回答下列(一)、(二)小题
(一)回答与红心猕猴桃酒发酵工艺有关的问题:
(1)猕猴桃果汁中糖分不能够完全满足酵母菌的生长繁殖,因此可以添加适量_________ 使果汁中的糖分增加。随着糖分的增加,酵母菌代谢速度加快,猕猴桃酒的酒精度_________ 。但当初始糖度过大时,酒精度反而降低,可能是因为_________ 。
(2)猕猴桃酒中的酸主要为有机酸,能够使果酒产生酸涩的口感,乳酸菌对有机酸(特别是苹果酸)的降解有明显作用,其副产物能增加香气,故生产上用乳酸菌进行二次发酵,由此可见发酵菌种中微生物的种类、_________ 、种间关系等都是造成发酵产品不同风味的重要原因。
(3)工业化生产中,发酵前对菌种进行多次_________ 培养后再接种,有利于缩短菌种在发酵罐中的发酵时间。发酵时,需要严格控制发酵的_________ 等。
(二)绿色荧光蛋白(GFP)是水母体内的一种发光蛋白,其编码基因可作为基因工程中载体上的标记基因。研究人员在pBIN19质粒的LacZ基因(β-半乳糖苷酶基因)内部插入GFP基因和CaMV35S(强启动子)构建成可用于培育转基因植物的质粒载体pBIN-35S-GFP(如图所示)。回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2023/1/1/3143642628235264/3144801868529664/STEM/69bb1aedc32540b1a0c457922b9a4ff6.png?resizew=502)
注:质粒上“LB→……←RB”片段为T-DNA片段,Kmr基因为卡那霉素抗性基因,质粒上限制酶的识别序列省略未标出。
(4)构建pBIN-35S-GFP载体的过程中需要用到_________ 酶,要插入CaMV35S的目的是_________ ,因此CaMV35S需插入到GFP基因的_________ 。
(5)已知β-半乳糖苷酶能将无色的X-gal分解为半乳糖和蓝色的5-溴-4-氯靛蓝。把GFP基因和CaMV35S插入到LacZ基因的内部,除了通过菌落是否产生绿色荧光来筛选导入质粒pBIN-35S-GFP外,还可以通过添加了_________ 培养基,菌落颜色呈_________ 色的就是导入了质粒pBIN-35S-GFP的受体菌的克隆。
(6)若用pBIN-35S-GFP载体采用农杆菌转化法进行植物转基因操作,外植体转化完成后常用抗生素进行除菌。若利用PCR技术判定农杆菌是否已经除尽,可根据_________ (填图中质粒片段名称)基因的序列设计引物,对PCR的产物进行凝胶电泳,若_________ ,说明外植体中已无农杆菌残留。
(7)绿色荧光蛋白基因可作为基因工程中载体上的标记基因。绿色荧光蛋白则可用于研究蛋白质在细胞中的定位,原因除了绿色荧光蛋白能够发荧光外,还有一重要原因是GFP结合到被研究的目的蛋白的末端,不影响该蛋白的_________ ,还是按照无GFP结合的蛋白同样的路径运转。要使GFP结合到目的蛋白的末端,构建重组质粒时目的基因、GFP基因、CaMV35S的连接顺序为_________ (用“→”回答)。
(一)回答与红心猕猴桃酒发酵工艺有关的问题:
(1)猕猴桃果汁中糖分不能够完全满足酵母菌的生长繁殖,因此可以添加适量
(2)猕猴桃酒中的酸主要为有机酸,能够使果酒产生酸涩的口感,乳酸菌对有机酸(特别是苹果酸)的降解有明显作用,其副产物能增加香气,故生产上用乳酸菌进行二次发酵,由此可见发酵菌种中微生物的种类、
(3)工业化生产中,发酵前对菌种进行多次
(二)绿色荧光蛋白(GFP)是水母体内的一种发光蛋白,其编码基因可作为基因工程中载体上的标记基因。研究人员在pBIN19质粒的LacZ基因(β-半乳糖苷酶基因)内部插入GFP基因和CaMV35S(强启动子)构建成可用于培育转基因植物的质粒载体pBIN-35S-GFP(如图所示)。回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2023/1/1/3143642628235264/3144801868529664/STEM/69bb1aedc32540b1a0c457922b9a4ff6.png?resizew=502)
注:质粒上“LB→……←RB”片段为T-DNA片段,Kmr基因为卡那霉素抗性基因,质粒上限制酶的识别序列省略未标出。
(4)构建pBIN-35S-GFP载体的过程中需要用到
(5)已知β-半乳糖苷酶能将无色的X-gal分解为半乳糖和蓝色的5-溴-4-氯靛蓝。把GFP基因和CaMV35S插入到LacZ基因的内部,除了通过菌落是否产生绿色荧光来筛选导入质粒pBIN-35S-GFP外,还可以通过添加了
(6)若用pBIN-35S-GFP载体采用农杆菌转化法进行植物转基因操作,外植体转化完成后常用抗生素进行除菌。若利用PCR技术判定农杆菌是否已经除尽,可根据
(7)绿色荧光蛋白基因可作为基因工程中载体上的标记基因。绿色荧光蛋白则可用于研究蛋白质在细胞中的定位,原因除了绿色荧光蛋白能够发荧光外,还有一重要原因是GFP结合到被研究的目的蛋白的末端,不影响该蛋白的
更新时间:2023-01-03 12:58:41
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【推荐1】回答下列(一)(二)有关的生物学问题:
(一)生物发酵是生物技术实践活动中的一项重要技术。某校同学利用生物发酵技术开展了以下活动:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2022/10/20/3eae39e2-8df0-4c7b-8915-6164d92f5ce2.png?resizew=225)
(1)甲组同学利用如图装置制作蓝莓酒:发酵开始时,酵母菌的_____ 会使发酵瓶内出现负压。当发酵瓶中停止出现气泡,表示发酵完毕。静置一段时间后,上清液即为果酒,可用____________ 法取出。
(2)乙组同学使用甲组获得的蓝莓酒制作蓝莓醋:发酵前用加入了蛋白胨、酵母提取物和____________ 的液体培养基对醋化醋杆菌进行____________ 。若他们也想利用图装置发酵果醋,需进行的改变是________ (说明A、B管变化)。
(3)丙组同学用萝卜制作泡菜:泡菜制作中起作用的微生物主要是______________________ 。若要测定泡菜中的亚硝酸盐含量,可用____________ 法测定,而用红萝卜腌制的泡菜则不能使用该方法定量测定亚硝酸盐的含量,原因是________________________ 。
(二)如图1为普通抗癌药物和单克隆抗体药物作用特点,图2为我国科学家设计的单克隆抗体偶联药物(ADC)作用机制,请分析回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2022/11/14/7594345c-d63a-4187-9047-080d3c379eef.png?resizew=538)
(4)治疗癌症的生物导弹由__________ 组成,分子标靶治疗药物主要依靠细胞膜上的__________ 区分正常细胞和癌细胞,其中的单克隆抗体所起的作用是____________________ 。
(5)由图2可以看出,携带药物的单克隆抗体偶联药物(ADC)进入细胞的方式为__________ ,该过程消耗的能量直接由__________ 提供。药物能引起癌细胞凋亡,细胞凋亡是指__________ 。
(6)单克隆抗体制备中至少需要经过__________ 次细胞筛选,结合图1、图2可以看出,与常规抗癌药物相比,利用单克隆抗体制备的生物导弹治疗癌症具有的明显优点是__________ 。
(一)生物发酵是生物技术实践活动中的一项重要技术。某校同学利用生物发酵技术开展了以下活动:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2022/10/20/3eae39e2-8df0-4c7b-8915-6164d92f5ce2.png?resizew=225)
(1)甲组同学利用如图装置制作蓝莓酒:发酵开始时,酵母菌的
(2)乙组同学使用甲组获得的蓝莓酒制作蓝莓醋:发酵前用加入了蛋白胨、酵母提取物和
(3)丙组同学用萝卜制作泡菜:泡菜制作中起作用的微生物主要是
(二)如图1为普通抗癌药物和单克隆抗体药物作用特点,图2为我国科学家设计的单克隆抗体偶联药物(ADC)作用机制,请分析回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2022/11/14/7594345c-d63a-4187-9047-080d3c379eef.png?resizew=538)
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【推荐2】苹果醋是以苹果汁为原料经发酵而成的。回答下列问题:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2021/11/4/2843934722088960/2846284376383488/STEM/38a3ed3d-126c-4c96-9b3b-c4ee7550690d.png)
(1)酵母菌的呼吸代谢途径如图所示。图中过程①和②是苹果醋生产的第一阶段,在酵母菌细胞的_________________ 中进行,其产物乙醇与_________________ 试剂反应呈现灰绿色,这一反应可用于乙醇的检验;过程③在酵母菌细胞的________________ 中进行。与无氧条件相比,在有氧条件下,酵母菌的增殖速度________________ 。
(2)第二阶段是在醋酸杆菌的作用下将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程,请用相关的化学反应式表示:________________________ ;根据醋酸杆菌的呼吸作用类型,该过程需要在________________ 条件下才能完成。
(3)在生产过程中,第一阶段和第二阶段的发酵温度不同,第一阶段的温度____________ (填“低于”或“高于”)第二阶段的。
(4)醋酸杆菌的代谢类型为____________________ ,属于___________ 核生物,其细胞结构中_______ (填“含有”或“不含有”)线粒体。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2021/11/4/2843934722088960/2846284376383488/STEM/38a3ed3d-126c-4c96-9b3b-c4ee7550690d.png)
(1)酵母菌的呼吸代谢途径如图所示。图中过程①和②是苹果醋生产的第一阶段,在酵母菌细胞的
(2)第二阶段是在醋酸杆菌的作用下将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程,请用相关的化学反应式表示:
(3)在生产过程中,第一阶段和第二阶段的发酵温度不同,第一阶段的温度
(4)醋酸杆菌的代谢类型为
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【推荐3】桃子是很多人喜爱的一种水果,其果肉中含有葡萄糖、有机酸和维生素C等营养成分,对人体很有益。桃子可用来酿造桃子酒、桃子醋,桃叶可用来提取番茄红素。请回答下列有关问题:
(1)在自然发酵酿造桃子酒的过程中,酵母菌主要来自_____________ 。桃子叶肉细胞与酵母菌细胞的生物膜系统组成的主要差异为______________________________ 。
(2)在酿制桃子酒的过程中,装置的通气操作及目的为____________________ 。酿制桃子酒时,若未对桃子进行严格的消毒处理,则对桃子酒的制作是否有影响?____________________ 。
(3)在醋酸菌发酵过程中,醋酸菌可以利用的底物主要有__________ 。若在制作桃子酒的基础上继续酿造桃子醋,需要改变的条件主要为__________ 。
(4)从桃叶中提取番茄红素,确定提取方法主要根据__________ 来决定。
(1)在自然发酵酿造桃子酒的过程中,酵母菌主要来自
(2)在酿制桃子酒的过程中,装置的通气操作及目的为
(3)在醋酸菌发酵过程中,醋酸菌可以利用的底物主要有
(4)从桃叶中提取番茄红素,确定提取方法主要根据
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【推荐1】根据基因工程的有关知识,回答下列问题。
(1)限制酶切割DNA分子后产生的片段,其末端类型有:__________ 和_____________ 。
(2)质粒用EcoR Ⅰ切割后产生的片段如下:
AATTC……G
G……CTTAA
为使载体与目的基因相连,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,还可用另一种限制性内切酶切割,该酶必须具有的特点是_______________ 。
(3)实际操作中,往往用EcoRⅠ和另一种限制性内切酶同时分别切割质粒和外源DNA分子,其优点在于可防止____ 。
(4)按其来源不同,基因工程中所使用的DNA连接酶有两类,即___ DNA连接酶和___ DNA连接酶。
(5)基因工程中除质粒外,___ 和___ 也可作为载体。
(1)限制酶切割DNA分子后产生的片段,其末端类型有:
(2)质粒用EcoR Ⅰ切割后产生的片段如下:
AATTC……G
G……CTTAA
为使载体与目的基因相连,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,还可用另一种限制性内切酶切割,该酶必须具有的特点是
(3)实际操作中,往往用EcoRⅠ和另一种限制性内切酶同时分别切割质粒和外源DNA分子,其优点在于可防止
(4)按其来源不同,基因工程中所使用的DNA连接酶有两类,即
(5)基因工程中除质粒外,
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名校
【推荐2】姜黄素具有降血脂、抗癌和抗炎等多种医疗作用,科学家将合成姜黄素的基因导入大肠杆菌中,成功获得了姜黄素产量高的工程菌,示意图如下。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2023/5/8/b500f855-ca1d-4824-b7b6-f0421eaef032.png?resizew=500)
回答下列问题:
(1)步骤1中利用的培养基成分不同,但都含有___________ 等营养物质。
(2)步骤2的目的是____________ 。大肠杆菌在步骤2中的作用是___________ ,在步骤3中的作用是____________ 。
(3)构建大肠杆菌工程菌的过程发生的变异类型是___________ ,此过程中常需切割大肠杆菌内的特定基因,切割基因时使用的工具是___________ ,该酶的作用对象是___________ 。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/editorImg/2023/5/8/b500f855-ca1d-4824-b7b6-f0421eaef032.png?resizew=500)
回答下列问题:
(1)步骤1中利用的培养基成分不同,但都含有
(2)步骤2的目的是
(3)构建大肠杆菌工程菌的过程发生的变异类型是
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【推荐3】氮是植物生长必不可少的一种元素,为了让植物能够拥有固氮超能力,科学家一直在尝试用已经发现的固氮基因改造植物基因组,但目前还没有获得植物界固氮“超人”。2018某研究团队报道通过基因工程方法,将一种蓝细菌中20多个固氮基因,转移到另一种不能固氮但能进行光合作用的蓝细菌中,让后者获得了固氮能力。回答下列问题:
(1)1967年,罗思和海林斯基发现细菌拟核DNA之外的质粒具有________ 特点,这一发现为基因转移找到一种运载工具。
(2)构建含固氮基因的重组质粒,需要用_______ 酶,并且将固氮基因置于_______ 和________ 之间,其中后者位于基因的首端,它的作用是_____________ 。
(3)若将含固氮基因的重组质粒导入蓝细菌,一般情况下,蓝细菌应处于感受态,原因是_________________________________________ 。
(4)一些研究发现,某些转基因植物可以表达个别或全部固氮酶基因,但它们并没有表现出固氮能力。固氮酶基因在植物中是否翻译成蛋白质,检测的方法是______________ 。某些转基因植物没有表现出固氮能力,可能的原因是_________________ 。
(1)1967年,罗思和海林斯基发现细菌拟核DNA之外的质粒具有
(2)构建含固氮基因的重组质粒,需要用
(3)若将含固氮基因的重组质粒导入蓝细菌,一般情况下,蓝细菌应处于感受态,原因是
(4)一些研究发现,某些转基因植物可以表达个别或全部固氮酶基因,但它们并没有表现出固氮能力。固氮酶基因在植物中是否翻译成蛋白质,检测的方法是
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解题方法
【推荐1】 图1 中的三个 DNA 片段上依次表示出了EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ和 Sau3A Ⅰ三种限制酶的识别序列与切割位点,图2为某种表达载体的示意图(载体上的 EcoR Ⅰ、Sau3A Ⅰ的切点是唯一的)。
(1)经 BamH Ⅰ酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被_________ 酶切后的产物连接,理由是_____________ 。
(2)若某人利用图2所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子,如图3 所示。这三种重组子中,不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有_________ ,不能表达的原因是___________________ 。
(3)DNA 连接酶是将两个DNA 片段连接起来的酶,其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是______________ 。
(4)为了检测目的基因是否存在于克隆牛的不同组织细胞中,某同学用PCR 方法进行鉴定,在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的__________ (填“mRNA”“总RNA”或“核DNA”)作为PCR 模板。
(1)经 BamH Ⅰ酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被
(2)若某人利用图2所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子,如图3 所示。这三种重组子中,不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有
(3)DNA 连接酶是将两个DNA 片段连接起来的酶,其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是
(4)为了检测目的基因是否存在于克隆牛的不同组织细胞中,某同学用PCR 方法进行鉴定,在鉴定时应分别以该牛不同组织细胞中的
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名校
【推荐2】科研人员通过转基因技术培育出超量表达P蛋白的转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中,含P基因的DNA片段以及Ti质粒的酶切位点如下图所示,其中强启动子能驱动基因的持续转录。请回答下列问题。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2022/4/2/2949660114362368/2950238009647104/STEM/d6cdc87b-be9a-45f3-906e-715d3fee0b3c.png?resizew=497)
(1)以RNA为模板,通过RT-PCR技术可获取P基因。进行RT–PCR时一般要加入4种脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)而不是脱氧核苷酸,其原因是_______________ ,同时需加入的酶有_______________ 。为了特异性扩增P基因序列,需根据_______________ 设计特异性引物。
(2)在构建基因表达载体时,应优先选用的限制酶是_______________ 和_______________ ,这样操作不仅使P基因在玉米植株中超量表达,还可利用T-DNA的_______________ 特性,最终使P基因_______________ 。
(3)将农杆菌液浸泡过的玉米愈伤组织进行植物组织培养时,培养基中需加入_______________ ,筛选出的愈伤组织经再分化过程形成丛芽,最终获得转基因玉米植株。
(4)对转基因再生玉米植株进行鉴定时发现,有些植株虽有P基因,但几乎没有P蛋白,造成该现象的原因可能有_______________ 。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2022/4/2/2949660114362368/2950238009647104/STEM/d6cdc87b-be9a-45f3-906e-715d3fee0b3c.png?resizew=497)
限制酶 | 识别序列 |
ClaⅠ | 5′AT↓CGAT3′ |
BamHⅠ | 5′G↓GATCC3′ |
HindⅢ | 5′A↓AGCTT3′ |
EcoRⅠ | 5′G↓AATTC3′ |
KpnⅠ | 5′GGTAC↓C3′ |
SacⅠ | 5′GAGCT↓C3′ |
(2)在构建基因表达载体时,应优先选用的限制酶是
(3)将农杆菌液浸泡过的玉米愈伤组织进行植物组织培养时,培养基中需加入
(4)对转基因再生玉米植株进行鉴定时发现,有些植株虽有P基因,但几乎没有P蛋白,造成该现象的原因可能有
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解题方法
【推荐3】山梨醇是蔷薇科木本植物主要的光合产物和转运物质,6-磷酸山梨醇脱氢酶(S6PDH)是其合成的关键酶,现将S6PDH基因的启动子(S6PDHp)与GUS基因融合构建植物表达载体,检测转基因番茄各组织中的GUS蛋白含量,来研究S6PDHp的组织表达特点。
(1)目的基因的获取。S6PDH基因启动子是___ 识别并结合的位点。欲获得该启动子,可根据___ 设计引物,以苹果叶片细胞提取的DNA为___ 进行PCR扩增。
(2)构建表达载体。将S6PDHp插入质粒的GUS基因上游,构建了S6PDHp—GUS融合表达载体。用表达载体转化处于___ 的大肠杆菌,转化后将大肠杆菌涂布在含有卡那霉素抗生素的固体培养基上进行培养,目的是完成初步___ 和___ 。挑选单菌落采用___ 方法鉴定,获得阳性菌落,扩大培养阳性菌落并提取表达载体。
(3)农杆菌转化番茄及转基因植株的PCR检测。番茄种子经___ 处理后在无菌条件下播种于MS培养基上,发芽长出子叶,番茄子叶与重组农杆菌共培养3d,再在相应的诱导培养基上进行筛选培养,2~3周后发生脱分化形成了___ ,培养后转到分化培养基上,发现有少数逐渐分化出___ ,当抗性植株生长至3~4片真叶时转入生根培养基进行诱导生根,然后将生根的转基因番茄苗移栽到士里,获得转基因番茄抗性苗,用特定引物对获得的转基因番茄植株进行PCR检测,PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定,在凝胶中DNA分子的迁移速率与___ 有关。
(4)S6PDHp转化番茄植株各组织GUS表达的检测。GUS基因在组织细胞表达后,特定条件下可表现蓝色,若转基因番茄幼苗呈现蓝色,说明___ 。GUS染色试验发现,转基因番茄叶片在生长过程中新叶的GUS活性最高,成熟叶次之,老叶中GUS活性最低,几乎为零,说明S6PDHp的组织表达特点为___ 。
(1)目的基因的获取。S6PDH基因启动子是
(2)构建表达载体。将S6PDHp插入质粒的GUS基因上游,构建了S6PDHp—GUS融合表达载体。用表达载体转化处于
(3)农杆菌转化番茄及转基因植株的PCR检测。番茄种子经
(4)S6PDHp转化番茄植株各组织GUS表达的检测。GUS基因在组织细胞表达后,特定条件下可表现蓝色,若转基因番茄幼苗呈现蓝色,说明
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【推荐1】油菜籽中蛋白质和油脂的相对含量,与酶1和酶2对共同底物丙酮酸的竞争有关。 酶1促进蛋白质的合成,酶2促进油脂的合成。通过生物工程技术对油菜进行改造,以得到含有基因A的油菜,流程图如下。请据图作答:
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2018/4/18/1926934548512768/1927919829745664/STEM/5ad53b391f7d49e5956360f7679a12ec.png?resizew=453)
(1)上述改造过程中运用的生物工程技术是__________ 。
(2)通过__________ 、__________ 或人工化学合成等方法,都可获取目的基因A。过程①中的处理方法为__________ 。
(3)过程④中要防止杂菌污染的原因是_______ 。通过过程④得到的油菜植株中,所有细胞_______ (填“一定”、“不一定”或“一定不”)含有基因A。
(4)已知转录时基因A的模板链与酶1基因的模板链互补。相对普通油菜,含基因A的油菜籽粒油脂含量显著提高,请分析其机理:______________________________ 。
![](https://img.xkw.com/dksih/QBM/2018/4/18/1926934548512768/1927919829745664/STEM/5ad53b391f7d49e5956360f7679a12ec.png?resizew=453)
(1)上述改造过程中运用的生物工程技术是
(2)通过
(3)过程④中要防止杂菌污染的原因是
(4)已知转录时基因A的模板链与酶1基因的模板链互补。相对普通油菜,含基因A的油菜籽粒油脂含量显著提高,请分析其机理:
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【推荐2】某科研机构研发的幽门螺杆菌疫苗为基因工程疫苗,对该菌引发的胃炎、胃溃疡等疾病具有较好的预防效果,其有效成分是该菌的一种表面抗原蛋白质,请回答下列问题。
(1)要获得编码该菌表面抗原的基因,可提取出该菌的mRNA,并将mRNA_________________ 。要大量获得表达特异抗原的基因,可采用________ 技术。
(2)基因工程的核心步骤是构建_________ ,该结构除了抗原基因(目的基因)外,还必须有启动子、终止子以及________ 。
(3)目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内稳定和表达的过程,称为________ 。在表达过程中,启动子需与______ 识别和结合,从而驱动转录过程。最终翻译是否成功,常用的检测方法是_________ 。
(4)与传统疫苗相比,基因疫苗不仅能在宿主体内较长时间存在,还可以诱导产生______ (填“体液免疫”“细胞免疫”或“体液免疫和细胞免疫”)。基因疫苗是在基因治疗技术的基础上发展而来的,基因治疗是把________ 导入病人体内,使该基因表达产物发挥功能,从而达到治疗疾病的目的。
(1)要获得编码该菌表面抗原的基因,可提取出该菌的mRNA,并将mRNA
(2)基因工程的核心步骤是构建
(3)目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内稳定和表达的过程,称为
(4)与传统疫苗相比,基因疫苗不仅能在宿主体内较长时间存在,还可以诱导产生
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【推荐3】转基因重组酵母乙肝疫苗是一种乙肝表面抗原(HBsAg)亚单位疫苗。巴斯德华赤酵母是一种甲醇营养型酵母,能以甲醇作为唯一碳流,该酵母是组氨酸脱氢酶基因(His)缺失突变体。不能催化组氨酸生物合成反应。下图所示质粒中的5'AOX1、3'AOXI(TT)是强启动子序列和终止子序列,请回答下列问题。
限制酶的识别序列和切割位点
(1)图示质粒中含有的卡那霉素抗性基因kanr、氨苄青霉素抗性基因ampr在基因工程中一般作为__________ ,有利于重组质粒的筛选。质粒中需具有多个限制酶切割位点。其作用是________________ 。
(2)据图和表分析,构建重组质粒时,需选择图中的__________ 限制酶切割质粒,其优点为__________ 。
HBsAg基因的B位置需接上___________ (填相应末端的碱基序列)。经过限制酶酶切的质粒与HBsAg基因在进行连接时,可选用___________ 连接
(3)图中步骤1一般先用Ca2+处理大肠杆菌,使其处于_________ 的生理状态。由步骤2的结果分析,步骤1将重组质粒先导入大肠杆菌有利于HBsAg基因在受体细胞中_________ 。
(4)以巴斯德毕赤酵母细胞为受体,步骤3中应选用限制酶_________ 切割从大肠杆菌中分离的重组质粒,从而获得图示重组DNA片段,然后将其整合到酵母细胞基因组中,在不含_________ 的培养基中筛选出成功导入了HBsAg基因的酵母细胞。
(5)转化成功的巴斯德毕赤酵母在培养基上培养一段时间后,需向培养基中加入__________ 以维持其生活。与细菌相比,酵母菌更适宜作为受体细胞制备HBsAg亚单位疫苗,原因是_________ 。
限制酶的识别序列和切割位点
限制酶 | SnaB I | BglⅡ | AvrⅡ | Sac I |
识别序列及切割位点 | TAC↓GTA | A↓GATCT | C↓CTAGG | C↓TCGAG |
(2)据图和表分析,构建重组质粒时,需选择图中的
HBsAg基因的B位置需接上
(3)图中步骤1一般先用Ca2+处理大肠杆菌,使其处于
(4)以巴斯德毕赤酵母细胞为受体,步骤3中应选用限制酶
(5)转化成功的巴斯德毕赤酵母在培养基上培养一段时间后,需向培养基中加入
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