26. 回答下列(一)、(二)小题
(一)回答与红心猕猴桃酒发酵工艺有关的问题:
(1)猕猴桃果汁中糖分不能够完全满足酵母菌的生长繁殖,因此可以添加适量
_________使果汁中的糖分增加。随着糖分的增加,酵母菌代谢速度加快,猕猴桃酒的酒精度
_________。但当初始糖度过大时,酒精度反而降低,可能是因为
_________。
(2)猕猴桃酒中的酸主要为有机酸,能够使果酒产生酸涩的口感,乳酸菌对有机酸(特别是苹果酸)的降解有明显作用,其副产物能增加香气,故生产上用乳酸菌进行二次发酵,由此可见发酵菌种中微生物的种类、
_________、种间关系等都是造成发酵产品不同风味的重要原因。
(3)工业化生产中,发酵前对菌种进行多次
_________培养后再接种,有利于缩短菌种在发酵罐中的发酵时间。发酵时,需要严格控制发酵的
_________等。
(二)绿色荧光蛋白(GFP)是水母体内的一种发光蛋白,其编码基因可作为基因工程中载体上的标记基因。研究人员在pBIN19质粒的LacZ基因(β-半乳糖苷酶基因)内部插入GFP基因和CaMV35S(强启动子)构建成可用于培育转基因植物的质粒载体pBIN-35S-GFP(如图所示)。回答下列问题:
注:质粒上“LB→……←RB”片段为T-DNA片段,Kmr基因为卡那霉素抗性基因,质粒上限制酶的识别序列省略未标出。
(4)构建pBIN-35S-GFP载体的过程中需要用到
_________酶,要插入CaMV35S的目的是
_________,因此CaMV35S需插入到GFP基因的
_________。
(5)已知β-半乳糖苷酶能将无色的X-gal分解为半乳糖和蓝色的5-溴-4-氯靛蓝。把GFP基因和CaMV35S插入到LacZ基因的内部,除了通过菌落是否产生绿色荧光来筛选导入质粒pBIN-35S-GFP外,还可以通过添加了
_________培养基,菌落颜色呈
_________色的就是导入了质粒pBIN-35S-GFP的受体菌的克隆。
(6)若用pBIN-35S-GFP载体采用农杆菌转化法进行植物转基因操作,外植体转化完成后常用抗生素进行除菌。若利用PCR技术判定农杆菌是否已经除尽,可根据
_________(填图中质粒片段名称)基因的序列设计引物,对PCR的产物进行凝胶电泳,若
_________,说明外植体中已无农杆菌残留。
(7)绿色荧光蛋白基因可作为基因工程中载体上的标记基因。绿色荧光蛋白则可用于研究蛋白质在细胞中的定位,原因除了绿色荧光蛋白能够发荧光外,还有一重要原因是GFP结合到被研究的目的蛋白的末端,不影响该蛋白的
_________,还是按照无GFP结合的蛋白同样的路径运转。要使GFP结合到目的蛋白的末端,构建重组质粒时目的基因、GFP基因、CaMV35S的连接顺序为
_________(用“→”回答)。