【推荐2】回答下列（一）、（二）小题。
（一）回答酿酒有关的问题：
(1)酿酒酵母不能直接利用糯米中的淀粉进行酒精发酵，需要在 _____、_____、_____三种淀粉酶的作用下将淀粉水解成葡萄糖。这些酶主要由酒曲中的 _____等微生物分泌。
(2)酒精发酵产生的CO₂释放到发酵瓶中，酵母菌在发酵液中慢慢下沉，CO₂的上升带动了酵母菌上下浮动，使 _____，发酵作用更充分更彻底。影响发酵时间长短的主要因素，除了温度、溶氧量、pH等环境因素和杂菌外，还有 _____（写出两点即可）。
(3)已知葡萄糖与DNS（二硝基水杨酸）试剂能产生显色反应，采用 _____法测定酒中葡萄糖含量。将样品稀释10倍，取1mL加DNS后定容至15mL，用装有待测液的比色杯的 _____（A/B/C）面对准比色计的光源，测得光密度值为0.49。根据如图的标准曲线，可知样品中的葡萄糖浓度为 _____mg/mL。


（二）水母体内含有绿色荧光蛋白，拟利用转基因技术将水母的绿色荧光蛋白基因转入矮牵牛中培育绿色荧光矮牵牛。请回答下列相关问题：
(4)将水母细胞破碎后提取_____，在逆转录酶的作用下形成单链互补DNA，然后利用PCR技术扩增，再与pBIN质粒连接形成重组质粒，并导入大肠杆菌构建成_____。将文库中的大肠杆菌进行单菌落分离后，选择具有_____的菌落，进 而获得目的基因。
(5)野生pBIN质粒不能将其上的DNA片段整合到植物细胞的染色体DNA上，因此需对野生pBIN质粒进行_____的改造。在构建重组质粒时，选用HindⅢ＋XbaⅠ联合酶切的目的是_____。
(6)若利用农杆菌转化法进行矮牵牛的活体目的基因导入，通常需对叶片、子叶等感染部位进行损伤处理。若将农杆菌菌液加在未进行损伤处理的腋芽处，也可完成转化，原因是_____。植物组织完成转化后常用抗生素进行除菌，选用抗生素种类时需要考虑_____。抗生素的使用也会对外植体产生一定的毒害作用。如果选用发根农杆菌介导目的基因导入 的同时会引起外植体产生大量的不定根，选择不定根的_____进行继代培养2～3次就可在不使用抗生素的情况下获得无菌苗。

【推荐1】利用基因工程技术培育出油脂高产的四尾栅藻，是获取生物柴油的新途径。科学家欲从紫苏中提取DGAT1基因（催化油脂合成的关键酶基因），导入到四尾栅藻细胞，获得转基因油脂高产的四尾栅藻，流程如图。质粒pCAMBIA与PCR扩增出的DGAT1的酶切位点如图所示。现有BamHI、BglⅡ、EcoRI三种限制性内切核酸酶，它们识别并切割的碱基序列如下表，请回答下列问题：

BamHⅠ	5＇G↓GATCC3＇
BglⅡ	5＇A↓GATCT3＇
EcoRⅠ	5＇G↓AATTC3＇

(1)①与②过程使用的酶分别是___________。
(2)将DGAT1与pCAMBLA分别用限制酶切割后进行连接可形成重组质粒，目的基因和质粒能连接成重组质粒的原因是____________。将重组质粒导入大肠杆菌后，可向培养基中加入___________筛选出导入质粒的大肠杆菌。
(3)筛选出的重组质粒存在DGATI基因，但DGAT1在四尾栅藻细胞中表达出的肽链不正确，原因可能是____________。为进一步筛选出符合要求的重组质粒，选用___________限制酶对不同的重组质粒进行酶切处理，得到的电泳结果如图所示，其中___________组重组质粒为所需质粒。

【推荐2】转运肽能够引导在细胞质中合成的蛋白质进入叶绿体，组装成叶绿体的完整结构，从而使植物能够顺利地进行光合作用。研究人员尝试将抗除草剂基因（抗草丁膦基因）和转运肽基因同时导入大豆细胞并获得高产量的抗除草剂转基因大豆作物。已知T-DNA上的基因在农杆菌中不能表达，而在植物细胞中能表达。回答下列问题：

(1)从抗除草剂大豆叶片中提取抗草丁膦基因的DNA过程中，加入预冷的酒精（体积分数为______）的目的是______。
(2)根据图1，应选用______和______酶对转运肽基因进行酶切，酶切后插入Ti质粒的T-DNA区，T-DNA的作用是____________。用两种限制酶切割转运肽基因的目的是____________。
(3)据图2分析，将重组后的Ti质粒导入农杆菌中，成功转化的农杆菌能在含有______的培养基中生长增殖。欲从个体水平上检测转基因大豆是否获得抗除草剂抗性，可采取的措施是____________。