从自然菌样筛选较理想的生产菌种的一般步骤是:采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。
(1)不同微生物的生存环境不同,获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样,然后再按一定的方法分离、纯化。培养分解纤维素的细菌样应从____________ 的环境采集。
(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件,同时抑制或阻止其他微生物生长,使其在群落中的数量大大增加,从而分离出所需微生物的培养方法。对纤维素分解菌的富集培养应选择_______________ 的培养基,此外,在筛选纤维素的分解菌的过程中则是用____________ 染色法,培养基中出现以纤维素分解菌为中心的_________ 。
(3)对分离的菌种还要做进一步的鉴定,如在鉴定分解尿素的细菌时,需在培养基中加入________ 指示剂,若指示剂变________ 色,说明有目的菌株存在。
(4)从土壤中分离出分解尿素的细菌后,如需计数,在对样品悬液进行梯度稀释时,未经振荡而直接取上层悬液进行梯度稀释,用不同稀释倍数的样液接种到平板上进行培养和计数,统计出的菌落数往往比正确操作统计出的菌落数______ (填偏大、偏小或相等)。
(5)DNA的鉴定中,DNA与________ 试剂混合经水浴加热呈蓝色。
(1)不同微生物的生存环境不同,获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样,然后再按一定的方法分离、纯化。培养分解纤维素的细菌样应从
(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件,同时抑制或阻止其他微生物生长,使其在群落中的数量大大增加,从而分离出所需微生物的培养方法。对纤维素分解菌的富集培养应选择
(3)对分离的菌种还要做进一步的鉴定,如在鉴定分解尿素的细菌时,需在培养基中加入
(4)从土壤中分离出分解尿素的细菌后,如需计数,在对样品悬液进行梯度稀释时,未经振荡而直接取上层悬液进行梯度稀释,用不同稀释倍数的样液接种到平板上进行培养和计数,统计出的菌落数往往比正确操作统计出的菌落数
(5)DNA的鉴定中,DNA与
更新时间:2021-07-20 19:18:11
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【推荐1】请回答有关微生物培养、应用、保存以及物质提取的问题:
(1)微生物培养过程中对培养皿进行灭菌时常用的方法是_____ 。培养细菌时常用到的培养基是______ (填培养基名称)。
(2)从土壤中分离尿素分解菌的过程中,应向以_______________ 为唯一氮源的培养基中加入_______________ 指示剂。
(3)对于需要临时保藏的菌种,首先要将菌种接种到试管的_______________ 培养基上,在合适的温度下培养,等菌落长成后,再将试管放入_______________ ℃的冰箱中保藏。对于需要长期保存的菌种,可以采用________________ 的方法。
(4)从胡萝卜中提取胡萝卜素时常用的方法是________________ 法,鉴定胡萝卜素的方法是_______________________________________________ 。
(5)蛋白质的提取与分离一般分为四步:______________________________ 。
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解题方法
【推荐2】尿素是一种高浓度氮肥,被土壤中某些细菌分解为氨后,可以被植物吸收利用。某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌,并统计每克土壤样品中的活菌数目,培养基配方如下表所示。回答下列问题:
(1)根据培养基的成分分析,该同学______ (填“能”或“不能”)分离出土壤中分解尿素的细菌,原因是_______ 。在接种前需要检测培养基灭菌是否彻底,常用的检测方法是___ 。
(2)某同学在分离纯化土壤中分解尿素的细菌时,发现培养基上的菌落连成一片,最可能的原因是_______ ,为避免此种现象发生,正确的操作方法是________ 。
(3)尿素分解菌因为能合成______ ,从而能将尿素分解成CO2和_________ 。
KH2PO4 | Na2HPO4 | MgSO4.7H2O | |
1.4g | 2.1g | 0.2g | |
蛋白胨 | 葡萄糖 | 尿素 | 琼脂 |
1.0g | 10.0g | 1.0g | 15.0g |
(2)某同学在分离纯化土壤中分解尿素的细菌时,发现培养基上的菌落连成一片,最可能的原因是
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【推荐3】尿素是一种高浓度氮肥,通过土壤中某些细菌分解为氨后,被植物吸收利用。某配方如下:
(1)微生物培养用到的各种培养基具体配方不同,但一般都含有________________ 。
(2)根据培养基的成分析,该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌?________________ (填“能”或“不能”),原因是________________ 。在接种前需要检测培养基灭菌是否彻底,常用的检测方法是________________ 。
(3)要统计每克土壤样品中活菌数目,最好采用________________ 法接种。某同学取稀释倍数为105倍的菌液0.1ml接种后,测得平板上菌落数为156、178和191,则每毫升样品中的菌落数为________________ 个。
(4)某同学在分离纯化土壤中分解尿素的细菌时,发现培养基上的菌落连成一片,可能的原因是________________ ,为避免此种现象发生,正确的操作方法是________________ 。
KH2pO4 | NaHPO4 | MgSO4·7H2O | 蛋白胨 | 葡萄糖 | 尿素 | 琼脂 |
1.4g | 2.1g | 0.2g | 1.0g | 10.0g | 1.0g | 15.0g |
(1)微生物培养用到的各种培养基具体配方不同,但一般都含有
(2)根据培养基的成分析,该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌?
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【推荐1】纤维素分解菌能将纤维素废弃物转化为简单糖类或蛋白质等产品,不仅可以解决环境污染问题,还可以作为饲料,缓解粮食危机。下图表示筛选能高效分解秸秆中纤维素的微生物的过程。请回答下列问题:
(1)过程a可以选择______ 的环境。与培养其他微生物的实验相比,过程b使用的培养基的突触特点是以_____ 作为唯一碳源;从功能上看,过程b与过程e使用的培养基的不同点是_____ 。
(2)采用刚果红染色法可筛选出高效分解纤维素的目的菌。其中f中最适合用来分解纤维素的菌落是______ (填数字),纤维素分解菌将纤维素最终分解为______ 。
(3)请对f中透明圈的形成进行解释:_______ 。
(1)过程a可以选择
(2)采用刚果红染色法可筛选出高效分解纤维素的目的菌。其中f中最适合用来分解纤维素的菌落是
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【推荐2】某兴趣小组欲从土壤中筛选具有高效降解秸秆(纤维素)能力的菌株,实验流程如图:
请回答:
(1)获得纯培养物的关键是____________ 。例如:将用于微生物培养的培养皿、接种用具、培养基等进行___________ ;为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在_______ 附近进行。
(2)实验过程中,“选择培养”的目的是_______ ,A过程表示_______ ,B过程应挑选_____ 的菌落。
(3)为确定该菌株是纤维素分解菌,还需要进行________ 实验。
(4)菌种保藏时,可将该菌株接种在斜面培养基上,进行_________ (填“临时”或“长期”)保藏。
请回答:
(1)获得纯培养物的关键是
(2)实验过程中,“选择培养”的目的是
(3)为确定该菌株是纤维素分解菌,还需要进行
(4)菌种保藏时,可将该菌株接种在斜面培养基上,进行
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【推荐3】生活垃圾分类管理条例要求单位及个人按可回收物、有害垃圾、厨余垃圾、其他垃圾四类进行定时定点投放。废纸作为可回收利用的废弃物资源之一,由于其纤维素含量高、价格低廉、来源广泛及生产量大等特点具有良好的开发应用潜力。
中科院近代物理研究所的研究人员利用经重离子束处理选育的长枝木霉突变菌株LC-M4进行废纸碳源发酵产酶的相关实验,结果发现选用的办公废纸、餐巾废纸、杂志纸和硬纸板纸中,硬纸板纸发酵产生的相关酶活性最高。
(1)纤维素酶是一类复合酶,至少包括__________________________________ 。
(2)通过研究废纸结构和组成,科研人员发现不同废纸中纤维素为主要成分,造纸过程中添加的碳酸钙等原料可以为菌株生长提供____________ 。接种LC-M4可以使用_______________________ 法。若想长期保存该突变菌种,可以采用_________________ 的方法。
(3)纤维素酶的发 酵方法有液体发酵和_________________ 两种。
(4)上述突变菌株LC-M4进行废纸碳源发酵产酶的相关实验中,除可直接测定酶活性外,还可以通过刚果红染色法来比较不同废纸碳源发酵产生纤维素酶活性的高低,请简要写出相关实验思路:___________ 。
中科院近代物理研究所的研究人员利用经重离子束处理选育的长枝木霉突变菌株LC-M4进行废纸碳源发酵产酶的相关实验,结果发现选用的办公废纸、餐巾废纸、杂志纸和硬纸板纸中,硬纸板纸发酵产生的相关酶活性最高。
(1)纤维素酶是一类复合酶,至少包括
(2)通过研究废纸结构和组成,科研人员发现不同废纸中纤维素为主要成分,造纸过程中添加的碳酸钙等原料可以为菌株生长提供
(3)纤维素酶的发 酵方法有液体发酵和
(4)上述突变菌株LC-M4进行废纸碳源发酵产酶的相关实验中,除可直接测定酶活性外,还可以通过刚果红染色法来比较不同废纸碳源发酵产生纤维素酶活性的高低,请简要写出相关实验思路:
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【推荐1】将苏云金杆菌的Bt抗虫蛋白基因(简称Bt基因)利用农杆菌转化法导入棉花细胞中,可培育出转基因抗虫棉。
(1)经选择培养获得纯的苏云金杆菌,用酶解法裂解苏云金杆菌,使其释放出DNA。加入预冷的__________ (填试剂)静置2-3min,用玻璃棒沿一个方向搅拌。将其丝状物加入到2mol/L的__________ 溶液中备用。
(2)用限制酶XbaI(识别序列和切割位点为:T↓CTAGA)切割出的Bt基因可用PCR技术进行扩增。PCR每次循环可分为变性、__________ 和延伸三步,PCR反应缓冲液中一般要添加__________ (填离子)以激活DNA聚合酶。(3)限制酶SpeI和EcoRI的识别序列和切割位点分别是“A↓CTAGT”、“G↓AATTC”。为构建Bt基因表达运载体,需要用限制酶__________ (填“SpeI”或“EcoRI”)切割农杆菌Ti质粒。为了让Bt基因在棉花细胞中稳定存在并遗传给下一代,最好将重组后的T-DNA整合到棉花细胞的_________ 上。
(4)获得Bt基因的棉花细胞可用_________ 技术培育成植株,此过程中________ (填植物激素)是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素。
(1)经选择培养获得纯的苏云金杆菌,用酶解法裂解苏云金杆菌,使其释放出DNA。加入预冷的
(2)用限制酶XbaI(识别序列和切割位点为:T↓CTAGA)切割出的Bt基因可用PCR技术进行扩增。PCR每次循环可分为变性、
(4)获得Bt基因的棉花细胞可用
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【推荐2】转运肽能够引导在细胞质中合成的蛋白质进入叶绿体,组装成叶绿体的完整结构,从而使植物能够顺利地进行光合作用。研究人员尝试将抗除草剂基因(抗草丁膦基因)和转运肽基因同时导入大豆细胞并获得高产量的抗除草剂转基因大豆作物。已知T-DNA上的基因在农杆菌中不能表达,而在植物细胞中能表达。回答下列问题:
(1)从抗除草剂大豆叶片中提取抗草丁膦基因的DNA过程中,加入预冷的酒精(体积分数为______ )的目的是______ 。
(2)根据图1,应选用______ 和______ 酶对转运肽基因进行酶切,酶切后插入Ti质粒的T-DNA区,T-DNA的作用是____________ 。用两种限制酶切割转运肽基因的目的是____________ 。
(3)据图2分析,将重组后的Ti质粒导入农杆菌中,成功转化的农杆菌能在含有______ 的培养基中生长增殖。欲从个体水平上检测转基因大豆是否获得抗除草剂抗性,可采取的措施是____________ 。
(1)从抗除草剂大豆叶片中提取抗草丁膦基因的DNA过程中,加入预冷的酒精(体积分数为
(2)根据图1,应选用
(3)据图2分析,将重组后的Ti质粒导入农杆菌中,成功转化的农杆菌能在含有
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【推荐3】叶绿体DNA(cpDNA)大多为环状双链,其基因组序列高度保守,目前已在分子标记、核质互作、叶绿体基因工程等方面开展了广泛研究。下列为提取cpDNA的相关步骤,其中SDS能瓦解生物膜,苯酚使蛋白质变性析出,氯仿与苯酚互溶,易于除去苯酚。
(1)叶绿体的分离
①匀浆使细胞破碎;将叶片于4℃冰箱黑暗饥饿处理12~24h后,剪成1 cm长度,放入匀浆机,倒入缓冲液,先低速匀浆2次,再高速匀浆3次,每次5~10s。匀浆前黑暗饥饿处理的目的是____ ,有利于cpDNA的提取。
②离心得到叶绿体粗提物:将匀浆液过滤后离心,弃沉淀以去除细胞残骸;将得到的上清液再次离心,弃上清,即得叶绿体粗提物,第二次离心的速度比第一次____ 。整个过程中线粒体分布在____ 中,从而避免了线粒体DNA对cpDNA的污染。
(2)去除核DNA:向叶绿体粗提物中加入____ 、缓冲液,37℃静置15min后,离心取____ 从而去除吸附在叶绿体外膜上的核DNA.
(3)叶绿体的裂解和cpDNA的粗提:将纯化的叶绿体加入缓冲液、SDS、蛋白酶K,55℃水浴3h,使叶绿体裂解,释放出cpDNA,离心取上清液。在上清液中加入苯酚和氯仿,离心后的液体包括上层水相、中层变性蛋白和下层有机溶剂,cpDNA分布于___ 中,小心用____ 吸取该层液体。
(4)沉淀cpDNA:向粗提溶液中加入3mol/L醋酸钠及预冷的_____ ,离心取沉淀物。
(5)电泳检测cpDNA:如图1、2是某品种茶树用上述方法提取到的cpDNA凝胶电泳结果,其中M是已知大小的不同DNA的混合物。2组无条带,表明提取不成功,其可能的原因之一是操作过程中叶绿体裂解时间过长,导致________ ,
(6)叶绿体基因的遗传方式_______ (填"遵循”或“不遵循”)孟德尔遗传定律,不会随_______ 传给后代。且将外源基因转入叶绿体基因时,在转基因生物安全方面带来的优点为_______ 。
(1)叶绿体的分离
①匀浆使细胞破碎;将叶片于4℃冰箱黑暗饥饿处理12~24h后,剪成1 cm长度,放入匀浆机,倒入缓冲液,先低速匀浆2次,再高速匀浆3次,每次5~10s。匀浆前黑暗饥饿处理的目的是
②离心得到叶绿体粗提物:将匀浆液过滤后离心,弃沉淀以去除细胞残骸;将得到的上清液再次离心,弃上清,即得叶绿体粗提物,第二次离心的速度比第一次
(2)去除核DNA:向叶绿体粗提物中加入
(3)叶绿体的裂解和cpDNA的粗提:将纯化的叶绿体加入缓冲液、SDS、蛋白酶K,55℃水浴3h,使叶绿体裂解,释放出cpDNA,离心取上清液。在上清液中加入苯酚和氯仿,离心后的液体包括上层水相、中层变性蛋白和下层有机溶剂,cpDNA分布于
(4)沉淀cpDNA:向粗提溶液中加入3mol/L醋酸钠及预冷的
(5)电泳检测cpDNA:如图1、2是某品种茶树用上述方法提取到的cpDNA凝胶电泳结果,其中M是已知大小的不同DNA的混合物。2组无条带,表明提取不成功,其可能的原因之一是操作过程中叶绿体裂解时间过长,导致
(6)叶绿体基因的遗传方式
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