。X与Y的结合能使转录因子的BD和AD同时结合到启动子上,进而招募酶x催化LacZ基因的转录,酶X是______ 。
(2)图2中,过程①提取总RNA时选择有明显感染症状叶片的原因是______ 。过程②中通常利用RT-PCR技术获得cDNA,上述技术中不同循环次数的扩增产物电泳结果如图3,则最适宜的循环次数是______ 次,依据是______ 。
(3)图2过程③构建诱饵载体时,为保证CPcDNA能定向插入到指定位置,需要在过程②设计PCR引物时,______ 。用获得的诱饵载体先转化大肠杆菌,再用______ 法将菌液接种到含______ 的选择培养基上,挑取阳性单菌落细胞进行测序,确认插入的基因序列正确。
(4)获得CMV CP诱饵载体转化的酵母菌后,研究人员进一步开展CMV CP互作蛋白的筛选研究,其主要实验流程是:构建感染CMV的番茄cDNA文库→构建一系列靶蛋白载体→______ →接种培养,获取呈______ 色的菌落细胞→筛选、鉴定互作蛋白。
(1)图1中,获得BD-X蛋白的关键是将相应序列连接形成融合基因,融合基因获得过程属于
(2)图2中,过程①提取总RNA时选择有明显感染症状叶片的原因是
(3)图2过程③构建诱饵载体时,为保证CPcDNA能定向插入到指定位置,需要在过程②设计PCR引物时,
(4)获得CMV CP诱饵载体转化的酵母菌后,研究人员进一步开展CMV CP互作蛋白的筛选研究,其主要实验流程是:构建感染CMV的番茄cDNA文库→构建一系列靶蛋白载体→
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