研究发现,大部分白血病患者细胞中存在异常的融合基因UBA2—WTIP,可作为检测白血病的特异性分子标志物。科研人员通过RT—PCR方法克隆得到融合基因UBA2—WTIP,为了研究该基因的作用和致病机制,需要构建重组载体并把目的基因和FLAG标签基因序列连接起来,分别获得带有FLAG肽链的UBA2—WTIP融合蛋白和WTIP蛋白。FLAG肽链由8个氨基酸残基组成,可作为基因工程中蛋白质是否表达的标记。
(1)科研人员以提取的某白血病人外周血细胞总RNA为模板,经过_____ 过程合成cDNA,设计_____ 种引物,经RT—PCR扩增出融合基因UBA2—WTIP。对测序结果进行数据分析,推测融合基因UBA2—WTIP是在UBA2基因的第16外显子与WTIP基因的第2外显子处拼接而成,如图1所示。为了验证该融合基因的产生是基因组DNA融合而不是不同的RNA剪接后逆转录所产生的,可通过PCR验证,其实验思路和预期结果为_____ 。
(2)为了构建重组载体,科研人员设计了以下2种引物,如图2所示:
上游引物F2为:5’TATGGTACCATG①GCACTGTCGCGGGGG3’,GGTACC为Kpn Ⅰ酶切位点;
下游引物R2为:5’TAT②TCA③GAGCTCAGTGACGTG3’;
FLAG标签基因编码链序列(5’GATTACAAGGATGACGACGATAAG3’)可以插入目的基因编码区的首端或者末端。已知引物中ATG对应起始密码,若UBA2—WTIP融合基因编码的蛋白质前端有一段信号肽,则FLAG标签基因序列一般不能插入①位置,原因是_____ ;若在下游引物R2②③处插入FLAG标签基因序列和EcoR Ⅰ酶切位点,已知引物中TCA对应终止密码,位置③处序列为5’_____ 3’。
(3)制备的重组载体体外转染人类白血病细胞株KG—la细胞,提取各细胞总蛋白,用FLAG单克隆抗体检测蛋白表达情况,并分别测定转染空质粒的对照细胞、转录UBA2—WTIP融合基因及转录WTIP基因的KG-la细胞增殖情况,结果分别如图3所示。
检测相关蛋白质是否表达的方法是_____ ;上述生长曲线结果说明_____ 。
(1)科研人员以提取的某白血病人外周血细胞总RNA为模板,经过
(2)为了构建重组载体,科研人员设计了以下2种引物,如图2所示:
上游引物F2为:5’TATGGTACCATG①GCACTGTCGCGGGGG3’,GGTACC为Kpn Ⅰ酶切位点;
下游引物R2为:5’TAT②TCA③GAGCTCAGTGACGTG3’;
FLAG标签基因编码链序列(5’GATTACAAGGATGACGACGATAAG3’)可以插入目的基因编码区的首端或者末端。已知引物中ATG对应起始密码,若UBA2—WTIP融合基因编码的蛋白质前端有一段信号肽,则FLAG标签基因序列一般不能插入①位置,原因是
(3)制备的重组载体体外转染人类白血病细胞株KG—la细胞,提取各细胞总蛋白,用FLAG单克隆抗体检测蛋白表达情况,并分别测定转染空质粒的对照细胞、转录UBA2—WTIP融合基因及转录WTIP基因的KG-la细胞增殖情况,结果分别如图3所示。
检测相关蛋白质是否表达的方法是
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更新时间:2023-02-08 18:36:20
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【推荐1】屠呦呦因发现抗疟药青蒿素而获得诺贝尔奖。某课题组为得到青蒿素产量高的新品系,让青 蒿素合成过程的某一关键酶基因 fps 在野生青蒿素中过量表达,其过程图如下:
回答下列问题:
(1)图中酶 2 是_____________ 。利用 PCR 技术扩增目的基因时,使反应体系中的模板 DNA 解链为单链 的条件是加热至 90-95℃,目的是破坏了 DNA 分子中的_____________ 键。在构建重组 Ti 质粒的过程 中,需将目的基因插入到 Ti 质粒的_______________________ 中。获得的 cDNA 与青蒿细胞中该基因 碱基序列__________________ (填相同或不同)。
(2)以 mRNA 为材料可以获得 cDNA,其原理是_____ 。
(3)检验目的基因是否整合到青蒿素基因组,可以将放射性同位素标记的__________ 做成分子探针与青蒿素基因组 DNA 杂交。理论上,与野生型相比,该探针与转 基因青蒿素 DNA 形成的杂交带的量_____ (填较多或较少)。
(4)据图分析,农杆菌的作用是_____ 。判断该课题组的研究目的是否达到,必须检测转基因青蒿素植株中的_________ 。
回答下列问题:
(1)图中酶 2 是
(2)以 mRNA 为材料可以获得 cDNA,其原理是
(3)检验目的基因是否整合到青蒿素基因组,可以将放射性同位素标记的
(4)据图分析,农杆菌的作用是
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【推荐2】黄瓜是世界上重要的蔬菜作物之一,果皮与果肉颜色是商品品质的重要特征。科学家进行了以下研究:
(1)为研究黄瓜果皮颜色的遗传规律,进行以下杂交实验如图1,图2为黄瓜果皮叶绿素的代谢途径,F2中白色个体的基因型是_________ 。(2)为研究黄瓜果肉颜色的遗传规律,科研人员选择突变体丙进行了图3所示的杂交实验。①丙多代自交的目的是______________ 。
②科研人员以果肉绿色的野生型和果肉白绿色突变体丙3为亲本进行正反交,F1表型均为野生型。F1个体全部自交,F2的表型及比例是______ ,说明果肉颜色(绿色和白绿色)由一对等位基因(WG/wg)控制。
(3)SSR是DNA中的简单重复序列,非同源染色体上的SSR重复单位不同(如CA重复或GT重复),不同品种的同源染色体上的SSR重复次数不同,因此常用于染色体特异性标记。研究者取F2中白绿色和绿色个体各20株,提取DNA,表型一致的DNA作混合样本,用不同的SSR引物扩增不同样本的SSR遗传标记,电泳结果如图4.①为了一次性扩增出条带,加入一个PCR管的多对SSR引物扩增应满足______ 。
A.每对引物扩增的产物长度不同
B.每对引物扩增的产物长度相同
C.所有上下游引物不能碱基互补配对
D.所有引物的长度必须相同
②根据电泳结果推测wg基因最可能位于_______ 号染色体上(不考虑染色体互换)。
(1)为研究黄瓜果皮颜色的遗传规律,进行以下杂交实验如图1,图2为黄瓜果皮叶绿素的代谢途径,F2中白色个体的基因型是
②科研人员以果肉绿色的野生型和果肉白绿色突变体丙3为亲本进行正反交,F1表型均为野生型。F1个体全部自交,F2的表型及比例是
(3)SSR是DNA中的简单重复序列,非同源染色体上的SSR重复单位不同(如CA重复或GT重复),不同品种的同源染色体上的SSR重复次数不同,因此常用于染色体特异性标记。研究者取F2中白绿色和绿色个体各20株,提取DNA,表型一致的DNA作混合样本,用不同的SSR引物扩增不同样本的SSR遗传标记,电泳结果如图4.①为了一次性扩增出条带,加入一个PCR管的多对SSR引物扩增应满足
A.每对引物扩增的产物长度不同
B.每对引物扩增的产物长度相同
C.所有上下游引物不能碱基互补配对
D.所有引物的长度必须相同
②根据电泳结果推测wg基因最可能位于
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【推荐3】科研人员获得了携带两种抗稻瘟病的抗性基因Pib和Pikm的水稻品系——川抗30,以及携带螟虫抗性基因CrylC的水稻品系——昌恢。为获得同时携带抗螟虫基因和两种抗稻瘟病基因的改良株系,开展了相关研究。
(1)水稻的稻瘟病抗性与敏感为一对______ 。利用川抗30品系与野生型稻瘟病敏感水稻杂交,F1表现为稻瘟病抗性,F1与野生型杂交,子代性状及分离比为______ ,证明Pib和Pikm位于非同源染色体上。
(2)吕恢品系水稻在品质和产量上明显优于川抗30,科研人员结合分子标记技术筛选目标基因进行杂交育种,以获得改良优质水稻。请写出制备优质、高产的纯合双抗(抗螟虫和抗稻瘟病)水稻的杂交育种技术路线(总体思路)______ 。
(3)研究者利用PCR技术检测改良优质水稻中是否含有Pib基因。
①下表为利用PCR进行检测的反应体系的配方,请将表格补充完整。
PCR反应体系
②图为Pib基因的部分序列。
5'—…AATGCCC…ATGTGGA…—3'
3'—…TTACGGG…TACACCT…—5'
根据图,选择______ 作为引物对Pib基因进行扩增。
A.5'—…AATGCCC…—3' B.5'—…TCCACAT…—3'
C.5'—…TTACGGG…—3' D.5'—…ATGTGGA…—3'
研究者最终确定改良优质水稻具备了相关抗性基因,成功培育出优质、高产的双抗水稻。
(4)检测发现本研究获得的优质双抗水稻的部分性状与昌恢品系相比出现株高上升、千粒重下降的现象,但是利用基因定点编辑技术获得的纯合抗性突变株系,其他性状未发生改变,原因可能是______ 。请从育种的角度对这两种技术进行评价。
(1)水稻的稻瘟病抗性与敏感为一对
(2)吕恢品系水稻在品质和产量上明显优于川抗30,科研人员结合分子标记技术筛选目标基因进行杂交育种,以获得改良优质水稻。请写出制备优质、高产的纯合双抗(抗螟虫和抗稻瘟病)水稻的杂交育种技术路线(总体思路)
(3)研究者利用PCR技术检测改良优质水稻中是否含有Pib基因。
①下表为利用PCR进行检测的反应体系的配方,请将表格补充完整。
PCR反应体系
组分 | 总体积/10μL |
10倍浓缩的扩增缓冲液 | 1μL |
i | 1.5μL |
4种脱氧核苷酸等量混合液(2.5mmol·L-1) | 0.5μL |
引物I/II(5.0μmol·L-1) | 1/1μL |
Taq DNA聚合酶 | 0.20μL |
H2O | ii |
5'—…AATGCCC…ATGTGGA…—3'
3'—…TTACGGG…TACACCT…—5'
根据图,选择
A.5'—…AATGCCC…—3' B.5'—…TCCACAT…—3'
C.5'—…TTACGGG…—3' D.5'—…ATGTGGA…—3'
研究者最终确定改良优质水稻具备了相关抗性基因,成功培育出优质、高产的双抗水稻。
(4)检测发现本研究获得的优质双抗水稻的部分性状与昌恢品系相比出现株高上升、千粒重下降的现象,但是利用基因定点编辑技术获得的纯合抗性突变株系,其他性状未发生改变,原因可能是
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【推荐1】人绒毛膜促性腺激素是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白,由α链和β链(hCGβ)结合而成。近年研究显示,hCGβ可表达于结肠癌等多种恶性肿瘤细胞,与肿瘤的发生、发展及转移有一定关系。研发抗hCGβ疫苗已成为近年来肿瘤生物治疗新的热点,下图1为其制备的基本方案。请分析回答下列有关问题:
注1:甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔
注2:AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子,只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达
(1)图中hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因,其目的是______ 。
(2)当目的基因两侧的小段序列与基因表达载体上某序列相同时,就可以发生同源切割,将目的基因直接插入。同源切割是一种代替_______ 将目的基因导入基因表达载体的方法。
(3)阶段Ⅱ将环化质粒导入CaCl2处理的大肠杆菌,然后在含有______ 的培养基中筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌后进行扩增。
(4)鉴定基因表达载体。为了检验目的基因是否融合成功,提取大肠杆菌中的质粒为模板,设计相应的引物对融合基因进行PCR,再将扩增产物进行电泳。电泳后得到图2所示结果,据图可判断______ 号样品最符合要求。
(5)阶段Ⅳ需将处理后的酵母菌接种在培养基上培养,该培养基不需要添加以下哪些成分_____ (a、氨苄青霉素 b、组氨酸 c、无机盐 d、琼脂),可在此培养基上生长的酵母菌即为含有hCGβ基因表达载体的目的菌株。将此菌株扩大培养后,离心取上清液,用______ 方法进行检测。若上清液中能检测到hCGβ蛋白,则说明hCGβ基因得以表达。
(6)从生产控制的角度分析,选用AOX1作为hCGβ基因启动子的优点是______ 。
注1:甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔
注2:AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子,只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达
(1)图中hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因,其目的是
(2)当目的基因两侧的小段序列与基因表达载体上某序列相同时,就可以发生同源切割,将目的基因直接插入。同源切割是一种代替
(3)阶段Ⅱ将环化质粒导入CaCl2处理的大肠杆菌,然后在含有
(4)鉴定基因表达载体。为了检验目的基因是否融合成功,提取大肠杆菌中的质粒为模板,设计相应的引物对融合基因进行PCR,再将扩增产物进行电泳。电泳后得到图2所示结果,据图可判断
(5)阶段Ⅳ需将处理后的酵母菌接种在培养基上培养,该培养基不需要添加以下哪些成分
(6)从生产控制的角度分析,选用AOX1作为hCGβ基因启动子的优点是
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【推荐2】植物照明作为资源可持续利用的理想途径,为未来绿色低碳的生活方式提供了新的可能性。发光真菌中的荧光素酶可催化荧光素水解发出荧光,科学家从真菌中提取与发光有关的基因构建出真菌生物发光途径表达载体(FBP),成功导入烟草细胞后获得了能释放微弱绿色荧光的发光烟草,在此基础上又通过在FBP中引入BnC3’H1基因和AnNPGA基因,构建出基因表达载体eFBP,成功获得了发光增强的烟草植株。______ 。
(2)图乙为研究人员构建的eFBP的一部分,图中HPT基因能够编码潮霉素磷酸转移酶,该酶可以消除潮霉素(一种抗生素)的作用,据此推测HPT基因在eFBP中的作用是______ 。为防止HPT基因扩散给生态环境带来安全隐患,研究人员采取在eFBP中添加Cre/loxP重组酶系统的方式敲除HPT基因,其机理是:当待敲除基因的两端存在同向loxP序列时,Cre重组酶(由Cre基因控制合成)可以识别并结合到loxP序列的特定区域,使loxP序列特定位点的______ (填化学键)断开。此时图示eFBP会形成______ 个黏性末端,敲除下来的基因片段因形成______ (填“线状”或“环状”)结构失去活性,剩余序列在______ 酶的作用下正常连接,从而实现两个loxP序列间所有基因的敲除。试结合图乙阐明Cre/loxP重组酶系统能有效防止HPT基因随花粉扩散造成生物安全隐患的原理______ 。
(3)研究人员利用农杆菌转化法获取发光增强的转基因烟草时,需将eFBP插入到质粒的______ 中;在评估转基因烟草中外源基因的遗传稳定性时发现部分发光烟草自交后代出现了较多不发光的烟草,可能的原因是______ (答出1点即可)。
(1)咖啡酸是植物体内常见的代谢产物,在FBP控制合成的相关酶的催化作用下,咖啡酸能转化成牛奶树碱进而转化成荧光素。研究人员分别用含FBP和eFBP的农杆菌溶液浸润烟草叶片48小时,检测叶片中咖啡酸和牛奶树碱的含量如下图甲所示。据图推测,eFBP使烟草发光增强的机理是
(2)图乙为研究人员构建的eFBP的一部分,图中HPT基因能够编码潮霉素磷酸转移酶,该酶可以消除潮霉素(一种抗生素)的作用,据此推测HPT基因在eFBP中的作用是
(3)研究人员利用农杆菌转化法获取发光增强的转基因烟草时,需将eFBP插入到质粒的
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【推荐3】有种被称为“黑寡妇”的蜘蛛吐出的丝比已知的任何蛛丝的强度都高,用这种蜘蛛丝织成的布比制造防弹背心所用的纤维的强度还高得多。科学家们把“黑寡妇”蜘蛛体内产生的蜘蛛丝蛋白的基因,巧妙地移植到山羊受精卵的细胞核内,培育出转基因“蜘蛛羊”乳腺生物反应器,并用相应的技术获得了坚韧程度极强的蜘蛛丝蛋白,科学家给这种物质取名叫“生物钢”。其过程如下,请回答下列问题:
(1)通过过程①获得的蜘蛛丝蛋白基因可以利用__________ 技术进行大量的扩增,扩增时需要设计相应的引物,引物设计的依据是____________________ 。
(2)过程②科学家通过___________ 方法将蜘蛛丝蛋白基因导入山羊的受精卵中,并需要筛选性染色体组成为__________ 的受精卵进行培养,过程④还必须经过早期胚胎培养、___________ 等胚胎工程的技术手段,进而培育出转基因“蜘蛛羊”乳腺生物反应器。
(3)基因工程操作的的核心步骤是_________ ,其目的是_________________ ,并且可以遗传给下一代。为此,需要在蜘蛛丝蛋白基因的上游加上启动子,对该启动子的要求是________________________ 。
(4)转基因“蜘蛛羊”乳腺生物反应器生产的“生物钢”坚韧程度极强,可替代高强度包装塑料和商业用渔网,请从环境保护的角度考虑其优点是______________________________ 。
(1)通过过程①获得的蜘蛛丝蛋白基因可以利用
(2)过程②科学家通过
(3)基因工程操作的的核心步骤是
(4)转基因“蜘蛛羊”乳腺生物反应器生产的“生物钢”坚韧程度极强,可替代高强度包装塑料和商业用渔网,请从环境保护的角度考虑其优点是
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【推荐1】γ射线照射可诱导大豆发生基因突变和染色体变异,是构建大豆突变体库 常用的诱变方法。研究者在大豆突变体库中筛选出叶皱缩型的纯合突变体甲,并对其 展开研究。
(1)以突变体甲与野生型大豆为亲本,进行正反交获得 F1 。采用特异性引物对两亲本基 因组 DNA 进行 PCR 扩增,电泳后得到两亲本的差异性条带,可用于杂种植株的鉴定。
下图是用该引物对双亲及 F1 植株(记为 1-10)基因组进行 PCR 扩增后电泳的结果。
据结果判断,1~ 10 中____________________ 是杂交成功获得的 F1 植株。F1 中出现其 它植株的原因可能是______________________________________________________ 。
(2)研究发现突变体甲是 7 号染色体片段缺失导致的。预测该缺失范围内有 6 个基因(记 为基因 1~6)最有可能与甲的叶皱缩有关,而这 6 个基因在 8 号染色体上均有功能类 似的基因(记为基因 1' ~6' )。为确定基因 1~6 中与甲的叶皱缩直接相关的基因, 研究者从野生型___________ 细胞中提取总 RNA,经___________ 过程获得__________ 作为 PCR 模板,根据上述基因设计引物进行扩增。结果发现只扩增出基因 1~4,以 及基因 1'、3' 、5' 、6' ,故锁定基因____________ 作为重点研究对象,后命名为基因 P 和基因 Q。
(3)研究者将同为叶皱缩表型的突变体乙与突变体甲杂交,子代均表现为叶皱缩,说明 突变体乙与突变体甲的突变位点是____________ (填“相同”或“不同”)的。进一步 对突变体乙的基因测序,发现仅有基因Q 发生突变。请简要说出进一步证实基因Q 与 叶片正常发育直接相关的实验思路: ________________________________ 。
(1)以突变体甲与野生型大豆为亲本,进行正反交获得 F1 。采用特异性引物对两亲本基 因组 DNA 进行 PCR 扩增,电泳后得到两亲本的差异性条带,可用于杂种植株的鉴定。
下图是用该引物对双亲及 F1 植株(记为 1-10)基因组进行 PCR 扩增后电泳的结果。
据结果判断,1~ 10 中
(2)研究发现突变体甲是 7 号染色体片段缺失导致的。预测该缺失范围内有 6 个基因(记 为基因 1~6)最有可能与甲的叶皱缩有关,而这 6 个基因在 8 号染色体上均有功能类 似的基因(记为基因 1' ~6' )。为确定基因 1~6 中与甲的叶皱缩直接相关的基因, 研究者从野生型
(3)研究者将同为叶皱缩表型的突变体乙与突变体甲杂交,子代均表现为叶皱缩,说明 突变体乙与突变体甲的突变位点是
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【推荐2】自然界中某些细菌可通过代谢将原油转化为稳定无害的终产物,科学家为获得能有效修 复原油污染土壤的工程菌展开相关研究。
(1)获得能降解原油的目标菌可从____ 中取样,样品经无菌水稀释后涂布于以原油为唯一碳源的固体培养基上培养,分离纯化后获得目标菌 A。
(2)假单胞菌遭受环境压力时,会分泌大量胞外复合物将自身包裹于其中形成细菌聚集模样物(生物被膜)。目标菌 A 成膜性差,不能有效控制原油向深层土壤渗透。研究人员将假单胞菌的 bdlA 基因(约 1300bp)导入目标菌 A 体内,尝试构建成膜性好的工程菌。
①假单胞菌在遭受环境压力时形成的休眠体叫做___ 。
A.孢子 B.芽孢 C.荚膜 D.囊泡
②图 1 为 pX 系列质粒构建的重组质粒模式图,为确认是否获得重组 DNA 分子, 可选用限制酶___ 对重组质粒切割,并对酶切产物及重组质粒进行凝胶电泳检测,结果如图2。据图可初步判断重组质粒构建成功,依据是_____ 。
(3)上述方法获得的两种工程菌命名为 KT2 和 KT5,在不同时间测定实验组及对照组_____ 的生物被膜总量相对值,结果如图 3 所示。请描述实验结果_____ 。
(1)获得能降解原油的目标菌可从
(2)假单胞菌遭受环境压力时,会分泌大量胞外复合物将自身包裹于其中形成细菌聚集模样物(生物被膜)。目标菌 A 成膜性差,不能有效控制原油向深层土壤渗透。研究人员将假单胞菌的 bdlA 基因(约 1300bp)导入目标菌 A 体内,尝试构建成膜性好的工程菌。
①假单胞菌在遭受环境压力时形成的休眠体叫做
A.孢子 B.芽孢 C.荚膜 D.囊泡
②图 1 为 pX 系列质粒构建的重组质粒模式图,为确认是否获得重组 DNA 分子, 可选用限制酶
(3)上述方法获得的两种工程菌命名为 KT2 和 KT5,在不同时间测定实验组及对照组
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解题方法
【推荐3】将野生型谷氨酸棒状杆菌利用同源重组(将外源目的基因与受体的同源序列交换)的方法敲除葡萄糖转运系统关键酶基因ptsG,可以实现葡萄糖转运阻断,为分子水平研究葡萄糖转运提供参考。ptsG基因敲除质粒构建过程如图1所示,其中KanR是抗生素抗性基因,SacB是将蔗糖转变为果聚糖的基因,果聚糖积累对细菌有毒害,XhoI、EcoRI的识别序列和切割位点分别是—C↓TCGAG—、—G↓AATTC—。据此回答下列问题:_________ 轮。从引物角度分析,扩增得到上、下同源臂能拼接到一起的关键是_________ 。ptsG基因敲除质粒构建过程中,选用XhoI和EcoRI双酶切的优点是_________ 。
(2)将敲除ptsG基因质粒导入工程菌中能实现扩增。在工程菌筛选时,可分别接种到含卡那霉素培养基、含10%蔗糖培养基,_________ (填“仅能在含卡那霉素”“仅能在含10%蔗糖”或“两种”)培养基上生长的为目的菌。
(3)将筛选得到的敲除ptsG基因质粒导入野生型容氨酸棒状杆菌,通过两次同源重组可敲除ptsG基因(如图2)。
①两次同源重组共有_________ 个磷酸二酯键的断裂(或合成)。验证同源重组是否成功,可以设计特定的引物进行PCR,通常将扩增产物利用_________ 方法鉴定。
②若从细胞水平上证明谷氨酸棒状杆菌的ptsG基因敲除成功,还需要将该菌和野生型谷氨酸棒状杆菌分别培养在以葡萄糖为唯一碳源的_________ 培养基上,该菌对葡萄糖的利用率明显比野生型菌_________ 。
(1)图1中利用PCR获得上同源臂或下同源臂区段至少需要扩增
(2)将敲除ptsG基因质粒导入工程菌中能实现扩增。在工程菌筛选时,可分别接种到含卡那霉素培养基、含10%蔗糖培养基,
(3)将筛选得到的敲除ptsG基因质粒导入野生型容氨酸棒状杆菌,通过两次同源重组可敲除ptsG基因(如图2)。
①两次同源重组共有
②若从细胞水平上证明谷氨酸棒状杆菌的ptsG基因敲除成功,还需要将该菌和野生型谷氨酸棒状杆菌分别培养在以葡萄糖为唯一碳源的
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