【推荐1】钙依赖蛋白激酶（CDPK）在植物的信号传导和提高植物抗性方面发挥着重要作用。科学家通过将CDPK基因导入拟南芥（双子叶植物）中，来获得具有抗性的新品种。如图为某种质粒表达载体和含CDPK基因的DNA片段示意图，图中标记了限制酶的切割位点。据此回答下列问题：

(1)通过基因工程，将CDPK基因导入拟南芥中，获得具有抗性的新品种的育种原理是__________。为了使CDPK基因插入质粒中，应选取__________（两种限制性核酸内切酶）分别切割质粒和含目的基因的DNA片段，不选取另两种限制酶的理由是__________。
(2)利用PCR可获得大量的CDPK基因，PCR反应需要加入__________酶。将CDPK基因导入拟南芥细胞通常采用的方法是__________。
(3)图中所示的T一DNA片段在转化中的作用是____________________。检测CDPK基因是否成功表达的方法是____________________，若有___________________出现，表明已产生了CDPK。

【推荐2】近年来，我国糖尿病的发病率逐年上升。研究表明，糖尿病有1型糖尿病和2型糖尿病两种类型。回答下列问题：
(1)1型糖尿病的产生可能是由于胰岛B细胞含有与某病毒抗原相似的结构，若人体感染该病毒，免疫系统在消灭病毒的同时可破坏胰岛B细胞，引起1型糖尿病，从免疫学角度分析，该种糖尿病属于______病，该类型患者可用定期注射胰岛素的方法控制血糖。胰岛素有促进_________的作用（写出一点）。
(2)大部分2型糖尿病患者的组织细胞对胰岛素的敏感性降低，称为胰岛素抵抗。胰岛素的靶细胞主要通过细胞膜上的GLUT4来摄取葡萄糖。胰岛素通过与靶细胞膜上的受体结合，调控GLUT4的储存囊泡与细胞膜融合。请结合上述研究，从两个不同角度解释出现胰岛素抵抗的原因：______________。
(3)研究发现有22种相关基因发生突变时会引起糖尿病。研究人员利用基因编辑工具CRISPR-Cas9系统建立了糖尿病模型大鼠，为研究胰岛素信号传递提供了有价值的动物模型。Cas9蛋白“切割”基因组DNA的机制如下图所示：
   
依据上图可知，通过敲除胰岛素受体底物1（Irsl）基因获得糖尿病模型大鼠的流程如下：根据已知Irsl基因的________,设计sgRNA对应的DNA片段；构建含有sgRNA对应DNA片段的表达载体和Cas9蛋白基因的表达载体；利用_______法，将上述两种表达载体的体外转录产物Cas9mRNA和sgRNA导入大鼠的_____（细胞）。

【推荐3】2020年诺贝尔化学奖授予两位在CRISPR-Cas9基因编辑方面做出了突出贡献的女科学家。CRISPR是规律间隔性成簇短回文重复序列的简称，Cas9指的CRISPR相关蛋白9，是进行DNA切割的酶的名宇。CRISPR-Cas9具有切割他类型细胞中DNA序列的潜力，可对生物的DNA序列进行修剪、切断、替换或添加。它作为基因组“编辑器”在全球数千个实验室中得到广泛应用。下图是某实验室将编辑好的人胰岛素基因入大肠杆菌时所用的载体质粒。请回答问题：

（1）研究发现CRISPR-Cas9系统广泛存在于细菌细胞内，推测该系统在细菌细胞内的作用是________________。
（2）Cas9在基因编辑过程中所起的作用是________，编辑后的基因应该插入甲载体的位点________，甲载体中的荧光素酶基因的作用是________________。
（3）在基因工程过程中可利用PCR技术对编辑后的目的基因进行大量扩增，它利用的是________的原理，扩增时通常需要在引物的________端添加相应的酶切位点，经过n轮扩增，理论上至少需要的引物数量为________________。

【推荐1】肝纤维化与肝细胞癌的发生密切相关，肝纤维化是指肝细胞外基质的病理性沉积，沉积物中型胶原蛋白是主要成分。研究发现活化的人肝星状细胞会大量合成和分泌型胶原蛋白沉积在肝小叶的窦间隙，大量产生I型胶原蛋白是肝星状细胞活化的标志之一。型胶原蛋白由α1和α2两条肽链组成，并分别由COL1Al和COLIA2编码。本研究旨在通过基因工程技术用人COLIA1启动子序列调控增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因的表达，在LX-2细胞（永生化的人肝星状细胞）中建立一个人肝星状细胞活化的可视化报告系统。
(1)研究过程中应将LX-2细胞置于含______的气体条件下培养。
(2)研究人员构建了如图1所示的基因表达载体，其中Kozak序列能增强EGFP巷因的表达，已知EGFP基因的α链为转录的模板链，则应将图2中EGFP基因的______（“A”或“B”）端与Kozak序列连接，除图1中所示元件外，基因表达载体还应具备______（至少答两点）等元件。

   

(3)使用慢病毒包装系统将基因表达载体导入LX-2细胞中，并筛选得到了荧光强度最强的细胞株（LX-2-CE）进行扩大培养用于后续研究。为验证LX-2-CE能通过EGFP表达来反映细胞表达COLIA1能力的改变，本研究选取了已知具有潜在抗肝纤维化作用的药物青蒿琥酯对LX-2-CB进行处理。实验分组中，阴性对照组为______，阳性对照组为加10μg/L的TGF-β1诱导处理的LX-2-CE，实验组为加入不同浓度青蒿琥酯与10μg/L的TGF-β1共处理的LX-2-CE。实验结束后，对各组LX-2-CE进行荧光检测。若实验组的荧光强度均_____（“低于”或“高于”）阳性对照组的荧光强度，说明LX-2-CE荧光强度的改变可以反应音蒿琥酯的潜在抗肝纤维化作用。实验中10μg/L的1TGF-β1的作用是______。
(4)系列实验结果表明，外源性COLIA1启动子调控的EGFP的表达能在一定程度上反映内源性COL1Al启动子调控的COLIA1的表达水平的变化。请你推测该人肝星状细胞活化的可视报告系统建立的意义是______。

【推荐2】科学家通过基因工程方法，将苏云金芽孢杆菌的Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞内，并成功实现了表达，从而培育出了能抗棉铃虫的棉花植株——抗虫棉。其过程大致如图所示：

（1）基因工程的操作程序中的核心步骤是：______________________________，需要的工具酶有____________________ 酶和_______________酶。
（2）Ti质粒是农杆菌中的一种质粒，其上有T­DNA，能把目的基因插入Ti质粒的T­DNA中是利用了T­DNA__________________的特点。
（3）Bt毒蛋白基因转入普通棉株细胞中并成功实现表达的过程，在基因工程中称为__________。
（4）将目的基因导入受体细胞的方法有很多种，该题中涉及的是_________________________。
（5）目的基因能否在棉株体内稳定维持和表达其遗传特性的关键是__________________，这需要通过检测才能知道，检测采用的方法是_________________________________________。

【推荐1】动物细胞培养技术是动物细胞工程的基础,动物细胞培养在当今生物制品的生产中已越来越重要。请回答下列有关的问题:
(1)动物细胞培养的过程中为了确保无菌、无毒的环境,除了对培养液和培养用具进行无菌处理外,还可以通过_______等方式防止杂菌污染。在培养液中加入适量的NaHCO₃溶液,其作用是______。使用合成培养基时,通常要加入血清、血浆等一些天然成分,其原因是________。 
(2)动物细胞培养时,将取得的动物组织块剪碎,再用胰蛋白酶处理一段时间以获得____。对动物组织块做以上处理的原因是__________________。 
(3)单克隆抗体可以借助动物细胞的培养来生产,要培养的目的细胞是_______(填“骨髓瘤细胞”“已免疫的B淋巴细胞”或“杂交瘤细胞”),其中一种细胞经多次传代培养后不能存活,原因是___。

【推荐2】瘦素是一种由脂肪组织合成和分泌的肽类激素。P载体含有的绿色荧光蛋白（GFP）基因能在真核细胞中表达GFP。将目的基因插入GFP基因后，能表达出目的蛋白和GFP的融合蛋白，根据荧光的强弱，可确定目的基因在细胞内的表达情况。为研究瘦素的功能，科学家构建了瘦素基因真核表达载体，检测疫素基因在小鼠成纤维细胞中的表达情况。瘦素基因及载体的结构如图所示。回答下列问题．

(1)PCR扩增瘦素基因时，与引物1互补的a链左侧是脱氧核苷酸链的_______（填“5”或“3”）端。据图推测，构建该基因表达载体时，载体上应有启动子、终止子、标记基因、复制原点、_______，以便与酶切后的瘦素基因正确连接。
(2)已知HindIII和BamHI在载体上的切割位点非常接近。为确定重组质粒是否构建成功，用HindIII、BamHI分别对瘦素基因PCR产物、P载体和重组质粒双酶切，再进行电泳，结果如图所示。若重组质粒构建成功，请在图中将酶切结果对应位置的条带涂黑___________。

(3)Kanr/Neor是一种抗性基因，在真核细胞中表达具有新霉素抗性，而在原核细胞中表达具有卡那霉素抗性。同种基因在真核、原核细胞中表达结果不同，可能的原因是______。本实验中为筛选转化的细胞，应在培养基中添加________________。
(4)为检测瘦素基因是否成功表达，可用的鉴定方法是______（答出2种）。为进一步获得更多能表达融合蛋白的细胞，还需要进行_________。

【推荐3】我国科学家成功突破了无法克隆灵长类动物的世界难题，首次成功培育出体细胞克隆猴中中和华华，巩固了中国科学家主导灵长类全脑介观神经连接图谱国际大科学计划的地位。培育克隆猴的流程图如下所示，请结合下图回答问题：

（1）图中灭活的仙台病毒的作用是________________________。
（2）胎猴的体细胞一般选用传代________代以内的细胞，原因是________________________。
（3）图中运用了________________（胚胎细胞核移植或体细胞核移植）技术，该技术相对难度更高，原因是________________________________________________。
（4）为了调节相关基因的表达，提高胚胎的发育率和妊娠率，将组蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA经________技术注入重构胚，发育到________________________阶段再胚胎移植，胚胎移植的实质是________________________________________________。

【推荐1】2018年11月，一对名为“露露”和“娜娜”的基因编辑婴儿的诞生引发了国内巨大的争议。基因编辑过程的实质是用特殊的引导序列将“基因剪刀--Cas9酶”精准定位到所需修饰的基因上然后进行编辑。回答下列问题：
（1）科学家用______法将特殊的引导序列与“基因剪刀--Ca9酶”导入目的细胞，上述实例中目的细胞为______。
（2）“露露”与“娜娜”其实也是试管婴儿，试管婴儿需让成熟且______的精子与成熟的卵细胞结合形成受精卵，然后进行早期胚胎培养。该时期所用培养液中含有的物质有无机盐和有机盐类、氨基酸、维生素、______、______、水和血清等。
（3）一个处于囊胚期的早期胚胎经过______技术可形成两个甚至多个胚胎，该技术操作的关键是要做到将______，若科学家想在早期胚胎时就知道“露露”的性别，可通过______实现。

【推荐2】利用基因编辑技术将病毒外壳蛋白基因导入猪细胞中，然后通过核移植技术培育基因编辑猪，可用于生产基因工程疫苗。下图为基因编辑猪培育流程，请回答下列问题：

(1)对1号猪使用___________处理，使其超数排卵，收集并选取处在___________时期的卵母细胞用于核移植，培育过程体现了___________的全能性。
(2)采集2号猪的组织块，用___________处理获得分散的成纤维细胞，放置于37℃的CO₂培养箱中培养， 其中CO₂的作用是___________。
(3)为获得更多基因编辑猪，可在胚胎移植前对胚胎进行___________。产出的基因编辑猪的性染色体来自于___________号猪。
(4)为检测病毒外壳蛋白基因是否被导入4号猪并正常表达，可采用的方法有___________（填序号）。
①DNA测序     ②染色体倍性分析     ③体细胞结构分析     ④抗原-抗体杂交