【推荐1】酸奶由牛奶经过发酵制成，口味酸甜细滑，营养丰富，深受人们喜爱，同学甲和乙在学习了传统发酵技术的应用后，在家进行了酸奶制作的实践，具体操作如下：
一、同学甲买了酸奶机（相当于恒温培养箱，能够将其内容物加热至42℃并保持恒温），按如下步骤自制酸奶：
第一步：将约1L鲜奶倒进锅里加热至沸腾，将酸奶机的内胆放在开水中煮5min。
第二步：将沸腾后的鲜奶倒入酸奶机的内胆里，然后立即加入约100mL酸奶。
第三步：盖上酸奶机盖子，让内部处于密封状态，打开电源开关。
第四步：8h后打开酸奶机盖子。
二、同学乙的具体操作步骤如下：
第一步：将瓶身、瓶盖、勺子放在锅中加热煮沸10min。
第二步：待瓶子稍冷却后向其中倒入鲜奶并加入一定量的蔗糖，再放入锅中沸水浴约10 min。
第三步：待牛奶冷却至不烫手时倒入牛奶量1/5的酸奶作“引子”，用勺子搅拌均匀，拧紧瓶盖。
第四步：将温度调至40℃，继续保温7~8h。
回答下列问题：
(1)从微生物培养角度看，鲜奶相当于培养基，同学甲和乙在鲜奶中加入酸奶相当于_____。同学甲和乙在制作酸奶时对鲜奶均采用的消毒方法是_____,而工业生产中制作酸奶时对鲜奶常采用巴氏消毒法，该方法的优点是
_____。
(2)同学乙成功制得酸奶而同学甲没有，原因是_____。
(3)同学乙在制作酸奶时，还会在鲜奶中加一定量的蔗糖，其目的是_____,该同学在第三步中拧紧瓶盖的原因是
_____。
(4)同学乙想检测自己制得的酸奶中乳酸菌1 mL的数量，将其带进实验室进行了如图所示的实验：同学乙在过程③所用的方法为_____,用该方法统计样本菌落数时，需要同时做A、B、C三个培养皿，目的是_____。实验检测时，各取0.1mL已稀释10倍酸奶分别接种到图示A、B、C培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每毫升酸奶样品中的乳酸菌数为_____个。

   

【推荐3】金黄色葡萄球菌是一种具有高度耐盐性的微生物，可引起人类肺炎、肠炎等疾病。金黄色葡萄球菌在血平板（培养基中添加适量血液〉上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色。下图为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌的操作流程，请回答相关问题。

(1)从培养过程分析，金黄色葡萄球菌的代谢类型是____________。
(2)7．5%NaCl肉汤培养基可为微生物提供的营养成分，除氮源外还有____________。氮源进入细胞后，可参与合成的多聚体有____________（答出两点即可）。用7．5%NaCl肉汤培养基进行选择培养的主要目的是________________。
(3)实验操作中，在血平板上的接种方法是____________。若取培养液1mL，稀释100倍后吸取0．1mL的稀释液，用上述接种方法接种到5个血平板上，经培养后，5个血平板上出现透明圈的菌落数分别为50、48、51、52、49，由此可知每毫升培养液中活菌的数目为____________个。
(4)在制备血平板时需将pH调节至____________（“微酸性”或“微碱性”）后灭菌，待培养基冷却后，再加入适量血液。血平板在接种金黄色葡萄球菌前，往往随机选取部分灭菌后的空白培养基先培养一段时间，这样做的目的是____________________________________________________。
(5)经多次规范操作、重复实验，血平板上均出现____________的菌落，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌。

【推荐1】酸奶和泡菜的制作都离不开乳酸菌，请回答下列有关制作酸奶和泡菜的问题：
（1）分离纯化乳酸菌的培养基中含牛肉膏，牛肉膏提供的主要营养有___________；培养皿灭菌常采用___________法；检验培养基灭菌是否合格的方法是___________。
（2）培养乳酸菌一段时间后，培养基中的pH会下降，原因是______________________。
（3）家庭制作泡菜时，一般需要配制泡菜盐水，但会因其含盐量过高而影响口感。直接接种乳酸菌制作泡菜时，产生的大量乳酸能够抑制___________，因此可以采用低盐工艺制作泡菜，从而大幅降低泡菜的含盐量。
（4）乳酸菌活菌数是衡量酸奶营养价值的一个重要指标，为检测某酸奶中乳酸菌的含量取不同稀释度的样品各1mL涂布到固体培养基上，在适宜条件下培养一段时间，统计得到10⁶、10⁷、10⁸三个稀释度的培养基上的平均菌落数依次为413个，86个、13个，据此估算，每毫升样品中的乳酸菌数约为___________个，接种乳酸菌所用的接种工具是___________。

【推荐3】随着石油危机的出现，乙醇作为可再生资源中比较理想的液态燃料正受到人们越来越多的关注。自然界中可再生的木质纤维素资源极为丰富，其主要成份之一是半纤维素。半纤维素容易被酸或者酶水解，其水解产物中的85%~90%为木糖。因此利用木糖发酵生产乙醇具有重要的用研究价值。酵母菌是传统的乙醇生产菌株，因其缺乏转化木糖的酶系而不能很好地利用木糖。自然界中某些酿酒酵母能利用木糖进行酒精发酵，某研究小组欲从土壤中分离这种酵母菌并对产酶活性进行测定，实验基本流程为：取土样→制取土壤悬液→扩大培养→选择培养→菌种分离→酶活性鉴定。回答下列问题；
(1)扩大培养又称富集培养，可增加___________，以确保能从样品中分离得到所需要的微生物。
(2)获得纯净培养物的关键是_____________。该研究小组将扩大培养后的混合菌液适当稀释后接种于___________的选择培养基，倒置放入培养箱培养。常用的接种方法有___________两种。若划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都长满了菌落，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。第二划线区域的第一条线上无菌落的原因可能是___________。
(3)为进一步确定目的菌株的最佳产酶条件，该研究小组选取培养基初始pH、培养温度、摇床转速以及装液量4个因素进行实验。其中，培养基初始pH、培养温度会影响菌株产酶主要是因为____________。摇床转速因影响___________进而影响菌株产酶。

【推荐1】 一些植物内生微生物可明显增强宿主的抗病性，以下为从菠菜叶中分离内生细菌，筛选出对菠菜枯萎病菌有拮抗作用菌株的过程。请回答下列有关问题。
(1)为筛选这些拮抗枯萎病菌的内生菌株，在实验进行前要将灭菌后的空白平板培养基先行培养一段时间，这样做的目的是 ______。研究人员将菠菜叶片放入体积分数为70%的酒精中摇动2～3次，再放入0.1%的氯化汞溶液中1～2min,取出叶片后将其放在灭菌后的空白平板上，用灭菌的镊子轻轻按压。把接触过叶片的平板置于恒温培养箱中培养48h培养基上未出现菌落，这表明 _____________________________。
(2)将上述实验中的菠菜叶研磨成汁、接种到灭菌后的空白平板上恒温培养后观察，结果平板上出现多种特征不同的菌落，请写出获得不同菌种的单菌落的思路   ______________。
(3)为鉴定上述单菌落菌株是否能拮抗枯萎病菌，研究人员在培养基中央接种菠菜枯萎病菌菌块，在周围四个点接种不同的单菌落菌株同时设置对照实验（如图）。一段时间培养后，对照平板上将 ______，而实验平板中 ______的菌株为拮抗枯萎病菌的菌株。
(4)获得拮抗枯萎病菌的菌株后，若想长期保存菌种可采用 ______的方法，与临时保藏的方法相比，这种方法除保存时间长外，还能避免 _______________________________。
   

【推荐2】富集培养主要是指利用不同微生物生命活动特点的不同，限定环境条件，使仅适应该条件的微生物旺盛生长，从而使其在群落中的数量大大增加，人们能够更容易地从自然界中分离到所需的特定微生物。如图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物——对羟基苯甲酸微生物的实验过程。回答下列问题：

(1)本实验所需培养基的碳源为_____，该碳源进入细菌细胞内的主要作用是______（答出2点即可）。
(2)培养基含有KH₂PO₄和Na₂HPO₄，其作用有______（答出2点即可）。
(3)①→③重复培养的目的是_______。
(4)培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明样品中有多种分解对羟基苯甲酸的细菌，依据是_____。⑥为_____组，设置的目的是说明通过富集培养的确得到了欲分离的目标微生物。
(5)若要测定⑦培养液中的菌体数，可在显微镜下，用_____直接计数。

【推荐3】中国是食醋酿造大国，有几千年的酿醋历史。但目前中国常用的醋酸杆菌菌株AS1.41产酸能力、酒精耐受性均有待提高。拟从醋醅中筛选高产酸、高耐酒精的醋酸菌， 过程如图1所示。


（1）试验中所用培养基均含有水、葡萄糖、酵母浸膏和酒精，其中葡萄糖可为醋酸菌的生长提供_________。配制分离培养基时，除营养物质外，还需要添加2%的碳酸钙和_____，以便观察醋酸与碳酸钙反应后菌落周围形成的透明圈。
（2）分离醋酸菌时，需将富集的醋酸菌培养液进行梯度稀释，采用_____法接种到分离平板上。30℃培养72h后，挑取透明圈_____的单菌落进行划线分离。分离出的单菌落接种到斜面培养基（含3%酒精）上并于4℃保藏。
（3）取保藏的三个菌株分别接种于发酵培养液（含5%酒精）中，30℃培养5d后测产酸量， 筛选出高产酸的醋酸杆菌J2菌株。将J2与AS1.41分别接种到含不同浓度酒精的培养液中，30℃培养24h后测定活菌数量，结果如图2。由图 2 可知，酒精可_____醋酸菌的生长。与 AS1.41 相比，J2 菌株对酒精的耐受性___________。
（4）获得 J2 菌株后，还可以采取_____的育种措施，进一步提高其酒精耐受性。
（5）筛选出 J2 菌株后，其高产酸特性的遗传是否稳定还需检测，请写出基本过程。_____

【推荐1】Ⅰ．转基因克隆猪已在我国培育成功。研究组首先从猪胚胎皮肤细胞中分离出纤维细胞，进行体外培养。通过电穿孔的方法将构建好的基因表达载体转入纤维细胞，经筛选后将转基因纤维细胞进行体细胞克隆，再将重组胚胎移入代孕母猪子宫内，最终获得转基因克隆猪。请回答：
（1）在对猪纤维细胞进行培养时，需要在细胞培养液中添加一定量的___________，以防止培养过程的污染。此外，应定期更换培养液，防止_____________对细胞自身造成危害。
（2）筛选转基因细胞时，需要用到基因表达载体中的_______________。
（3）在进行体细胞克隆前，先要从屠宰场收集猪卵巢，采集____________，并在体外培养成熟。然后将转基因纤维细胞核注入__________中，再经过一系列过程获得含有目的基因的重组胚胎。
（4）为了提高重组胚胎的利用率，可对处于__________阶段的胚胎进行均等分割，再将重组胚胎移入代孕母猪子宫中继续发育成转基因克隆猪。一般地，代孕母猪需要用激素处理处理，促使其__________以利于受孕。
Ⅱ．土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答：
（1）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有
_____________（至少答2种）。
（2）可用_______________法分离纯化得到能降解尿素的菌种。在接种活菌的过程中，要在_________旁进行操作，接种后的培养皿___________于37℃的___________中培养。
（3）用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，若培养基中存在分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的___________使PH升高，使酚红指示剂产生颜色变化，从而证明这一菌株以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力________________。

【推荐2】某生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答问题：

KH2PO4	1.4g
Na2HPO4	2.1g
MgSO4·7H2O	0.2g
葡萄糖	10g
尿素	1g
琼脂	15g
溶解后蒸馏水定容到1000mL

(1)从成分上看，表所示培养基能筛选到降解尿素的细菌的原因是_____，富集培养过程中_____（选填“需要”或“不需要”）振荡培养来提高溶氧量，原因是_____。
(2)用来筛选降解尿素的细菌的培养基含有KH₂PO₄和Na₂HPO₄，其作用有_____、_____。
(3)梯度稀释时，每个稀释梯度下要涂布至少3个平板，这样做的目的是_____，该结果往往比实际值_____（选填“偏大”或“偏小”），原因是_____。在实验中，每隔24小时统计一次菌落数目，并选取_____时的记录作为实验结果，这样可以防止因为培养时间不足遗漏菌落数目，导致统计数目偏小。
(4)分离降解尿素的细菌实验时，甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。甲同学实验结果差异的原因可能有_____（填序号）。
①取样不同   ②培养基污染   ③操作失误   ④没有设置对照
(5)为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数，各稀释倍数下降解尿素的细菌菌落数统计结果见表，其中合理的稀释倍数为_____。

稀释倍数	103	104	105	106	107
菌落数	>500	427	248	36	5

(6)上述实验过程中，关于无菌操作的叙述正确的有_____。

A．无菌操作不要求杀死培养基内的一切微生物

B．实验中用到的试管、培养皿等工具，用干热灭菌法进行灭菌

C．进行稀释涂布操作时，接种环需进行灼烧灭菌

D．实验结束后，将实验产生的废弃物进行灭菌处理

【推荐3】用葡萄、苹果等水果加工制作的果酒和果醋深得人们的喜爱。回答下列问题：
(1)参与果酒发酵的酶位于酵母菌细胞的______中，该过程的酶发挥作用的主要环境条件是______。制作果酒的过程中也需要O₂，O₂的作用是________。
(2)果酒生产过程中，酿酒残渣的堆积会积累醋酸菌，可从中筛选优良菌株。配制醋酸菌选择培养基：将适量的葡萄糖、KH₂PO₄，MgSO₄溶解并定容，_______（填编号：①先调节pH再高压蒸汽灭菌；②先高压蒸汽灭菌再调节pH），并加入一定体积的无水乙醇。选择培养：将酿酒残渣加入选择培养基振荡培养24h。取少量上述培养液涂布到含CaCO₃的培养基上于30℃培养48h，再挑取分离培养基上具有____________的单菌落。筛选得到的优良菌种除产酸量较高外，还具有____________等特点。
(3)为了解残渣中微生物的数量，取10g残渣加入90mL无菌水，混匀静置后取上清液，用______________（工具）将0.1mL稀释液接种于培养基上，10倍稀释对应的三个平板中菌落数量分别为78、91和80，则每克残渣中微生物数量为____________个。