【推荐1】研究人员利用小鼠的单倍体ES细胞（只有一个染色体组），成功培育出转基因小鼠，其主要技术流程如图所示：

注：I、Ⅱ、Ⅲ、IV代表四种限制酶，箭头指向的位置为限制酶的切割位置；Amp^r是氨苄青霉素抗性基因，Neo^r是G418抗性基因。
(1)对目的基因进行PCR扩增需要经历变性、复性、延伸三个阶段，其中延伸阶段需要加热至70～75℃，在该温度范围内___酶的活性较高。除了该酶外，PCR扩增还需要的条件有模板DNA、___和dNTP（N代表A、T、G、C）等。
(2)一定浓度的G418能有效杀死不具有Neo^r的小鼠细胞，而氨苄青霉素不能有效杀死小鼠细胞，据此推测，图中③处的培养液应添加___（填“氨苄青霉素”或“G418”）。研究人员选用I和Ⅱ两种限制酶切割目的基因和质粒，而未使用Ⅲ、IV，原因是___。
(3)人工处理形成的细胞乙与___类似，应用早期胚胎培养技术，可以使其发育成桑椹胚。此时，胚胎是否已经孵化?___（填“是”或“否”）。

【推荐2】为提高油菜（双子叶植物，油料作物）的光合效率和产量，科研工作者构建了携带SB-Pase基因（编码参与卡尔文循环的关键酶）的表达载体（如图），通过基因工程对油菜进行遗传改造。回答下列问题：

(1)获取SBPase基因后利用PCR技术进行扩增，该技术的原理是___；得到扩增产物后一般可通过___方法来鉴定；鉴定后回收其中包含SBPase基因的DNA片段，然后使用限制酶切割___；再加入DNA连接酶，最终获得重组质粒再将其导入农杆菌中。
(2)将含有重组质粒的农杆菌与油菜叶片共培养一段时间后，将叶肉细胞放在含有___的培养基中进行筛选，转化成功的叶肉细胞基因组中能检测到SBPase基因的原因是___。
(3)将转化成功的油菜叶肉细胞培育成完整油菜苗的过程需要经过___两个阶段，调节各阶段的关键植物激素是___。
(4)提取转基因油菜苗叶片的总RNA，将RNA逆转录成cDNA，再以cDNA为模板，利用SBPase基因的引物进行PCR检测，检测结果可以说明___。

【推荐3】毕赤酵母（能以甲醇为唯一碳源）可作为生产抗原蛋白的工程菌。研究人员以pPIC9K质粒为载体，构建含乙型肝炎病毒表面抗原蛋白基因HBsAg的重组质粒，酶切后导入毕赤酵母，经同源重组整合到其染色体DNA上并实现复制与表达，部分过程如下图。其中5'AOX1为AOX1基因启动子（一种甲醇诱导型启动子），3'AOX1（TT）为AOX1基因终止子，3'AOX1为AOX1基因的部分序列（同源重组的重要位点之一），Bg1Ⅱ、SacⅠ、SnaBⅠ和AyrⅡ为限制酶酶切位点，HBsAg基因中“→”表示基因转录方向。回答下列问题。

(1)过程①PCR除需要加入Taq酶、dNTP、缓冲液、Mg²⁺外，还需加入___和___。
(2)为了后续将目的基因定向插入质粒，在进行过程①时应在HBsAg基因两侧的A和B端分别添加的碱基序列是___、___。
(3)过程③需用一定浓度的___处理大肠杆菌使其成为感受态细胞，将重组质粒导入大肠杆菌的目的是___。
(4)若用限制酶SnaBⅠ、Bg1Ⅱ联合酶切pPIC9K质粒，获得的DNA片段的长度分别是38kb、27kb、67kb，用限制酶BgⅢ、AvrⅡ联合酶切pPIC9K质粒，得到的DNA片段的长度分别是38kb、40kb、54kb：已知HBsAg基因长度是55kb。则过程⑤应选用的限制酶是___，获得的重组DNA的长度为___。
(5)转化的酵母菌需在培养基中加入甲醇，其目的是___。

【推荐1】下图为“乙肝基因工程疫苗”生产过程图解，质粒上箭头所指部位为相应的限制酶的切割位点。质粒中lacZ基因编码产生的酶可以分解培养基中的X－gal，产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。请回答下列问题：
   
回答下列问题。
(1)过程①选用限制酶的最佳方案是________。

A．只有BamHI

B．BamHI和EcoRI

C．EcoRV和BamHI

D．EcoRV和EcoRI

(2)构建基因表达载体时，一般将目的基因插在启动子和终止子之间。启动子的作用是_____________。
(3)过程②需要先将大肠杆菌用___________处理。
(4)为了筛选含目的基因表达载体的大肠杆菌，可在培养大肠杆菌的通用培养基中额外加入__________，培养一段时间后挑选出____________（填“蓝色”或“白色”）的菌落进一步培养，从而获得大量目的菌。
(5)目的基因导入受体细胞后，常用___________技术检测目的基因是否翻译出乙肝病毒外壳。

【推荐3】利用基因工程技术培育马铃薯新品种，目前已经取得丰硕成果。请根据教材所学知识回答下列问题：
（1）马铃薯是双子叶植物，常用_____________(方法)将目的基因导入马铃薯受体细胞中。构建好的基因表达载体基本结构包括目的基因、标记基因、_________、_________、__________等五部分。
（2）科学家还培育出抗除草剂的转基因马铃薯，其设计方法:修饰除草剂作用的靶蛋白，使其对除草剂_________（填“敏感”或“不敏感”）,或使靶蛋白过量表达，植物吸收除草剂后仍能____________。
（3）马铃薯易患多种疾病，导致其产量不高。通过导入抗病基因并使其表达可以提高马钤薯产量，基因工程中使用最多的抗病基因是____________和病毒的复制酶基因。
（4）将目的基因导入受体细胞后，还需对转基因植物进行_________________。

【推荐1】玉米是重要的粮食作物、饲料和工业原料，虫害是造成玉米产量损失的重要因素。随着转基因技术的发展，转Bt基因抗虫玉米对有效防治玉米害虫具有重要作用。回答下列问题：
(1)BtcrylAh基因是从苏云金杆菌BT8菌株中克隆获得的。研究人员PCR扩增Btcry1Ah基因时，扩增条件为94℃5min→94℃20s→54℃20s→72℃50s；35个循环：72℃5min。
①在上述PCR扩增过程中不需要添加解旋酶，这是因为______________。
②扩增过程中将温度降低至54℃，该步骤称为______________。
(2)获取BtcryIAh基因后，研究人员设计了如图1所示的实验。

Ⅰ．图1中步骤①需要用到的酶是______________，将BtcrylAh基因导入玉米细胞中的常用方法是______________。
Ⅱ．步骤③中，将BtcrylAh基因表达载体导入玉米细胞后，诱导玉米细胞形成愈伤组织的过程中需要添加的植物激素是______________。后续将愈伤组织培养为幼苗（步骤④⑤⑥）后需要进行照光培养，其目的是______________。
(3)研究人员通过一系列实验，获得转基因玉米HGK60。为检测转基因玉米HGK60的遗传特性，研究人员让其杂交获得3种品系：HGK60（甲）、HGK60（乙）、HGK60（丙）。研究人员对转基因玉米和非转基因玉米进行了基因检测，发现非转基因玉米中无BtcrylAh基因，三种品系均含有Btcry1Ah基因。进一步检测Btcry1Ah蛋白的表达情况，结果如图2所示。

注：图中黑色条带为抗原一抗体杂交带，表示相应蛋白质的存在，M泳道条带为相应标准蛋白所在位置。
根据以上信息分析，该检测结果说明______________。

【推荐2】.某重点实验室课题研究组欲将一株野生杂草的抗病基因转给一双子叶农作物。该农作物含有高茎基因，植株过高容易倒伏，科学家欲通过基因工程操作抑制该基因表达。基于上述目的科学家进行了基因工程及其相关操作，结合所学知识分析下列问题：
（1）课题组已经获得了抗性基因，欲体外大量扩增该目的基因需采用_________技术， 该技术的基本反应过程包括_____、_____、_____。
（2）该基因工程操作的核心是_____，本研究中，欲将目的基因转入受体细 胞，常采用_____方法。
（3）科学家将高茎基因的_____基因转入受体细胞，该基因产生的 mRNA 能够同 高茎基因转录出的 mRNA 互补结合，形成_____，抑制了该基因的表达。

【推荐1】下面几幅图与基因工程有关。图1为限制酶EcoR I的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示质粒。请回答下列问题：

(l)获得图l中目的基因的方法除PCR技术外，还有____。
(2)采用PCR扩增目的基因的原理是___，图2中A、B、C、D4种单链DNA片段中，有___两种引物(DNA复制方向由3'-5')。
(3)图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述错误的是____（填下列字母，不定项）。
a．该片段的基本骨架由脱氧核糖与磷酸交替连接而成
b．该片段含A-T碱基对比较多，故其结构比较稳定
c．若利用PCR扩增该片段，则需解旋酶将①氢键全部解开
d．若该目的基因复制6次，则需要碱基A的数量是252个
(4)在构建目的基因表达载体时，用Pst I、EcoR I两种酶同时切割目的基因和质粒，是为了防止一种酶切割时产生____，从图2切割下目的基因需要消耗 ____个水分子。不选用限制酶Pst I和HindⅢ同时对质粒和目的基因进行切割的原因是_____。如果大肠杆菌是受体细胞，为使重组质粒较易导入大肠杆菌，需先用____处理大肠杆菌。

【推荐2】GFP是水母体内存在的能发绿色荧光的一种蛋白。科研人员以GFP基因为材料，利用基因工程技术获得了能发其他颜色荧光的蛋白，丰富了荧光蛋白的颜色种类。回答下列问题。
(1)构建突变基因文库，科研人员将GFP基因的不同突变基因分别插入载体，并转入大肠杆菌制备出GFP基因的突变基因文库。通常，基因文库是指_______。
(2)构建目的基因表达载体。科研人员从构建的GFP突变基因文库中提取目的基因（均为突变基因）构建表达载体，其模式图如下所示（箭头为GFP突变基因的转录方向）。图中①为_______；②为_______，其作用是_______；图中氨苄青霉素抗性基因是一种标记基因，其作用是_______。

   

(3)目的基因的表达。科研人员将构建好的表达载体导入大肠杆菌中进行表达，发现大肠杆菌有的发绿色荧光，有的发黄色荧光，有的不发荧光。请从密码子特点的角度分析，发绿色荧光的可能原因是_______（答出1点即可）。
(4)新蛋白与突变基因的关联性分析。将上述发黄色荧光的大肠杆菌分离纯化后，对其所含的GFP突变基因进行测序，发现其碱基序列与GFP基因的不同，将该GFP突变基因命名为YFP基因（黄色荧光蛋白基因）。若要通过基因工程的方法探究YFP基因能否在真核细胞中表达，实验思路是_______。

【推荐3】下图为抗除草剂基因和质粒的结构示意图，科研人员将抗除草剂基因导入玉米细胞，获得了抗除草剂玉米。
        
(1)在质粒上，启动子的作用是______，图中质粒未标出的必需元件是______。
(2)用PCR技术扩增抗除草剂基因时，需在引物1上设计限制酶的酶切位点，即______，抗除草剂基因的________链为转录的模板链。
(3)在构建抗除草剂基因表达载体时，为将抗除草剂基因正向连接在质粒上需要双酶切，用于切割质粒的限制酶是______，不选择MboI的理由是______。
(4)在分子水平上，检测抗除草剂基因是否导入玉米基因组的方法有_______（答出两种）。在个体水平上，检测转抗除草剂基因玉米是否成功的方法是_______。