【推荐2】α-淀粉酶催化淀粉生成麦芽糖直至葡萄糖的反应，一些具有独特性能（如低温催化）的α-淀粉酶在食品、日用品等多个工业领域中具有重要用途。
(1)为了找到性能优异的α-淀粉酶，科研人员从世界各地的微生物中鉴别出多种不同结构和性能的α-淀粉酶，其活性部位的氨基酸序列比较如表1所示。表中数据可作为生物进化的______证据。

微生物名称	α-淀粉酶活性部位氨基酸序列	性能
黑曲霉	…DVVANH…GEV…NHD…	来自温带土壤，常温催化
假交替单胞菌	…DVVINH…GEA…NHD…	来自北极海底，低温催化
酵母菌	…DGVFGH…GYG…NHD…	来自温带海洋，常温催化
解淀粉芽孢杆菌	…DVVLNH…GIW…HFN…	来自热带土壤，高温催化

(2)为了比较不同来源淀粉酶的活性，科研人员设计了如下所示的实验。试在表格2中的①②③处填写相应的数值。

试剂（mL）	管号	1	2	3	4
蒸馏水		0.4	0.4	0.4	①____
缓冲液		0.5	0.5	0.5	0.5
淀粉溶液		2.0	2.0	2.0	2.0
假交替单胞菌提取液		0.1
酵母菌提取液			0.1
解淀粉芽孢杆菌提取液				②____	③____
总体积		3.0	3.0	3.0	3.0

(3)科研人员挑选表1中假交替单胞菌的α-淀粉酶基因Amy3与质粒pET-22b连接，并转入大肠杆菌中表达。根据图1所示信息，质粒应用限制酶____________切开。

(4)已知大肠杆菌不能分泌表达出的重组α-淀粉酶，因此分离纯化重组α-淀粉酶的第一步操作应是____________。在很多情况下，获得的纯酶还需要固定化，其目的是____________。
(5)欲测定重组α-淀粉酶的活性，检测实验结果可选用的试剂是____________。
(6)科研人员在调查上述重组α-淀粉酶的最适pH时，使用了三种化学成分不同的pH缓冲液（因为每种缓冲液只能维持有限的pH范围），实验结果如图2所示。试解释在pH为7.5和9.0时实验数据不吻合的原因是____________。

【推荐1】回答下列（一）、（二）小题：
（一）《齐民要术》中记载，酿酒前先制曲，选用小麦或谷物，利用其中的蛋白质和淀粉制成培养基，在特定温度和湿度的密闭茅草屋中，利用屋内漂浮的曲霉孢子制作含有曲霉的菌丝体，晒干后作为长期保存的接种材料——酒曲；在酿酒过程，将酒曲磨碎后与粮食混合进行密封发酵。回答下列问题：
(1)酿酒中加曲霉的原因是____________。酿酒过程涉及的主要菌种是曲霉、酵母菌，两者在发酵过程中对温度和氧气的要求不同，主要区别是________________________。
(2)为了酵母细胞与酒精可以分离并重复利用，常利用海藻酸钠固定酵母细胞制备成凝胶珠，该固定方法称为____________；海藻酸钠的浓度会影响酒精产量的原因是____________。酒精与酸性重铬酸钾反应呈现灰绿色，颜色深浅与酒精的含量呈正相关，使用比色计测量其在____________的光密度值，与标准曲线进行比对确定酒精含量，从中选择出海藻酸钠包埋酵母细胞的最适浓度。
(3)若以酒为原料制醋，一般用____________（填“自来水”、“蒸馏水”或“无菌水”）对酒进行稀释，以免酒精浓度过高杀死菌种。该菌种在扩大培养时往往用____________（填仪器）进行搅拌。
（二）近些年研究发现，细胞自噬与肿瘤的形成与生长有很大关系。某科研小组以HeLa细胞（海拉细胞）为材料，对自噬基因Beclinl与肿瘤细胞生长之间的相关性做了研究。研究流程如下图，图中质粒是一种携带绿色荧光蛋白基因（GFP）的质粒。回答下列问题：

(4)①过程后需要筛选含有Beclinl基因的受体细胞的原因是____________。筛选方法有：一是利用绿色荧光蛋白基因（GFP）作为____________标记，根据是否发荧光予以选择：二是利用____________作为特异探针进行DNA分子杂交：三是利用设计Beclin基因特异的引物进行_____________。
(5)传代培养至今的海拉细胞具有____________核型，与原细胞已具有____________性。
(6)研究人员认为要得出“自噬基因Beclin对海拉细胞的增殖有显著的抑制作用的结论，仅定导入重组质粒的海拉细胞增殖的抑制率是不够的，还应该设置对照组，测定____________的抑制率。
(7)利用现代生物技术，设计抑制海拉细胞增殖的方法（写出技术及相应物质____________。）

【推荐2】践行“绿水青山就是金山银山”理念，大力发展绿色低碳经济已成为全社会的共识。为减少碳排放，研究人员以某些工业废气（含有大量的CO、CO₂等温室气体）为原料，利用乙醇梭菌厌氧发酵生产乙醇，其代谢过程如图所示。

回答下列问题：
(1)CO、CO₂等温室气体大量排放加剧了温室效应，从而引起的全球性生态环境问题主要是_______。
(2)除CO、CO₂等碳源外，还需为乙醇梭菌生长繁殖和厌氧发酵提供的主要营养物质有_____（答出3点）。通过上述发酵可获得大量乙醇和单细胞蛋白，在该发酵过程中单细胞蛋白是指______。
(3)研究发现，当CO和CO₂同时存在时，乙醇梭菌的T酶对CO的亲和力较低。研究人员将T酶中第108位的异亮氨酸（密码子：AUU、AUC、AUA）变成苏氨酸（密码子：ACU、ACC、ACA）后，大大提高了T酶对CO的亲和力，同时不影响T酶对CO₂的亲和力。对T酶的结构进行改造，必须通过改造T酶基因来完成，理由是______。改造前后，T酶基因转录所用模板链上的碱基具体变化情况是_______。
(4)乙醇梭菌细胞内，图中代谢过程产生的中间产物可在其他酶的作用下转化成为其他有机物。将1个启动子、改造后的T酶基因、C酶基因、A酶基因、1个终止子依次连接，并与质粒一同构建成多基因表达载体。在构建该多基因表达载体时，为保证上述DNA片段依次正确连接同时避免DNA片段自身环化，至少需要使用_______种限制酶进行切割以产生不同的黏性末端。将上述多基因表达载体导入乙醇梭菌中表达，可提高乙醇产量，其原理是_______。

【推荐1】桂圆也称龙眼，是一种药食两用的水果。科研团队比较了5种酵母菌（3种酿酒酵母，2种非酿酒酵母）对桂圆果浆的发酵效果，并从中选择适宜的菌种进行发酵，以期得到品质更好的桂圆果酒。生产桂圆果酒的工艺流程如图所示。回答下列问题：
新鲜桂圆去皮去核→桂圆果肉→打浆→调酸 →酶解→调糖→接种→发酵→过滤
(1)在发酵流程中没有对材料的清洗环节，清洗时正确的操作应该是____________，该操作的目的是____________。
(2)酶解的过程是在调酸物料中加入质量分数为0.2%的果胶酶，该酶是分解果胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶、果胶酯酶等，加入该酶的作用是____________。
(3)下表中表示5种酵母（Y₁-SY果酒活性干酵母；Y₂-RW果酒活性干酵母；Y₃-葡萄酒高活性干酵母；Y₄-耐高温高活性干酵母；Y₅-生香活性干酵母）发酵的桂圆果酒品质（总酯与果酒的香味有关），根据表可得出的结论是酿酒酵母主要完成____________，非酿酒酵母可将原料中的物质转化为____________从而提高了果酒的甜度。从中选择____________两种酵母菌作为桂圆果酒发酵优良菌种。

酵母	酒精度/%vol	总糖/（g/L）	总酸/（g/L）	总酯/（g/L）	感官评分/分
Y1	13.4	1.3	6.8	0.19	72
Y2	13.1	2.4	6.4	0.18	67
Y3	13.3	1.6	6.2	0.15	64
Y4	12.6	3.4	8.1	0.11	62
Y5	11.0	8.5	7.6	0.38	74

(4)酵母菌添加量过少时，发酵时间将会____________（“变长”或“变短”）；酵母菌添加量过多时，酒精度、总酯含量都较低的原因是___________（答两点）。