【推荐1】科学家利用逆转录病毒将Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4四个细胞中的转录因子基因转入小鼠成纤维细胞中，然后在培养ES细胞的培养基上培养这些细胞。2-3周后，这些细胞显示出ES细胞的形态，具有活跃的分裂、分化能力各方面都与ES细胞相似，它们就是iPS细胞。回答下列问题：
(1)Klf4的化学本质是_________。如要在体外对Klf4进行扩增需要使用PCR技术，在其体外扩增的过程中需要在扩增体系中加入的_________酶。若要鉴定PCR产物是否是Klf4，可以采取_________技术鉴定。
(2)将Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4转入小鼠成纤维细胞中时逆转录病毒起到_________的作用。与成体干细胞相比，iPS细胞不具有_________，具有分化成各种组织或细胞的潜能。
(3)若将胰岛损伤的糖尿病病人的皮肤成纤维细胞诱导成iPS细胞，再将它转化成胰岛B细胞，将这些胰岛B细胞移植到病人体内，_________（填“是”/“否”）会引起免疫排斥反应。分析原因_________。
(4)实验证明iPS细胞的产生不是由培养基的作用造成的，为验证该结论设计了对照实验，请写出该实验的实验思路_________。如果要了解Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4在诱导iPS细胞产生时，每个基因作用的相对大小，需要设计_________组实验。

【推荐2】CRISPR/Cas9是一种高效的基因编辑技术，Cas9基因表达的Cas9蛋白像一把“分子剪刀”，在单链向导RNA（SgRNA）引导下，切割DNA双链以敲除目标基因或插入新的基因。CRISPR/Cas9基因编辑技术的工作原理如图所示。回答相关问题：

(1)过程①中，为构建CRISPR/Cas9重组质粒，需用________对含有特定SgRNA编码序列的DNA以及质粒进行酶切处理，再用________催化进行连接。
(2)构建完成CRISPR/Cas9重组质粒后，需要采用_______技术对其进行扩增，其原理是_______。
(3)过程②中，若受体细胞是大肠杆菌细胞，则导入前需要用_______对其进行处理，使其处于一种_____生理状态。
(4)过程③~⑤中，SgRNA与Cas9蛋白形成复合体，该复合体中的SgRNA可识别并与目标DNA序列特异性结合，此过程发生了碱基互补配对，和SgRNA中A、G配对的碱基分别是_______。Cas9蛋白切割基因组DNA时，断开的是______键。

【推荐3】某作物的矮秆和高秆由一对等位基因A/a控制，感病和抗病由另一对等位基因B/b控制，两对等位基因独立遗传。将矮秆感病植株和高秆抗病植株杂交，F₁均为矮秆感病，F₁自交得F₂。为选育既抗倒伏又抗病的优良品种，科研人员利用分子标记辅助选择技术开展研究，对部分样本进行检测并得到如下电泳图。

回答下列问题。
(1)基因突变可产生等位基因，使用同种限制酶切割基因A和a（或B和b）后进行电泳鉴定，结果如图1，所得条带并不相同，其原因是____。
(2)提取F₂中样本1、2、3三个单株的DNA，同时扩增A/a和B/b两对等位基因的DNA片段，用限制酶酶切后进行电泳鉴定，结果如图2。F₂中样本1、2、3的基因型分别是____、____和____。其中样本____最符合科研人员的育种要求。
(3)样本1单株自交的后代中，具有优良性状的植株占比为____。
(4)与传统育种相比，上述分子标记辅助选择技术能节省育种时间的原因是____。

【推荐1】塑料制品方便人们生活的同时，也造成了短时期难以降解的“白色污染”。研究人员欲比较肠杆菌 YT1 和芽孢杆菌 YP1 两类细菌降解塑料的能力，这种塑料的主要成分为聚氯乙烯（PVC）、聚乙烯（PE）和聚丙烯（PP）等，两类细菌主要降解 PE。他们并通过基因工程拼接黄粉虫肠道内菌株 WZ 的降解 PVC 的胞外酶基因 A，培育降解塑料的“超级菌”。
(1)菌株的筛选。配制固体培养基，接种菌株后表层覆盖 0.1mm 厚度的 PE 塑料。分组实验结果如下表所示：

培养基及接种菌株	培养基1	培养基2	培养基3
	单独培养并接种YT1	单独培养并接种YP1	混合培养YT1和YP1后， 选取YP1接种
降解圈（直径D/mm）	3.5	1.8	4.2

①在筛选分解 PE 塑料能力大小的菌株时，应将两类菌株接种到以________为唯一碳源的培养基，从功能上讲，该培养基属于_______培养基。
②筛选分解 PE 塑料能力强的菌株________（能/不能）直接以降解圈的大小为指标，其原因是______。培养基 3 中接种混合培养后的 YP1，其降解圈直径明显加大，其原因可能是_______。
(2)培育“超级菌”。对菌株 WZ 的 A 基因测序可知，如果在其调节功能区增加一个碱基对A/T，则可以大大增强其基因表达能力。通过经典的大引物 PCR 定点诱变技术在体外改造 A 基因，操作过程如图 1，然后与图 2 所示的质粒构建表达载体，培育“超级菌”。

①利用大引物 PCR 进行定点诱变需要进行两轮 PCR（PCR1 和 PCR2），在 PCR1 中获得的大引物是指以_______（选填图中引物）延伸得到的 DNA 链为模板，______（选填图中引物）与之结合延伸得到的 DNA 子链。要获得完整的改良 A 基因至少需要____个 PCR 循环。
②构建改良基因表达载体时，为实现质粒和改良基因的准确连接，应选用的限制酶是_______。表达载体导入受体菌株时，有的质粒含有改良的 A 基因，有的质粒为空白质粒。在含________的平板上培养一段时间后，其中白色菌落含有重组质粒，判断的依据是_______。

【推荐2】基因工程能够赋予生物新的遗传特性，创造出符合人们需要的生物类型和生物产品。回答下列问题：
（1）从基因文库中提取的目的基因通过PCR进行扩增时，需使用一种特殊的酶是______。利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有______，以便据此合成引物，扩增的过程是：______。
（2）构建基因表达载体的目的是使目的基因______，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。若将目的基因转入大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是______。
（3）在抗虫作物的培育过程中，将Bt毒蛋白基因导入作物受体细胞时，常用的方法是______。检测细菌的目的基因是否转录出mRNA时，需要用______做探针，再与mRNA杂交。

【推荐3】香蕉原产热带地区，是我国南方重要的经济作物之一。广东省冬季常受强寒潮和霜冻影响，对香蕉生长发育影响很大。由香蕉束顶病毒（BBTV，单链环状DNA病毒）引起的香蕉束顶病，对香蕉生产的危害十分严重。当前香蕉栽培品种多为三倍体，由于无性繁殖是香蕉繁育的主要方式，缺少遗传变异性，因此利用基因工程等现代科技手段提高其种质水平，具有重要意义。
请根据上述材料，回答下列问题：
（1）简述香蕉大规模快速繁殖技术的过程。___________________________
（2）脱毒香蕉苗的获得，可采用_________的方法，此方法的依据是_________和_______。
（3）建立可靠的BBTV检测方法可以监控脱毒香蕉苗的质量，请问可用哪些方法检测病毒的存在？（列举两种方法）_______________________________
（4）在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因afp对提高农作物的抗寒能力有较好的应用价值，该基因可以从这些鱼的DNA中扩增得到。试述在提取和纯化DNA时影响提纯效果的因素及其依据。（列举两点）__________________________
（5）如何利用afp基因，通过转基因技术获得抗寒能力提高的香蕉植株？在运用转基因香蕉的过程中，在生态安全方面可能会出现什么问题？（列举两点）_____________________
（6）从细胞工程的角度出发，简述一种培育抗寒香蕉品种的方法及其依据。另外，抑制果胶裂解酶的活性可以延长香蕉果实储藏期，请描述采用蛋白质工程技术降低该酶活性的一般过程。____________________________

【推荐1】如图所示，利用细胞工程和胚胎工程技术培育哺乳动物的方式有三种，其中a为精子，b为卵细胞，c和d均为体细胞。请回答下列问题：

(1)方法一为试管动物的培育过程，其中精子a在受精前要进行______处理，在体内，该过程是在雌性动物的_______中完成的。
(2)方法二的理论基础是_____。
(3)方法三获得杂种细胞，该技术的突出优点是________。

【推荐2】随着生物科学技术的发展，动物的生殖方式变得越来越多样化。下图是胚胎工程技术研究及应用的相关情况，供体1是良种荷斯坦高产奶牛，供体2是健康的黄牛，请据图回答下列问题：

（1）应用1中获得的良种小牛，遗传物质来源于___________个体，性别为_______。
（2）在应用2、3、4中，若要使精子和卵母细胞在体外成功结合，需要对精子进行处理，使其___________。得到的卵母细胞需要发育至_________（时期）才能受精。
（3）应用3可解决良种动物快速大量繁殖的问题：胚胎分割移植属于_________繁殖。对囊胚进行分割时，要注意将 _________均等分割，否则将影响分割后 ____________，如需做性别鉴定，还需从 ____________细胞取样做DNA分析。
（4）应用4中细胞进行定向诱导，可分化形成各种组织和器官。在胚胎干细胞培养过程中除需要适宜的温度、无菌、无毒等环境条件以外，营养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、核苷酸，还要加入_________ ； 向培养液中通入95%的空气和5%： 氧化碳，空气中的氧气参与细胞的代谢，二氧化碳可以维持培养基的_____________。

【推荐3】2019年1月24日，《国家科学评论》发表了上海科学家团队的一项重要成果，即先通过基因编辑技术切除猕猴受精卵中的生物节律核心基因BMAL1，再利用体细胞克隆技术，获得了五只BMAL1基因敲除的克隆猴，这是国际上首次成功构建出了一批遗传背景一致的生物节律紊乱的猕猴模型，同时也是世界上首个体细胞克隆猴“中中”“华华”诞生后，体细胞克隆猴技术的首次应用。基因编辑技术是上述研究中的核心技术，该技术中的基因编辑工具是经改造的CRISPR/Cas9系统。该系统由向导RNA和Cas9蛋白组成，由向导RNA引导Cas9蛋白在特定的基因位点进行切割来完成基因的编辑过程，其工作原理如下图所示。

（1）CRISPR/Cas9系统广泛存在于细菌体内，推测该系统在细菌体内的作用是___________。
（2）由于Cas9蛋白没有特异性，用CRISPR/Cas9系统切割BMAL1基因，向导RNA的识别序列应具有的特点是___________。
（3）为了获得更多的受精卵，可对母猕猴注射___________激素，使其超数排卵，判断卵细胞受精成功的重要标志是___________。在个体水平鉴定BMAL1基因敲除成功的方法是___________。
（4）该团队利用一只BMAL1缺失的成年猕猴体细胞克隆出5只后代的实验中，体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植，原因是___________。
（5）在人类生物节律紊乱机理研究方面，猕猴模型比小鼠、果蝇等传统模型动物更加理想，理由是___________。基因编辑后通过体细胞克隆得到的数只BMAL1缺失猕猴（A组），与仅通过基因编辑受精卵得到的数只BMAL1缺失猕猴（B组）比较，___________（填“A组”或“B组”）更适合做疾病研究模型动物，理由是___________。

【推荐1】肥胖对人类健康的影响日益严重，多数肥胖者难以抵御食物的诱惑。科学家提出了两种不同的观点来解释这一现象，观点①：肥胖者拥有较多的味蕾，且味蕾敏感度高，能产生比正常人更多的愉悦感；观点②：肥胖者比正常人味蕾少，敏感度低，需要摄入更多的食物，才能获得与正常人同等的愉悦感。为了检验两种观点的合理性，科学家利用小鼠进行了相关实验，实验记录如下表（表中数值均是与对照组比的相对值）：

			0天	20天	40天	60天	80天
A组体重正常小鼠	正常饲料	进食量	1	1	1	1	1
		舌味蕾数	1	1	1	1	1
B组快速催肥小鼠	正常饲料	进食量	1.09	1.23	1.36	1.52	1.70
		舌味蕾数	0.97	0.94	0.81	0.65	0.45

（1）实验数据支持了观点____________。为了探究小鼠味蕾数量减少是肥胖导致的，还是进食量增加导致的，研究人员设计了一项巧妙的实验：选取具有抗肥胖基因的小鼠，填喂与____________（填“A组”或“B组”）等量的正常饲料，结果这批小鼠没有出现___________________的现象，说明味蕾减少是肥胖导致的。
（2）进一步研究发现，肥胖小鼠味蕾细胞减少的原因有两个方面：一方面是由于___________的细胞增多；另一方面是干细胞通过____________形成新的味蕾细胞的速率下降，导致肥胖小鼠的味蕾细胞逐渐减少。

【推荐3】为了验证“植物主茎顶芽产生的生长素能够抑制侧芽生长”，某同学进行了以下实验：
①选取健壮、生长状态一致的幼小植株，分为甲、乙、丙、丁4组，甲组植株不做任何处理，其他三组植株均切除顶芽。然后乙组植株切口不做处理；丙组植株切口处放置不含生长素的琼脂块；丁组植株切口处放置含有适宜浓度生长素的琼脂块。
②将上述4组植株置于相同的适宜条件下培养。
回答下列问题：
(1)各组植株侧芽的预期生长情况分别为：甲组____；乙组____；丙组____；丁组____。
(2)比较甲组与乙组的预期结果，能够说明____。
(3)比较乙组和丙组的预期结果，能够说明____。
(4)比较丙组和丁组的预期结果，能够说明____。
(5)顶芽产生的生长素抑制侧芽生长的原因是____。