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题型:非选择题-解答题 难度:0.4 引用次数:1410 题号:18042179
研究发现,大部分白血病患者细胞中存在异常的融合基因UBA2—WTIP,可作为检测白血病的特异性分子标志物。科研人员通过RT—PCR方法克隆得到融合基因UBA2—WTIP,为了研究该基因的作用和致病机制,需要构建重组载体并把目的基因和FLAG标签基因序列连接起来,分别获得带有FLAG肽链的UBA2—WTIP融合蛋白和WTIP蛋白。FLAG肽链由8个氨基酸残基组成,可作为基因工程中蛋白质是否表达的标记。
(1)科研人员以提取的某白血病人外周血细胞总RNA为模板,经过_____过程合成cDNA,设计_____种引物,经RT—PCR扩增出融合基因UBA2—WTIP。对测序结果进行数据分析,推测融合基因UBA2—WTIP是在UBA2基因的第16外显子与WTIP基因的第2外显子处拼接而成,如图1所示。为了验证该融合基因的产生是基因组DNA融合而不是不同的RNA剪接后逆转录所产生的,可通过PCR验证,其实验思路和预期结果为_____

(2)为了构建重组载体,科研人员设计了以下2种引物,如图2所示:
上游引物F2为:5’TATGGTACCATG①GCACTGTCGCGGGGG3’,GGTACC为Kpn Ⅰ酶切位点;
下游引物R2为:5’TAT②TCA③GAGCTCAGTGACGTG3’;
FLAG标签基因编码链序列(5’GATTACAAGGATGACGACGATAAG3’)可以插入目的基因编码区的首端或者末端。已知引物中ATG对应起始密码,若UBA2—WTIP融合基因编码的蛋白质前端有一段信号肽,则FLAG标签基因序列一般不能插入①位置,原因是_____;若在下游引物R2②③处插入FLAG标签基因序列和EcoR Ⅰ酶切位点,已知引物中TCA对应终止密码,位置③处序列为5’_____3’。

(3)制备的重组载体体外转染人类白血病细胞株KG—la细胞,提取各细胞总蛋白,用FLAG单克隆抗体检测蛋白表达情况,并分别测定转染空质粒的对照细胞、转录UBA2—WTIP融合基因及转录WTIP基因的KG-la细胞增殖情况,结果分别如图3所示。

检测相关蛋白质是否表达的方法是_____;上述生长曲线结果说明_____
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回答下列问题:
(1)图中酶 2 是_____________ 。利用 PCR 技术扩增目的基因时,使反应体系中的模板 DNA 解链为单链 的条件是加热至 90-95℃,目的是破坏了 DNA 分子中的_____________ 键。在构建重组 Ti 质粒的过程 中,需将目的基因插入到 Ti 质粒的_______________________ 中。获得的 cDNA 与青蒿细胞中该基因 碱基序列__________________ (填相同或不同)。
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(3)检验目的基因是否整合到青蒿素基因组,可以将放射性同位素标记的__________做成分子探针与青蒿素基因组 DNA 杂交。理论上,与野生型相比,该探针与转 基因青蒿素 DNA 形成的杂交带的量_____(填较多或较少)。
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2020-09-03更新 | 141次组卷
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①为了一次性扩增出条带,加入一个PCR管的多对SSR引物扩增应满足______
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B.每对引物扩增的产物长度相同
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2024-05-04更新 | 177次组卷
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①下表为利用PCR进行检测的反应体系的配方,请将表格补充完整。
PCR反应体系

组分

总体积/10μL

10倍浓缩的扩增缓冲液

1μL

i______

1.5μL

4种脱氧核苷酸等量混合液(2.5mmol·L-1

0.5μL

引物I/II(5.0μmol·L-1

1/1μL

Taq DNA聚合酶

0.20μL

H2O

ii______

②图为Pib基因的部分序列。
5'—…AATGCCC…ATGTGGA…—3'
3'—…TTACGGG…TACACCT…—5'
根据图,选择______作为引物对Pib基因进行扩增。
A.5'—…AATGCCC…—3'       B.5'—…TCCACAT…—3'
C.5'—…TTACGGG…—3'       D.5'—…ATGTGGA…—3'
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