【推荐1】几丁质酶可以催化真菌细胞壁的重要成分——几丁质的水解，从而抑制真菌的生长繁殖，提高植物的抗真菌能力。通过基因工程将几丁质酶基因转入杨树体内，可增强其抵抗真菌的能力。回答下列问题：

(1)为了便于目的基因与Ti质粒的连接，在利用PCR技术扩增目的基因时，需要在引物的____端（填“5”或“3”）增加特定的限制酶切割位点。在两种引物上增加不同限制酶识别序列的主要目的是____（答出两点即可）。
(2)受体农杆菌细胞在导入重组Ti质粒前，需要先用Ca²⁺处理，其目的是____。形成的重组Ti质粒需要先导入农杆菌细胞，再侵染杨树的愈伤组织，理由是____。
(3)外植体（幼嫩的茎段）经过_____形成愈伤组织。在愈伤组织形成的过程中，导致外植体被污染的原因可能是____（答出一点即可）。
(4)目的基因进入受体细胞后，是否稳定维持和表达其遗传特性，首先需要通过分子水平的检测，其次，还需要进行____水平的鉴定。

【推荐3】甘蔗田中喷洒含草铵膦的除草剂，除去杂草的同时也会损伤甘蔗植株。为解决这一难题，某科研团队利用农杆菌转化法将抗草铵膦基因Bar导入甘蔗细胞，获得转基因甘蔗植株，主要过程如下图所示。

   

回答下列问题；
(1)③过程中筛选后的农杆菌需接种到液体培养基振荡培养一段时间，其目的是__________。
(2)选用生长良好的甘蔗顶端幼叶作为外植体，经__________（填“灭菌”或“消毒”）后，切成薄片接种于培养基上诱导出愈伤组织，通过调节培养基中__________，来诱导愈伤组织生芽、生根，获得甘蔗幼苗。
(3)可以用PCR技术检测甘蔗幼苗中是否成功导入了Bar基因。提取甘蔗幼苗的DNA进行PCR扩增，扩增结果用__________鉴定，结果如下图所示。推测阳性对照组（CK+）和阴性对照组（CK-）PCR反应体系的区别是____________。有同学认为除了4、11和16号植株外其他植株都是抗草铵膦植株，你是否同意该观点并请说明理由__________。

          

【推荐1】转基因生物现已成为人们争论的焦点之一，转基因奶牛和转基因抗虫水稻就是其中的典型例子。其获得过程如下，请回答相关问题：

（1）A→B→C为转基因奶牛的培育过程，其中A表示__________。②过程常用的方法是__________。其中④用到的主要胚胎工程技术有__________。
（2）A→B→D为转基因水稻的培育过程，在构建重组质粒B过程中，目的基因的两端还必须有________和终止子；用含重组质粒的土壤农杆菌感染水稻细胞后，采用__________技术检测转基因水稻的染色体的DNA上是否插入了目的基因；若要确定BT毒蛋白基因导入受体细胞后，是否能稳定遗传并表达，写出在个体水平上的鉴定过程：_____________________________。
（3）⑤过程所用的现代生物技术称为____________________，水稻受体细胞通过⑤过程，能形成水稻植株的根本原因是此细胞具有______________________。

【推荐2】将苏云金芽孢杆菌Bt毒蛋白基因导入棉花细胞中，可获得转基因抗虫棉，其过程如图所示：

（1）过程①所需要的酶是____________，卡那霉素抗性基因的作用是_______________________。
（2）过程③将棉花细胞与农杆菌混合后共同培养，旨在让重组Ti质粒上的__________________转移进入棉花细胞，并整合到棉花细胞的___________上。
（3）若要检测转基因棉花细胞中Bt毒蛋白基因是否转录出了mRNA,采用________________________技术，用_______________做探针；若要鉴定转基因棉花是否被赋予抗虫特性，需要做____________实验。
（4）种植转基因抗虫棉可以大大减少_____________的使用，以减轻环境污染。

【推荐1】β—1，3葡聚糖酶可以水解许多病原真菌细胞壁外层的β—1，3葡聚糖和几丁质，降解真菌细胞壁，从而抑制真菌的生长与繁殖。研究人员在植物中克隆到β—1，3葡聚糖酶基因（BG2）并转入苹果主栽品种，以减少苹果真菌病害、实现无公害生产。下图为利用PATC940（经农杆菌Ti质粒改造获得）构建BG2抗病质粒的过程。回答下列问题：

(1)图中Xba I酶切后的末端与Spe I酶切后的末端能连接是因为__________。
(2)研究人员将转入BG2抗病质粒的农杆菌与苹果外植体共培养，该过程称为___________。目的基因BG2将随着___________转移到被侵染的细胞，并随其整合到该细胞的___________上。
(3)在完成遗传转化后，选择培养基中至少要加入两种抗生素，推测其作用分别是：一种用于___________，另一种用于___________。
(4)需要不断观察和检测转基因苹果植株在田间的生长状态，以确定目的基因是否赋予了苹果植株___________。

【推荐2】1965年中国科学家人工合成了具有生物活性的结晶牛胰岛素，摘取了人工合成蛋白质的桂冠。人胰岛素基因表达的最初产物是一条肽链构成的前胰岛素原，经下图1所示的过程形成具生物活性的胰岛素。此后科学家又提出了利用基因工程改造大肠杆菌生产人胰岛素的两种方法：AB法是根据胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列人工合成两种DNA片段，利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素；BCA法是利用胰岛B细胞中的mRNA得到胰岛素基因，表达出胰岛素原后再用特定酶切掉C肽段。这两种方法使用同一种质粒作为载体。请据下图分析并回答下列问题：

(1)在人体胰岛B细胞内，图1中前胰岛素原形成具生物活性的胰岛素过程中参与的细胞器有__________。
(2)由于密码子具有______，AB法中人工合成的两种DNA片段均有多种可能的序列。____（填“AB”、“BCA”或“AB和BCA”）法获取的目的基因中不含人胰岛素基因启动子。
(3)图2是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。为使目的基因与载体正确连接，在设计PCR引物时可添加限制酶__________的识别序列。通过上述方法获得人的胰岛素基因后，需要通过PCR技术进行扩增，已知胰岛素基因左端①处的碱基序列为-CCTTTCAGCTCA-，则其中一种引物设计的序列是5’______3’。
(4)对重组表达载体进行酶切鉴定，若选择限制酶SalⅠ，最多能获得__________种大小不同的DNA片段。
(5)β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。经Ca²⁺处理的大肠杆菌与重组质粒混合培养一段时间后，采用__________法将大肠杆菌接种到添加了__________的培养基上筛选出__________色的菌落即为工程菌种。
(6)科学家利用蛋白质工程技术，研制出了赖脯胰岛素，与天然胰岛素相比，其皮下注射后易吸收、起效快。获得赖脯胰岛素基因的途径是：从预期的蛋白质功能出发→__________→推测应有的氨基酸序列→找到相对应的脱氧核苷酸序列。

【推荐3】利用动物乳腺生产产品的技术称为动物乳腺反应器技术。2005年山东省青岛“崂山奶山羊乳腺生物反应器的研制”项目通过鉴定，该项目生产的药用蛋白具有表达效率高、成本低、安全性高、易于分离纯化的优点，可产生乙肝表面抗原及抗凝血酶Ⅲ等医药产品，造福人类健康。下图为利用生物技术获得生物这一新品种和抗虫棉的过程，据图回答：

（1）在基因工程中，A表示_____，如果直接从苏云金杆菌中获得抗虫基因，①过程使用的酶区别于其他酶的特点是__________。
（2）在研究过程中，研究人员首先从相关基因组中获取了目的基因，并采用_____技术对目的基因进行了扩增，然后将目的基因与质粒等载体组合形成了重组载体。在重组载体的构建过程中需要的工具酶有_____、_____。
（3）基因工程的四个基本操作步骤是目的基因的获取、_____、将目的基因导入受体细胞和_____。若要获得的转基因山羊分泌的乳汁中含有人抗凝血酶Ⅲ，则所构建的基因表达载体必须包括：某种山羊_____及其启动子、终止子、标记基因、_____和复制原点等。
（4）将目的基因导入受体细胞的过程中，在③过程中一般是采用_____方法，但我国科学家独创了_____获得转基因抗虫棉，在②过程中一般采用_____方法，受体细胞一般是_____。
（5）由于转基因表达产物存在于山羊的乳汁中，检测其体内是否出现药用蛋白，在分子水平上的检测方法及结果是什么？
检测方法是：从转基因山羊的乳汁中提取_____，用_____；
预测结果是：如果出现杂交带，表明_____。
（6）要确定目的的基因（抗虫基因）导入棉花细胞后，是否能稳定遗传并表达，需进行检测和鉴定工作，请写出在个体水平上的鉴定过程：_____。
（7）将目的基因导入受体细胞，需要构建基因表达载体，目的是__________。