【推荐1】【加试题】下列文题有关大肠杆菌的培养实验，请回答：

（1）配制培养大肠杆菌的培养基时，根据“细菌喜荤，霉菌喜素”的规律，通常在培养基中加入蛋白胨和
作为营养物质，为维持一定的渗透压，常需加入一定量的________。
（2）大肠杆菌培养和分离的实验中，在__________中进行扩大培养，培养液经________后，在LB固体培养基上进行_______ ，并将培养皿________放在恒温培养箱中培养，可以获得如图效果。 为了检测接种、培养过程是否受杂菌污染以及__________，应同时将未接种的培养基放入恒温培养箱培养。
（3）通常对获得的纯菌种可以依据________的形状、大小等特征进行初步的鉴定。
（4）关于“大肠杆菌培养和分离”的操作中，下列叙述正确的是(            )
A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖
B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上
C．为了防止污染，接种工具精火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上
（5）科学家利用转基因技术，利用大肠杆菌生产胰岛素，其过程如下图。由甲和载体乙拼接形成的丙通常称为___________，构建得到丙时必需的工具酶有___________。在此过程中，用来处理丁以增加细胞壁通透性的化学试剂是(         )

A．氯化钠                 B．氯化钙               C．次氯酸钠             D．纤维素酶

【推荐2】一次性口罩（主要成分是聚丙烯纤维）在人类在抗击“新冠”期间发挥了重要作用，丢弃的口罩如未及时处理会对环境造成污染。某研究小组为了从土壤中筛选出能够高效降解一次性口罩的细菌，进行了如图所示的实验。请回答下列问题：
   
(1)图中土壤浸出液能为微生物的生长提供的四大营养物质分别是碳源、氮源、_____和_____。
(2)如图是通过稀释涂布平板法来推测样品中的活菌数，计数的原理是当样品稀释度足够高时，________________根据图中菌落个数的结果分析，还需对稀释10⁴倍的土壤浸出液再次进行_____处理，使平板上菌落数为____________，从而保证计数结果的准确性。
(3)将分离纯化得到的不同菌种分别接种到鉴别培养基上，鉴别培养基以__________为唯一碳源，并加入了能与之结合的显色染色剂。设不同菌种的菌落面积为m，菌落周围透明圈的面积为M，选择____________的菌落，就是能高效降解一次性口罩的目的菌群。

【推荐3】临床试用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验：首先从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。
（1）从混合样品中获得某种微生物的方法通常有两种：一是利用该分离对象对某一营养物质有“嗜好”的原理，专门在培养基中加入________；二是利用该分离对象对某种抑菌物质的________，在混合培养物中加入该抑制物，纯化菌种时，应将细菌稀释或分散成______，使其长成____________。
（2）为从样本中获取致病菌菌落，可用____________法将样本接种于____________培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。
（3）为了检测该致病菌对抗生素的敏感性，可将含有抗生素的滤纸片置于平板上，培养一段时间，若含抗生素的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素________，透明圈越大的_________。

【推荐1】杨梅酸甜适中，既可直接食用，也可酿制果酒和果醋。某兴趣小组酿制杨梅酒并在杨梅酒的基础上酿制杨梅醋的简易步骤如下。回答下列问题：
第一步―制取发酵液：向杨梅汁中加入白砂糖，将糖的质量分数调至8%，灭菌冷却；
第二步酒精发酵：接种酵母菌，恒温（温度为x℃）发酵；
第三步果醋发酵：向杨梅酒中接种醋酸菌，恒温（温度为y℃）发酵。
(1)上述步骤中，x与y的大小关系为_______。
(2)第一步中发酵液常采用________法进行灭菌。灭菌后，发酵液需进行冷却处理，其目的是______。
(3)杨梅的表面一般有野生型酵母菌，第二步中仍要接种酵母菌的原因是______。
(4)该兴趣小组为了酿制口味纯正的杨梅酒和杨梅醋，先从杨梅园内的土壤中分离出优良酵母菌和醋酸菌。配制培养基的步骤是______→_______→溶化→灭菌→倒平板。往往需要在灭菌______（填“前”或“后”）调pH，这样可以降低培养基被污染的风险。可根据菌落的______（答出3点）等特征从平板上初步筛选目的菌，原因是_______。

【推荐2】产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：
(1)常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法

编号	①	②	③	④
物品	培养基	接种环	培养皿	涂布器
灭菌方法	高压蒸汽	火焰灼烧	干热	臭氧

正确的是_________（填编号）
(2)称取1. 0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经梯度稀释后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0. 1ml菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌_________个。
(3)为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行诱变育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以_________为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径_________的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。
(4)在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株_________进行后续相关研究，理由是_________.

【推荐3】【生物—生物技术实践】
乳糖酶能够催化乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，具有重要应用价值。乳糖酶的制备及固定化步骤如下：

(1)筛选产乳糖酶的微生物L时，宜用__________作为培养基中的唯一碳源。培养基中琼脂的作用是___________。从功能上讲，这种培养基属于___________。
(2)培养微生物L前，宜采用__________方法对接种环进行灭菌。
(3)纯化后的乳糖酶可用电泳法检测其分子量大小。在相同条件下，带电荷相同的蛋白质电泳速度越快，说明其分子量越___________.
(4)乳糖酶宜采用化学结合法（共价键结合法）进行固定化，可通过检测固定化乳糖酶的___________确定其应用价值。除化学结合法外，酶的固定化方法还包括___________、_____________、离子吸附法及交联法等。

【推荐1】研究发现，养殖池底泥等富含亚硝酸盐。因此，可以从养殖池底泥中分离、纯化硝化细菌，并对其进行计数。回答下列问题：
(1)制备培养基的步骤：计算→称量→溶化→调pH→灭菌→倒平板。若在“灭菌”步骤后“调pH”，则需注意的事项有___________（答出1点即可）等。
(2)从池塘底泥中分离、筛选硝化细菌时，其培养基中的氮源是___________。不能直接以牛肉膏蛋白胨培养基作为筛选硝化细菌的培养基，原因是___________。
(3)采用平板划线法接种时，所用接种工具与稀释涂布平板法所用接种工具灭菌的处理方法___________（填“相同”或“不同”）;在第一区域的基础上进行第二区域的划线操作要求是___________。若将1g池塘底泥悬浮液稀释10⁴后，各取0.1mL稀释液分别均匀涂布在3个选择培养基表面，测得菌落数的平均值为___________个，空白对照组平板上未出现菌落，则每克土壤中有硝化细菌5.4×10⁶个。
(4)分离、纯化出能高效转化亚硝酸盐的硝化细菌后，若需对菌种进行长期保存，则常用的方法是___________。将硝化细菌接种到试管的固体斜面培养基上进行临时保存的缺点是___________。

【推荐2】在石油开采过程中，利用表面活性剂可提高采收率，但化学合成表面活性剂不易降解，带来一定的环境污染。某些微生物可代谢产生生物表面活性剂，拟从含油污水中筛选耐高温、高压的产生生物表面活性剂的菌株。
(1)分离能利用石油的耐高温菌种，流程如下图。

   
①上述过程所用的培养液应如何设计？_____
②固体培养基的制备过程包括：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板，可采用____法对培养基进行灭菌。
③图中A处应采用______法进行接种。
(2)通过上述分离过程，获得16个菌株。如何从这些菌株中进一步筛选耐高压、高产生物表面活性剂的菌种？请写出基本思路：_______。
(3)为提高实验的可信度，设置了如下2个对照实验：

对照组	作用	应出现的现象
对照组1： 未接种的选择培养基	①_______	②_________
对照组2： ③________	判断选择培养基是否起到了选择作用	对照组2培养基上的菌落数④______（填“大于、小于、等于”）选择培养基上的菌落数

(4)简述产生物表面活性剂菌株在石油工业应用的生态学意义。______

【推荐3】由致病疫霉引起的晚疫病是栽培马铃薯常见病害，严重影响马铃薯的产量。沼渣有机肥是以沼渣为原料经微生物降解而制成的氨基酸有机肥。研究者希望筛选出能充分利用沼渣有机肥抑制致病疫霉的菌株。
(1)沼渣有机肥含有大量的营养物质，可为微生物提供充足的碳源和____源，从而可促进抑菌微生物的繁殖。
(2)为筛选适于在沼渣上生长且能抑制致病疫霉的菌株，研究者进行了下列实验。
①称取1克马铃薯根际土壤置于装有____的锥形瓶，制成稀释10倍的土壤稀释液，用____法接种于若干个含____的固体培养基，30℃培养2～4天。
②将上述培养基上生长的所有单菌落接种到同一个固体培养基上，培养24h后、在培养基表面均匀喷洒____悬液，30℃培养48h后对出现抑菌圈的菌落进行测量，计算每个菌落的____以表示其抑菌能力，最终筛选出菌株RC14。
(3)为检测在施用不同肥料条件下菌株RC14对马铃薯晚疫病的防治效果，研究者将盆栽马铃薯接种致病疫霉7天后进行如下处理，45天后测定发病率。结果如下表所示。

组别	处理	发病率（%）
1	施用常规化肥	73.5
2	A	64.5
3	施用含菌株RC14的常规化肥	57.5
4	施用含菌株C14的沼渣有机肥	16.5

表中A处应为____，综合上述研究及表中信息推测第4组发病率最低的原因____。

【推荐1】如图是果酒、果醋生产和筛选纤维素分解菌的过程，回答下列相关问题：

(1)果酒制作过程用到微生物来源于水果表面的酵母菌，它的新陈代谢类型是_____，发酵过程在无氧条件下进行，原因是_____。
(2)过程④发挥作用的菌种是_____；需要在_____条件下才能通过④发酵产生醋酸。
(3)为筛选尿素分解菌，将微生物稀释液接种至以_____为唯一氮源的培养基上进行培养，该培养基属于_____；配制培养基时通常加入酚红指示剂，菌落周围会呈现红色环带，这是由于尿素被分解产_____使培养基pH升高，酚红指示剂变红。

【推荐2】筛选分解尿素的细菌的选择培养基的配方如表所示，探究下列问题：

组分	含量
KH2PO4	1.4 g
Na2HPO4	2.1 g
MgSO4·7H2O	0.2 g
葡萄糖	10.0 g
尿素	1.0 g
琼脂	15.0 g
H2O	定容至1 000 mL

(1)在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？____。
(2)分离分解尿素的细菌的选择培养基是如何进行选择的？____。
(3)为什么只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长？____。

【推荐3】尿素作为主要的化肥种类之一，也是一种重要的化工原料。前处理含尿素废水的方法有3种：脲酶水解法、化学热力学水解法及微生物水解法。某研究小组欲从土壤中筛选能高效分解尿素的细菌（目标菌）。回答下列问题。
(1)给农作物过量施用尿素，随水土流失后易造成水体污染，这种现象叫水体富营养化。运用固定化酶技术处理含尿素废水时应采用_____法对脲酶进行固定化。
(2)为了筛选能分解尿素的细菌，用_____为唯一氮源的培养基选择培养，在配制培养基时需要添加KH₂PO₄和Na₂HPO₄，其作用有_____。
(3)为对分离得到的菌种作进一步的鉴定，常在固体培养基中加入酚红试剂，若菌落周围出现_____，可以初步鉴定该种细菌为目标菌，其原理是_____。
(4)对同一浓度的脲酶生产菌稀释液，分别用血细胞计数板计数和稀释涂布平板法计数，若不存在实验操作失误，则前者的数量_____（填多于、等于或小于）后者，其原因是_____。
(5)为了便于后续研究，可以采用_____方法对最佳菌种进行长期保存。