【推荐1】基因工程
如图为三种质粒和一个含目的基因的DNA片段，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoRⅠ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8Kb）等为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离。已知1kb=1000个碱基对的长度。请回答下列问题：

（1）基因工程中，为什么通常要选用质粒来运载目的基因？______。
（2）片段D为目的基因中的某一片段，则限制酶和DNA连接酶的作用部位依次是______、______（填图中数字标号）。
（3）图中能作为目的基因运载体最理想的质粒是______（填A/B/C），据图分析，其他两种质粒一般不能作为运载体的理由分别是______。
（4）如果将目的基因和质粒A构建重组质粒，然后再用 EcoR I酶切这个重组质粒，进行电泳观察，可出现长度分别为1.1kb和______kb的两个片段，或者长度分别为______kb、______kb的两个片段。
（5）动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞的根本原因是______。
A、受精卵尺寸较大，便于DNA导入操作
B、受精卵细胞能使目的基因高效表达
C、受精卵基因组更易接受DNA的插入
D、受精卵可发育成动物个体

【推荐2】基因治疗主要选择腺相关病毒（简称AAV）作为基因载体（见图1）．AAV是DNA小病毒，衣壳不能包装较大DNA分子．其基因组含有衣壳基因rep和复制相关蛋白基因cap等，但缺乏DNA复制激活基因E，感染细胞后不会复制增殖，对人体安全．当人体细胞同时感染含有基因E的DNA病毒如腺病毒（AD）后，AVV会复制增殖，形成具有侵染力的病毒粒子（含DNA和衣壳）．
血友病是由于基因TPO突变而不能合成凝血因子，导致机体出血．目前治疗的方法主要有两种（如图2），一是将基因工程菌生产的凝血因子注入患者体内，补充凝血因子；二是用含重组AVV的病毒粒子感染患者

（1）在质粒重组之前需要进行的操作是_____。
（2）重组AAV中去除了基因rep、cap，目的是_____；重组AAV转染细胞产生病毒粒子，需要人工重组辅助质粒，这是因为_____。
（3）比较两种治疗法，说出用重组AAV病毒粒子感染治疗的优点：_____
（4）实验发现，用昆虫细胞、酵母菌、人体细胞承担重组质粒与重组AAV的转染，都能收集到凝血因子，这一现象说明_____。
（5）病毒粒子可能含有重组AAV或人工重组辅助质粒，就需要检验、提纯，检验可以用酶切结合电泳法．已知腺相关病毒（AAV）与人体DNA片段的EcoRI与BamHI的酶切位点如图2所示，两种酶分开切的电泳图如图3所示．则用这两种酶作用于重组AAV，电泳图正确的是_____.

【推荐3】如图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图，请据图作答。

(1)图中基因工程的基本过程可以概括为“四步曲”：________________________； ___________________；________________________；_________________________________________。
(2)能否利用人的皮肤细胞来完成①过程？________，为什么？       ___________________。
(3)过程②必需的酶是________酶，过程④所需的酶是________酶。
(4)若A中共有a个碱基对，其中鸟嘌呤有b个，则③④⑤过程连续进行4次，至少需提供胸腺嘧啶________个。
(5)在利用A、B获得C的过程中，常用______________切割A和B，使它们产生__________________，再加入________________才可形成C。

【推荐1】用DNA重组技术可以赋于生物以新的遗传特性，创造出更符合人类需要的生物产品。在此过程中需要使用多种工具酶，其中4种限制性核酸内切酶的切割位点如图所示。

回答下列问题：
(1)常用的DNA连接酶有E．coli DNA连接酶和T₄DNA连接酶。上图中______酶切割后的DNA片段可以用E．coli DNA连接酶连接。上图中______酶切割后的DNA片段可以用T₄DNA连接酶连接。
(2)DMA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是__________________。
(3)DNA重组技术中所用的质粒载体具有一些特征，如质粒DNA分子上有复制原点，可以保证质粒在受体细胞中能____________；质粒DNA分子上有____________，便于外源DNA插入；质粒DNA分子上有标记基因（如某种抗生素抗性基因），标记基因的作用是__________________。
(4)表达载体含有启动子，启动子的作用是________________________。
(5)将目的基因导入植物细胞最常用的方法是________________________。

【推荐2】人的血清白蛋白（HSA）在临床上需求量很大，通常从人血中提取。但由于艾滋病病毒（HIV）等人类感染性病原体造成的威胁与日俱增，使人们对血液制品顾虑重重，图一是以基因工程技术从植物中获取HSA的途径，其中报告基因表达的产物能催化无色物质K呈现蓝色。图二为HSA基因两侧的核苷酸序列（图示为编码链）。图三为相关限制酶的识别序列和切割位点。据图回答下列问题：

          

(1)获取与扩增目的基因：为实现图一过程，先要采用PCR技术扩增HSA基因，根据图二分析，需要选择的一对引物序列是___。

A．引物Ⅰ是5'-GAAGATATCATT-3，引物Ⅱ是5'-GTAAGTTAAAGAG-3'

B．引物I是5'-AATGATATCTTC-3'，引物Ⅱ是5'-CATTCAATTCTC-3'

C．引物I是5'-AATGATATCITC-3'，引物Ⅱ是5'-GAGAATTGAATG-3'

D．引物Ⅰ是5'-GAAGATATCATT-3'，引物Ⅱ是5'-GAGAATTGAATG-3'

(2)构建重组Ti质粒：依据图一、图二和图三分析，切割含HSA基因的DNA片段选用的限制酶是___；切割质粒应选用的限制酶是___。为将剪切后的Ti质粒与HAS基因连接，需要使用___酶。
(3)为了使目的基因能够表达，构建重组质粒时，目的基因的上游必须有___，其作用是___。
(4)图一过程①中先用___处理农杆菌，使其处于___，将重组Ti质粒导入农杆菌。
(5)导入植物细胞：①过程中将植物细胞与农杆菌混合后共同培养，旨在让___整合到植物细胞染色体DNA上，除尽农杆菌后，还须转接到含___的培养基上筛选出转化的植物细胞。
(6)获得转基因植物：转化的植物细胞经___可快速获得转基因植株，再通过___来检测植株是否能正常表达出HAS。

【推荐3】如图是研究人员培育能生产人血清白蛋白牛乳的转基因母牛的过程。回答下列问题：
   
(1)过程①中的质粒作为常用的载体，需要具备的条件是______。（答出2点）。血清白蛋白基因需在体外进行PCR扩增，扩增前应根据______设计引物，为方便构建基因表达载体，可在引物的______（填5'或3'）端添加限制酶识别序列。
(2)过程②利用的技术是_______，过程③一般采用______法将血清白蛋白基因导入受精卵。过程⑤的操作是______，其优势是______。在进行⑤之前需要对胚胎进行性别鉴定，应选择性染色体组成为______的胚胎进行操作。
(3)研究人员将早期胚胎进行分割后进行⑤操作，结果接受分割胚胎的其中一头健康母牛发生流产。从胚胎分割的角度分析，造成这种现象的原因可能是______。

【推荐1】紫杉醇是存在于红豆杉属植物体内的一种次生代谢物，具有高抗癌活性，现已被广泛用于乳腺癌等癌症的治疗。生产紫杉醇的传统方法是从红豆杉的树皮和树叶中提取，但野生红豆杉是濒危植物，这种方法不利于对它们的保护。下图为科研人员制备能合成紫杉醇的紫茎泽兰愈伤组织细胞的流程，EcoRⅠ、BamHⅠ为限制酶。回答下列问题：

   

(1)图中过程①依据的原理是________，复制开始时需要用到________种引物，引物的作用是________。
(2)图中过程②构建基因表达载体时，目的基因必须位于________之间，启动子的作用是________。
(3)某同学认为图中过程③中Ti质粒的T-DNA能携带目的基因整合到根瘤农杆菌的染色体DNA中，你认为该同学的说法是否合理，理由是________。
(4)过程④需要控制培养基中________，以防愈伤组织细胞发生分化，若要检测目的基因是否导入受体细胞以及成功表达，则可以分别使用________和________技术进行检测。

【推荐2】在培育转基因植物的研究中．卡那霉素抗性基因(kan)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为为获得抗虫棉的技术流程。

请据图回答：
（1）A过程需要的酶有____________________________。
（2）B过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件是_______________________
（3）C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入_____________。
（4）发现转基因植株的卡那霉素抗性基因的传递符合孟德尔遗传规律。
①将转基因植株与____________杂交，其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为l：l。
②若该转基因植株自交，则其后代中抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型豹数量比为________。
③若将该转基因植抹的花药在卡那霉素培养基上作离体培养，刚获得的再生植株群体中抗卡那霉素植株占___________％。

【推荐3】如图为转基因抗病香蕉的培育过程流程图，其中质粒上的Pst I、Sma I、EcoR I、Apa I等四种限制酶的识别序列及切割位点见下表。

（1）图中①②分别表示组织培养过程中香蕉组织细胞的_____________和_____________。利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成植株，证明了香蕉组织细胞具有________________。
（2）形成重组质粒A时，应选用限制酶______________，对_________________进行切割。
（3）一个质粒被限制酶EcoR I、Pst I、Sma I同时切割后可得到__________个DNA片段。如果质粒还可以被限制酶X切割，形成的黏性末端为，则限制酶X的识别序列为____________________（标明切割位点）。
（4）培养基中的氨苄青霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使重组质粒A中含有____________________基因。