组卷网 > 高中生物综合库 > 生物技术与工程 > 基因工程 > 基因工程的基本操作程序 > 目的基因的获取 > PCR扩增的原理与过程
题型:非选择题-解答题 难度:0.65 引用次数:218 题号:18881301
金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在于动植物中具有金属结合能力的蛋白质,决定该蛋白质合成的基因结构如图1所示,其中A链为编码链、B链为模板链。科研人员利用图2所示质粒构建枣树的MT基因重组DNA分子并导入大肠杆菌细胞,获得对重金属镉(Cd)具有吸附能力和耐受能力的MT工程菌。

(注:XhoI、KpnI、PstI为不同限制酶的识别位点:LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以催化无色物质X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色,否则菌落为白色;ampr基因 为氨苄青霉素抗性基因。)回答下列问题:
(1)目的基因的筛选与获取提取枣树细胞的___,经逆转录获得 cDNA:为了使PCR扩增后的产物按照正确的方向与已被酶切的载体连接,克隆MT基因时应选择的引物组合是_____,并在其_____(填“5'”或“3'”)末端分别添加限制酶___的识别序列。
(2)基因表达载体的构建启动子是___识别并结合的部位;基因工程中构建用于原核生物的表达载体时,常用的启动子不包括以下哪一项___
A.噬菌体基因启动子
B.乳酸菌基因启动子
C.大肠杆菌基因启动子
D.枣树MT基因启动子
(3)导入、筛选和鉴定MT工程菌①将得到的混合物导入到用___处理的大肠杆菌。
②将菌液稀释并涂布在含X-gal和氨苄青霉素的培养基上进行培养后,随机挑取____的单菌落可获得MT工程菌。
③欲进一步对MT工程菌进行鉴定,可将挑取出的MT工程菌与___分别接种至含___的LB液体培养基中,置于恒温培养箱中培养,适宜时间后检测菌种数量。
(4)扩大菌种将MT工程菌接种至发酵罐内进行扩增,培养过程中可定期取样并使用___对菌体进行直接计数,以评估增殖情况。发酵结束后,采用___(答出1项即可)等方法获得所需的发酵产品。

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【推荐1】多不饱和脂肪酸(PUFAs)是人体必需脂肪酸,为解决猪肉中PUFAs含量不足的问题,研究者从线虫中获得控制PUFAs合成的必需酶基因fat1。培育转fat1基因猪,操作过程如图所示。图中GFP基因表达出绿色荧光蛋白。据图回答下列问题:

(1)用PCR技术在体外扩增目的基因时,PCR扩增仪中要加入缓冲液、目的基因、_____(至少答两点)等。
(2)从图中可知,在构建基因表达载体时,为克服目的基因自身环化(即线性DNA的末端相互连接,变圆环),以及便于目的基因与载体的连接,切割含目的基因的DNA和载体的限制酶应选用_____
(3)构建的基因表达载体中,GFP基因的作用是_____
(4)猪成纤维细胞在培养瓶中培养时,除必须保证环境是无菌、无毒外,还必须定期_____,以防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成的伤害。培养到一定程度后,需要分瓶再继续培养,分瓶后的培养过程称为_____,操作时首先用_____等处理成细胞悬液。
(5)经检测,fat1基因成功整合在猪基因组DNA后,若想获得该转基因动物,需经过胚胎移植过程,该过程需对受体进行_____处理,移植胚胎后需要对受体进行是否_____的检查。
2024-03-25更新 | 296次组卷
非选择题-解答题 | 适中 (0.65)
【推荐2】PCR技术是一项可在体外短时间内复制大量DNA片段的技术。图1表示PCR技术过程和原理,回答下列问题:

(1)①过程若发生在细胞内,称为___________,其作用是___________________________________
(2)通常情况下②过程中的两个引物核苷酸序列___________(填“相同”或“不相同”)。
(3)③过程需要____________酶,该酶和动植物体内具有同样作用的酶的最大区别是____________
(4)PCR技术和凝胶电泳技术结合,可以用于特定DNA分子的鉴定,从而可用于刑侦破案。从某案件相关人员血液中提取的DNA电泳结果如图2所示。
①DNA凝胶电泳的一般原理是核酸磷酸基团带__________电荷,在电场中可向阳极移动,不同DNA分子的___________________大小不同,在电场中迁移率不同。图2结果显示被告人___________(填“是”或“不是”)杀人犯。
②PCR技术不仅为遗传病的诊断带来了便利,而且改进了检测细菌和病毒的方法。若要检测一个人是否感染了艾滋病病毒,可以取少量血液加入PCR反应体系,其中的__________(填字母)可作为模板扩增出目的DNA。
A.白细胞DNA       B.病毒蛋白质       C.血浆抗体       D.病毒核酸
2021-01-23更新 | 471次组卷
非选择题-解答题 | 适中 (0.65)
【推荐3】近日,我国首个自主研发的抗新冠病毒抗体特效药正式问世,该药物的研制过程中用到了单克隆抗体制备技术。请回答下列相关问题:
(1)单克隆抗体制备过程中需要将B淋巴细胞和___________细胞融合形成杂交瘤细胞。该过程用到动物细胞融合技术,诱导动物细胞融合的常用方法有___________(答出两种方法即可)。
(2)为了获得杂交瘤细胞,科学家需要用特定的选择培养基进行筛选,在这种培养基上,__________细胞会死亡。杂交瘤细胞需要进一步筛选以便获得能分泌特异性抗体的细胞,此筛选依据的基本原理是__________
(3)能产生特异性抗体的杂交瘤细胞若需要扩增,可采用的方法有____________________
(4)在检测患者是否治愈时,可用RT-PCR法(一种病毒核酸检测方法)。这种方法的基本原理是先以病毒RNA为模板合成cDNA,再通过PCR技术扩增相应的DNA片段,该方法中用到的酶有___________。PCR反应一轮循环共包括__________三个步骤。
2023-03-08更新 | 178次组卷
共计 平均难度:一般