盐芥是十字花科盐芥属植物，因生长于农田区的盐渍化土壤而得名。为研究盐芥iTS基因在植物逆境胁迫应答中的重要作用，科研人员做了一系列研究。
(1)取待测盐芥组织裂解破碎，进行DNA提取和纯化，得到待测盐芥基因组DNA。该过程常用的试剂有EDTA、SDS、NaCl、酒精等。在研磨液中加入NaCl的目的是_____________ ；纯化DNA时可使用酒精，是因为_____________________________ 。
(2)为了特异性扩增iTS基因序列，需根据_____________ 设计特异性引物。在反应体系中加入相应物质和原料后，将PCR仪的温度设定为：变性94℃（30s）、复性58℃（30s）、延伸72℃（40s）。“延伸”的温度设定为72℃，是因为该温度下_____________ 。若iTS基因的数量为a个，上游引物数∶下游引物数=1∶50，该体系扩增进行5轮循环后，上游引物刚好耗尽，则上游引物的数量等于_____________ 条。
(3)用限制酶M切割某DNA分子，过程如图1所示，其中虚线部分为盐芥iTS基因。
图1中的DNA分子上限制酶M的切割位点有_____________ 个，它能够特异性识别的序列是_____________ ，下图2中能与iTS基因进行重组的Ti质粒是_____________ 。（所示碱基序列为不同载体中方框内的序列）
(4)将获得的重组质粒通过____________ 法导入大豆愈伤组织中，最终获得转基因大豆植株，iTS基因能否在大豆植株体内维持和表达其遗传特性的关键是____________ 。
(5)为验证iTS基因能提高大豆的耐盐性，研究人员进行了以下实验，结果如下表所示。
综合上述研究，iTS基因能提高植物耐盐性的机理是_______________________________ 。
(1)取待测盐芥组织裂解破碎，进行DNA提取和纯化，得到待测盐芥基因组DNA。该过程常用的试剂有EDTA、SDS、NaCl、酒精等。在研磨液中加入NaCl的目的是
(2)为了特异性扩增iTS基因序列，需根据
(3)用限制酶M切割某DNA分子，过程如图1所示，其中虚线部分为盐芥iTS基因。
图1中的DNA分子上限制酶M的切割位点有
(4)将获得的重组质粒通过
(5)为验证iTS基因能提高大豆的耐盐性，研究人员进行了以下实验，结果如下表所示。
| 大豆类型 | 处理方式 | 叶片中叶绿素含量 | 根部细胞渗透压 |
| 野生型大豆 | 0.15mol/L的NaCl溶液处理 | 低 | 低 |
| 转iTS基因大豆 | 高 | 高 |
更新时间：2022-05-24 20:29:31
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(0.4)
【推荐1】新冠病毒是一种RNA复制型病毒（不属于逆转录病毒），能引发肺炎等症状。目前新冠肺炎主要通过核酸检测，采用实时荧光定量PCR（qPCR）法。PCR即聚合酶链式反应，与细胞内DNA复制类似，在试管中进行DNA的人工复制（如图所示），可以在短时间内将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍。请回答：
(1)新冠病毒的遗传信息蕴藏在RNA的4种碱基__________ 中，对其来说基因即为具有遗传效应的____________ 片段。患者样本中新冠病毒的遗传信息传递过程为：__________ （用文字和箭头表示）。人体细胞通过转录合成RNA与新冠病毒合成RNA过程相比，转录合成RNA出现特有的碱基对是___________ 。
(2)图中加热使DNA双链打开，这一步是使_____________ 键断裂，称为__________ ，这一过程在生物体细胞中是在____________ 酶的作用下完成的。降温时，引物与模板结合，在DNA聚合酶作用下，引物引导子链延伸，此过程中DNA聚合酶催化相邻两个核苷酸分子的__________ 与___________ 之间形成磷酸二酯键，该过程遵循___________ 原则。
(3)若一个DNA分子有800个碱基对，其中腺嘌呤600个，通过PCR技术共消耗环境中游离的胞嘧啶脱氧核苷酸6200个，则该DNA分子在PCR扩增仪中共复制了____________ 次。
(4)从“结构与功能相适应”的角度，写出DNA适合作为“遗传物质”的依据：__________ （任答1点即可）。
(1)新冠病毒的遗传信息蕴藏在RNA的4种碱基
(2)图中加热使DNA双链打开，这一步是使
(3)若一个DNA分子有800个碱基对，其中腺嘌呤600个，通过PCR技术共消耗环境中游离的胞嘧啶脱氧核苷酸6200个，则该DNA分子在PCR扩增仪中共复制了
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【推荐2】基础知识检测
（1）绘制单克隆抗体的制备流程，标明重要的步骤名称。( )
（2）补充绘制完整第一轮PCR过程：补充各步骤名称和温度、绘制第一轮的产物；绘制第二轮PCR结束后所有产物分子（标出引物A和引物B的位置和5＇、3＇方向）。( )
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(0.4)
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【推荐3】下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：
（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用___________________________ 两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过_____________ 酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于_____________ 态的大肠杆菌。
（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加_____________ ，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中_____________________________ 。
（3）若BamHI酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为___________________________ ，对于该部位，这两种酶_____________ （填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。
（4）若用Sau3AI切图1质粒最多可能获得_______________ 种大小不同的DNA片段。
（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用
（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加
（3）若BamHI酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为
（4）若用Sau3AI切图1质粒最多可能获得
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【推荐1】乙烯受体是乙烯感受和转导信号的初始元件，广泛存在于各种植物中，并决定植物各种组织对乙烯反应的敏感性。通过对多种植物研究表明，钝化植物对外源乙烯的敏感性比抑制内源乙烯的生物合成更为有效地延长植物的采后寿命。科学家从草莓中提取乙烯受体Ers1基因，通过基因工程将Ers1基因反向连接在启动子后，筛选转入反义Ersl基因的草莓，达到延长储藏期的效果。回答下列问题：
(1)草莓DNA的提取：取草莓植株叶片，置于预冷的研钵中，加入液氮研磨至粉碎后，加入400uLSDSDNA提取液继续研磨，提取液中含有________ 可防止DNA被水解。待充分研磨后收集至离心管中，离心后取①于另一干净离心管中，加入200uL异丙醇，离心10min之后弃去管中的②，加入80uL体积分数为70%的乙醇，离心5min之后取③保存。过程中的①、②、③分别是_________ 。（从“上清液”和“沉淀”中选取相应词语填写）
(2)通过上述方法获得DNA后，需要通过PCR技术进行扩增Ersl基因（如下图）。为使目的基因与质粒连接，在设计PCR引物扩增Ersl基因时需添加限制酶XhoI（识别序列为5'－CTCGAG－3'）的识别序列。已知Ersl基因左端①处的碱基序列为－TTCCAATTTTAA－，则其中一种引物设计的序列是5'_________ 3'。在PCR体系中，加入的dNTP可提供________ 。PCR产物通过电泳进行分离后，可割下_________ 回收扩增的Ersl基因。
(3)经XhoI酶切后的载体和Ers1基因进行连接（如图），连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、Ers1基因与载体正向连接、Ers1基因与载体反向连接。为鉴定这3种连接方式，选择HpaⅠ酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，请在下图中画出电泳结果，需标明电泳片段DNA大致长度__________ 。
(4)用________ 处理农杆菌使其变为感受态细胞，将筛选得到的反向连接质粒与感受态农杆菌混合，使重组质粒进入农杆菌，完成________ 实验。将农杆菌涂布接种于添加有卡那霉素的LB固体培养基上，目的是________ 。
(5)用阳性农杆菌感染植物细胞，目的基因就会随________ 整合到植物染色体DNA中，最后通过________ 技术培育出完整的转基因植株。为获得转基因植株，农杆菌侵染的宿主一般要选用具有优良性状、较高的遗传稳定性、________ 及易被农杆菌侵染等特点的植物材料。得到的转基因植株乙烯受体的合成受阻，其原因是________ 。
(1)草莓DNA的提取：取草莓植株叶片，置于预冷的研钵中，加入液氮研磨至粉碎后，加入400uLSDSDNA提取液继续研磨，提取液中含有
(2)通过上述方法获得DNA后，需要通过PCR技术进行扩增Ersl基因（如下图）。为使目的基因与质粒连接，在设计PCR引物扩增Ersl基因时需添加限制酶XhoI（识别序列为5'－CTCGAG－3'）的识别序列。已知Ersl基因左端①处的碱基序列为－TTCCAATTTTAA－，则其中一种引物设计的序列是5'
(3)经XhoI酶切后的载体和Ers1基因进行连接（如图），连接产物经筛选得到的载体主要有三种：单个载体自连、Ers1基因与载体正向连接、Ers1基因与载体反向连接。为鉴定这3种连接方式，选择HpaⅠ酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，请在下图中画出电泳结果，需标明电泳片段DNA大致长度
(4)用
(5)用阳性农杆菌感染植物细胞，目的基因就会随
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(0.4)
【推荐2】科研人员运用两种方法分离杜氏盐藻、球等鞭金藻细胞的叶绿体，并提取叶绿体DNA，主要实验步骤和结果如下，其中SDS能瓦解生物膜，氯仿异戊醇不溶于水且密度均大于水，DNA不溶于氯仿异戊醇。请回答：
步骤①收集藻细胞：将两种藻细胞培养液进行预处理后，离心取沉淀物。
步骤②获取叶绿体粗：提物4℃下分别破碎两种藻细胞后，再分别用差速离心法和密度梯度离心法分离获取叶绿体粗提物(原理示意图如下)。
步骤③去除杂质DNA：向步骤②的叶绿体粗提物中加入DNA酶、缓冲液，37℃静置15min后，离心取沉淀物。
步骤④粗提叶绿体DNA：向步骤③获得的叶绿体中加入缓冲液、SDS、蛋白酶K，60℃水浴2h，离心取上清液。再向上清液中加入氯仿异戊醇，在4℃下离心取 ？ 。
步骤⑤纯化叶绿体DNA：向粗提溶液中加入3mol·L－1醋酸钠及预冷的95%酒精，低温静置1h后，离心弃上清液。加预冷的95%酒精、离心洗涤1～2次，取沉淀物用超纯水溶解。
步骤⑥DNA纯度和浓度：测定利用分光光度法测量并计算叶绿体DNA的纯度及浓度，结果如上右表(表中OD260/OD280值越接近1.8说明DNA越纯)。
(1)步骤①中预处理时应将藻液置于____ 处24h，以降低叶绿体中淀粉粒的含量，有利于分离得到完整叶绿体。步骤②在利用差速离心法分离获得叶绿体前，需要先在____ (填“低于”“等于”或“高于”)4 000r·min－1下离心去除细胞壁、核物质等。
(2)步骤③依据的主要原理是____ ，去除的“杂质DNA”来源于____ 。
(3)步骤④中离心后应取____ 。步骤⑤中用95%的冷酒精离心洗涤过程要注意动作轻缓，其目的是____________________________________________________________ 。
(4)根据实验结果分析，____ 法较适于分离提取叶绿体DNA，原因是_________________________________________ 。
步骤①收集藻细胞：将两种藻细胞培养液进行预处理后，离心取沉淀物。
步骤②获取叶绿体粗：提物4℃下分别破碎两种藻细胞后，再分别用差速离心法和密度梯度离心法分离获取叶绿体粗提物(原理示意图如下)。
步骤③去除杂质DNA：向步骤②的叶绿体粗提物中加入DNA酶、缓冲液，37℃静置15min后，离心取沉淀物。
步骤④粗提叶绿体DNA：向步骤③获得的叶绿体中加入缓冲液、SDS、蛋白酶K，60℃水浴2h，离心取上清液。再向上清液中加入氯仿异戊醇，在4℃下离心取 ？ 。
步骤⑤纯化叶绿体DNA：向粗提溶液中加入3mol·L－1醋酸钠及预冷的95%酒精，低温静置1h后，离心弃上清液。加预冷的95%酒精、离心洗涤1～2次，取沉淀物用超纯水溶解。
步骤⑥DNA纯度和浓度：测定利用分光光度法测量并计算叶绿体DNA的纯度及浓度，结果如上右表(表中OD260/OD280值越接近1.8说明DNA越纯)。
(1)步骤①中预处理时应将藻液置于
(2)步骤③依据的主要原理是
(3)步骤④中离心后应取
(4)根据实验结果分析，
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(0.4)
【推荐3】随着全球转基因作物大规模种植和全球一体化下频繁的贸易流通，转基因监管的任务将越来越重。为了还给消费者知情权和选择权，多个国家和地区对转基因产品实行标识管理制度，这些法规实施的前提就是要建立稳定、准确的转基因检测技术。PCR转基因检测技术被多国检测工作者使用，该技术通常包括核酸提取、核酸扩增、扩增产物检测3个步骤。某研究小组设计并完成了“转基因抗草甘膦大豆定性PCR检测”实验，请参与实验设计并回答相关问题（草甘膦为常用除草剂；转基因抗草甘膦大豆的外源基因构建图如图1所示）：
图1抗草甘膦外源基因结构图（CaMV35S为外源启动子、NOS为外源终止子）
(1)提取DNA：取待测大豆组织裂解破碎，进行DNA提取和纯化，得到待测大豆基因组DNA。该过程的常用的试剂有EDTA、SDS、NaCl、酒精等。在研磨液中加入NaCl的目的是________________ ，提取到的DNA可以用______________ 试剂鉴定。
(2)DNA扩增：
①在确定扩增对象后，从___________________ 中获得待扩增基因序列，以此为依据可设计引物。该小组拟定的引物设计如表所示，其引物设计有一个是不科学的，请指出并说明原因____________ 。
注：内源基因指大豆基因组内基因，外源基因指大豆基因组外基因。
②PCR扩增：在4个反应体系中分别加入________________ （模板）、相应引物、________________ 酶、________________ 等，并将PCR仪的温度设定为：变性94℃ 30s、复性58℃ 30s、延伸72℃ 40s，循环30次。“延伸”的温度设定为72℃，是因为该温度下________________ 。在设定的PCR体系下可以特异性扩增目标DNA片段，主要是因为__________________________________ 具有特异性。
(3)扩增产物检测：可采用________________ 的方法检测。部分实验结果如图2、3所示。据图2初步判断，该大豆为________________ （填“转基因”或“非转基因”）大豆。据图2、图3分析，其实验结果是________________ （填“可信的”或“不可信的”）。
注:M:标准参照物，1：阳性对照（基因标准品），2：阴性对照（普通大豆），3：核酸提取空白对照，4：待鉴定样本
图1抗草甘膦外源基因结构图（CaMV35S为外源启动子、NOS为外源终止子）
(1)提取DNA：取待测大豆组织裂解破碎，进行DNA提取和纯化，得到待测大豆基因组DNA。该过程的常用的试剂有EDTA、SDS、NaCl、酒精等。在研磨液中加入NaCl的目的是
(2)DNA扩增：
①在确定扩增对象后，从
| 基因 | 引物序列 | 产物片段大小 | 基因来源 |
| Lectin | F－5' GCC CTC TAC TCC ACC CCC ATC C－3' R－5' GCC CAT CTG CAA GCC TTT TTG TG－3' | 118 | 内源基因 |
| CaMV35S | F－5' GGG ATT－3' R－5' AAT CCC－3' | 195 | 外源基因 |
| NOS | F－5' GAA TCC TGT TGC CGG TCT TG －3' R－5' TTA TCC TAG TTT GCG CGC TA －3' | 180 | 外源基因 |
| CP4－EPSPS | F－5' CTT CTG TGC TGT AGC CAC TGA TGC－3 R－5' CCA CTA TCC TTC GCA AGA CCC TTC－3 | 320 | 外源基因 |
注：内源基因指大豆基因组内基因，外源基因指大豆基因组外基因。
②PCR扩增：在4个反应体系中分别加入
(3)扩增产物检测：可采用
注:M:标准参照物，1：阳性对照（基因标准品），2：阴性对照（普通大豆），3：核酸提取空白对照，4：待鉴定样本
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(0.4)
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【推荐1】T4溶菌酶是一种重要的工业用酶，但是它在温度较高时容易失去活性。为了提高T4溶菌酶的耐热性，对T4溶菌酶基因进行改造，使T4溶菌酶的第3位异亮氨酸变为半胱氨酸。于是，在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，T4溶菌酶的耐热性得到了提高。下图是通过两次PCR操作，运用大引物进行定点突变获取T4溶菌酶改良基因和利用质粒pCLY11构建含T4溶菌酶基因的重组质粒示意图。（注：一次PCR操作可进行多次循环）____________ （答出两点即可）。
(2)已知图中T4溶菌酶基因下链为模板链，异亮氨酸密码子为AUC，半胱氨酸密码子为UGC，则设计突变上游引物时，突变位点的碱基是____________ ，第一次PCR过程中至少需要____________ 次循环才能获得双链等长DNA片段。
(3)第二次PCR操作中使用的引物有____________ ，第二次PCR经过5次循环需要的引物数量为____________ 。
(4)若获得改良基因如图所示，使该基因与质粒pCLY11高效连接，需要使用的限制酶是____________ 。
(2)已知图中T4溶菌酶基因下链为模板链，异亮氨酸密码子为AUC，半胱氨酸密码子为UGC，则设计突变上游引物时，突变位点的碱基是
(3)第二次PCR操作中使用的引物有
(4)若获得改良基因如图所示，使该基因与质粒pCLY11高效连接，需要使用的限制酶是
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(0.4)
真题
【推荐2】2007年我国科学家率先完成了家蚕基因组精细图谱的绘制，将13000多个基因定位于家蚕染色体DNA上．请回答以下有关家蚕遗传变异的问题：
（l）在家蚕的基因工程实验中，分离基因的做法包括用_________ 对DNA进行切割然后将DNA片段与________ 结合成重组DNA，再将重组DNA转入大肠杆菌进行扩增等．
(2）家蚕的体细胞共有56条染色体，对家蚕基因组进行分析（参照人类基因组计划要求），应测定家蚕_________ 条双链DNA分子的核苷酸序列．
(3）决定家蚕丝心蛋白H链的基因编码区有16000个碱基对，其中有1000个碱基对的序列不编码蛋白质，该序列叫_________ ；剩下的序列最多能编码_______ 个氨基酸（不考虑终止密码子），该序列叫________ ．
(4）为了提高蚕丝的产量和品质，可以通过家蚕遗传物质改变引起变异和进一步的选育来完成．这些变异的来源有___________ ．
（5）在家蚕遗传中，黑色（B)与淡赤色（b）是有关蚁蚕（刚孵化的蚕）体色的相对性状，黄茧(D）与白茧（d）是有关茧色的相对性状，假设这两对性状自由组合，杂交后得到的子代数量比如下表：
①请写出各组合中亲本可能的基因型
组合一_________ ；
组合二__________ ；
组合三___________ ；
②让组合一杂交子代中的黑蚁白茧类型自由交配，其后代中黑蚁白茧的概率是________ 。
（l）在家蚕的基因工程实验中，分离基因的做法包括用
(2）家蚕的体细胞共有56条染色体，对家蚕基因组进行分析（参照人类基因组计划要求），应测定家蚕
(3）决定家蚕丝心蛋白H链的基因编码区有16000个碱基对，其中有1000个碱基对的序列不编码蛋白质，该序列叫
(4）为了提高蚕丝的产量和品质，可以通过家蚕遗传物质改变引起变异和进一步的选育来完成．这些变异的来源有
（5）在家蚕遗传中，黑色（B)与淡赤色（b）是有关蚁蚕（刚孵化的蚕）体色的相对性状，黄茧(D）与白茧（d）是有关茧色的相对性状，假设这两对性状自由组合，杂交后得到的子代数量比如下表：
| 亲本子代 | 黑蚁黄茧 | 黑蚁白茧 | 淡赤蚁黄茧 | 淡赤蚁白茧 |
| 组合一 | 9 | 3 | 3 | 1 |
| 组合二 | 0 | 1 | 0 | 1 |
| 组合三 | 3 | 0 | 1 | 0 |
组合一
组合二
组合三
②让组合一杂交子代中的黑蚁白茧类型自由交配，其后代中黑蚁白茧的概率是
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(0.4)
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【推荐3】产脂肪酶酵母可用于处理含油废水，同时可获得蛋白质。有研究人员尝试从餐馆厨房污水排放沟取样，筛选产脂肪酶酵母菌株，初步流程如下图所示。据图回答下列问题：
(1)Ⅰ号培养基中应选择______ 作为唯一的碳源。
(2)过程③的接种方式为______ 。要判断所制备的培养基是否具有筛选作用，同时还需将样本接种到牛肉膏和蛋白陈的完全培养基上，若______ ，说明具有筛选作用。
(3)酵母菌絮凝是指菌体细胞间通过细胞壁相互粘附、聚集成团的现象。适当提高酵母菌的絮凝能力，有助于发酵结束时细胞和产物的分离，可大幅节约生产成本。科研人员发现酵母菌的R基因对絮凝能力有一定的抑制作用，下图表示科研人员利用同源重组（在两个DNA分子的同源序列之间直接交换的一种重组）基因敲除技术敲除R基因的过程。
①研究人员将整合了lox序列的庆大霉素抗性基因导入酵母菌，lox-庆大霉素抗性基因通过同源重组的方式整合到酵母菌基因组中，重组片段上庆大霉素抗性基因的作用是______ 。利用PCR技术检测1ox-庆大霉素抗性基因是否替换R基因，扩增时引物应选择下图中的______ 。在PCR延伸阶段中______ 催化脱氧核苷酸连接到引物上。
②将导入PC质粒的酵母菌，接种于添加______ 的马铃薯琼脂培养基中，获得敲除R基因且无庆大霉素抗性基因标记的酵母菌。Cre酶与基因工程中______ （工具酶）作用类似，上述过程中其发挥作用时需断裂______ 个磷酸二酯键。
(1)Ⅰ号培养基中应选择
(2)过程③的接种方式为
(3)酵母菌絮凝是指菌体细胞间通过细胞壁相互粘附、聚集成团的现象。适当提高酵母菌的絮凝能力，有助于发酵结束时细胞和产物的分离，可大幅节约生产成本。科研人员发现酵母菌的R基因对絮凝能力有一定的抑制作用，下图表示科研人员利用同源重组（在两个DNA分子的同源序列之间直接交换的一种重组）基因敲除技术敲除R基因的过程。
①研究人员将整合了lox序列的庆大霉素抗性基因导入酵母菌，lox-庆大霉素抗性基因通过同源重组的方式整合到酵母菌基因组中，重组片段上庆大霉素抗性基因的作用是
②将导入PC质粒的酵母菌，接种于添加
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(0.4)
【推荐1】回答下列（一）、（二）小题：
（一）猕猴桃营养丰富，富含多种维生素和微量元素，被称为“维生素C之王”。
(1)将猕猴桃清洗、去梗、破碎、压榨后直接制成的猕猴桃果汁通常含有较多的_____ ，因而比较浑浊。
(2)为获得无色澄清的果汁，首先需要进行_______ 处理，然后用________ 的果胶酶处理，以实现酶和底物的分离及酶的重复利用。
(3)猕猴桃果汁中加入活化的酵母菌悬液可用于猕猴桃酒的发酵。发酵开始后，在发酵容器中加入一定量的蔗糖，可提高果酒中________ 的含量。由于维生素C与2，4-二硝基苯肼作用形成红色产物，若要用光电比色法测定猕猴桃酒中维生素C的含量，需要绘制以维生素C质量为横坐标，以_______ 为纵坐标的标准曲线。
(4)将猕猴桃酒稀释后加入醋杆菌可进行醋酸发酵。醋酸发酵过程中需要对原料进行不断的搅拌，目的是为了________ （答出2点）。在果酒和果醋制作的过程中，培养液pH的变化趋势分别为。___________
（二）回答与植物克隆和基因工程有关的问题：
(5)MS培养基是常用的基础培养基，其成分包括水分、无机盐、糖类、维生素和_____ 。生根培养基与发芽培养基相比，除了激素的配比不同，还需要___________ （填“升高”或“降低”）营养物质的浓度，两种培养基的灭菌方法都是__________ 。
(6)进行愈伤组织的诱导和培养时，最好取刚长出的茎或叶，经消毒处理后切取小组织块接种到固体培养基中，通过适当配比的营养物质和______ 诱导形成愈伤组织。
(7)将目的基因导入愈伤组织细胞进行遗传改造，主要途径有：将含有目的基因的重组Ti质粒导入到经_______ 处理的农杆菌中，通过农杆菌感染植物细胞将目的基因导入；也可将目的基因包裹在脂质体（具膜小泡）中，通过与_________ 融合，再分离纯化受体细胞，以便后续的筛选操作；还可以通过____________ 法将目的基因直接导入。
(8)将改造后的愈伤组织诱导培养成再生植株，经筛选后可获得高表达的植株。该过程中影响细胞的生长速度和目的基因表达的因素包括温度、pH、光照、培养基中的营养物质以及__________ （答出2点）等影响。
（一）猕猴桃营养丰富，富含多种维生素和微量元素，被称为“维生素C之王”。
(1)将猕猴桃清洗、去梗、破碎、压榨后直接制成的猕猴桃果汁通常含有较多的
(2)为获得无色澄清的果汁，首先需要进行
(3)猕猴桃果汁中加入活化的酵母菌悬液可用于猕猴桃酒的发酵。发酵开始后，在发酵容器中加入一定量的蔗糖，可提高果酒中
(4)将猕猴桃酒稀释后加入醋杆菌可进行醋酸发酵。醋酸发酵过程中需要对原料进行不断的搅拌，目的是为了
（二）回答与植物克隆和基因工程有关的问题：
(5)MS培养基是常用的基础培养基，其成分包括水分、无机盐、糖类、维生素和
(6)进行愈伤组织的诱导和培养时，最好取刚长出的茎或叶，经消毒处理后切取小组织块接种到固体培养基中，通过适当配比的营养物质和
(7)将目的基因导入愈伤组织细胞进行遗传改造，主要途径有：将含有目的基因的重组Ti质粒导入到经
(8)将改造后的愈伤组织诱导培养成再生植株，经筛选后可获得高表达的植株。该过程中影响细胞的生长速度和目的基因表达的因素包括温度、pH、光照、培养基中的营养物质以及
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(0.4)
【推荐2】Hedgehog基因（H）广泛存在于无脊椎动物和脊椎动物中，在胚胎发育中起重 要作用。我国科研工作者利用基因敲除和核酸分子杂交技术，研究了H基因在文昌鱼 胚胎发育中的作用。
（1）研究者使用了两种TALE蛋白对文昌鱼的H基因进行敲除。TALE蛋白的结构是人工 设计的，蛋白质的中央区能够结合H基因上特定的序列，F区则能在该序列处将DNA双链切开如图1所示。
①根据_______ 设计出其氨基酸序列，再根据氨基酸序列对应的密码子序列推测出编码 TALE蛋白的DNA序列，人工合成DNA序列之后，再以其为模板进行转录生成 mRNA。
②将两种mRNA用_______ 法导入文昌鱼的卵细胞中，然后滴加精液使卵受精，此受精 卵发育成的个体为F0代。
③F0代个体细胞内被两种TALE蛋白处理过的DNA，经________ 催化重新连接后，H 基因很可能因发生碱基对的_______ 而丧失功能，基因丧失功能则被称为“敲除”。
（2）提取F0代胚胎细胞DNA，通过________ 体外扩增H基因，用________ 进行切割，电 泳后用______ 为探针进行DNA分子杂交，实验结果如图2所示。图中样品________ 代表的F0个体中部分H基因已被敲除。研究者发现，在F0个体产生的所有配子中，通常只有部分配子的H基因被敲除，可能的原因是__________ 。
（1）研究者使用了两种TALE蛋白对文昌鱼的H基因进行敲除。TALE蛋白的结构是人工 设计的，蛋白质的中央区能够结合H基因上特定的序列，F区则能在该序列处将DNA双链切开如图1所示。
①根据
②将两种mRNA用
③F0代个体细胞内被两种TALE蛋白处理过的DNA，经
（2）提取F0代胚胎细胞DNA，通过
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【推荐3】基因疫苗是指编码外源性抗原的基因导入人和动物体内，让其在宿主细胞中表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。某科研所计划利用基因疫苗，通过基因工程和胚胎工程技术培育具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛。请回答下列问题：
(1)基因表达载体的构建是基因工程的核心，其目的是___________________________________ ，一个完整的基因表达载体至少包括目的基因、___________________ 、标记基因等。
(2)动物基因工程常用的受体细胞是___________ ，因为该细胞的全能性高，一般用______ 法将目的基因导入受体细胞。
(3)欲检测高产奶牛体内是否出现口蹄疫病毒的抗原蛋白，在分子水平上检的方法及结果是从转基因牛中提取________ ，用_________________ 杂交，如果出现杂交带，表明奶牛中出现了抗原蛋白，如果不出现杂交带，表明奶牛中未出现抗原蛋白。
(4)胚胎工程最后一道工序处是胚胎移植，其实质是____________________ 。
(5)为提高胚胎的利用率，可以采用胚胎分割技术，应该选用什么样的胚胎进行分割_________ ？
(6)现已经通过基因工程和胚胎工程技术培育出一头具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛，可以采用_______________________ 技术获得更多具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛。
(1)基因表达载体的构建是基因工程的核心，其目的是
(2)动物基因工程常用的受体细胞是
(3)欲检测高产奶牛体内是否出现口蹄疫病毒的抗原蛋白，在分子水平上检的方法及结果是从转基因牛中提取
(4)胚胎工程最后一道工序处是胚胎移植，其实质是
(5)为提高胚胎的利用率，可以采用胚胎分割技术，应该选用什么样的胚胎进行分割
(6)现已经通过基因工程和胚胎工程技术培育出一头具有口蹄疫免疫特性的高产奶牛，可以采用
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