【推荐1】人体内的t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。
(1)研究人员采用PCR技术可以获得大量t-PA基因，PCR的原理是_____，此外，大量获得t-PA基因的方法还有____（答出1种）。
(2)研究表明，为心梗患者注射大量t-PA会诱发颅内出血，其原因在于t-PA与纤维蛋白结合的特异性不高，若将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该改造后的基因，可制造出性能优异的改良t-PA蛋白。（注：如图表示相关的目的基因、载体及限制酶。pCLY11为质粒，新霉素为抗生素。）请回答下列问题：
   
①为获得t-PA改良基因，要用到_____技术来进行碱基的替换。若获得的t-PA改良基因如图所示，那么质粒pCLyll需要用限制酶____和____切开，才能与t-PA改良基因高效连接。
②将连接好的DNA分子导入大肠杆菌中对大肠杆菌接种培养，在培养基中除了加入水、碳源、氮源等营养物之外，还应加入_____进行选择培养，以筛选成功导入pCLy11的细菌。配置好的培养基，通常采用____方法进行灭菌。
③对培养得到的菌落进行筛选，其中菌落为____色的即为含t-PA改良基因的重组DNA分子的大肠杆菌。

【推荐2】在植物的生存环境中，存在着各种各样的微生物。有资料显示，一些植物内生微生物与宿主发生关联时，可明显增强宿主的抗病性。以下为从菠菜叶中分离出内生细菌，随后筛选出对菠菜枯萎病菌有拮抗作用的菌株的过程。
(1)依据所学知识，将内生细菌（用①表示）和酵母菌（用②表示）的比较结果填在表虚线方框内（填“有”或“无”)

	DNA	细胞核	细胞膜	核糖体
①
②

(2)取0．1g菠菜叶，经70%酒精和0．2%升汞进行消毒后，接种于培养基上。培养48h后，没有观察到菌落。这说明          。

A．菠菜叶表面微生物已被杀死	B．菠菜叶内在微生物已被杀死
C．菠菜叶内不存在内在细菌	D．菠菜叶细胞已被全部杀死

(3)欲分离内生细菌，将上述0．1g菠菜叶放入无菌研钵中，研磨成匀浆，此过程中应加入          

A．纯净水

B．无菌水

C．自来水

D．蒸馏水

用上述方法制备不同品种菠菜的研磨液，然后用圆纸片吸附不同品种菠菜研磨液置于培养基上，比较它们对菠菜枯萎病菌的作用。在30°C黑暗条件下培养48h，随后进行筛选和鉴定（如图)。

(4)据题干信息分析，图中的菌液a应是      。

A．菠菜研磨液	B．内生细菌
C．通用培养基	D．菠菜枯萎病菌

(5)图中①与②周围透明圈的大小不同，合理的解释是          。

A．圆纸片大小不同	B．菠菜研磨液来源不同
C．菠菜枯萎病菌浓度不同	D．菠菜内生菌抗菌能力不同

【推荐3】为获取可降解高盐度工业废水中有机物的耐盐菌，研究人员进行了如下实验：
①制备含3% NaCl的固体培养基，以及含3%、5%和7% NaCl以高盐度工业废水中有机物为碳源的液体培养基；
②将高盐度废水采用平板划线法接种只含3% NaCl的固体培养基，如图一。然后置于适宜条件下培养一段时间，观察形成的菌落特征；
③将分离纯化后的菌株接种到固体斜面培养基上，适宜条件下培养适当时间，将试管置于4℃冰箱中保藏待用；
④取固体斜面上的菌株制成菌液，取等量菌液，分别加入到步骤①中制备的3组液体培养基中摇床培养35小时，定时取样统计活菌数目。测定结果如图二所示。

回答下列问题：
(1)配制培养基时，灭菌、添加NaCl溶液和调节pH的先后顺序是_________________。
(2)步骤②平板划线操作过程中，第一次划线前灼烧接种环的目的是防止杂菌污染，第二次及之后的几次划线前灼烧接种环的目的是_____________________________________。完成图一所示操作，至少需要灼烧接种环___________次。
(3)步骤④中常采用 _______________法统计活菌数目。直接从静置的培养液中取样计数的做法是错误的，正确的操作是________________。若每种浓度设3个重复实验，每次统计活菌数目时，需要从 ___________个培养基中取样。
(4)由图二可知，该耐盐菌最适合处理含__________（浓度）NaCl的废水。用该耐盐菌处理较高盐度工业废水时，需要 _________________（合理措施），才能达到理想效果。

【推荐1】为了研究手机屏幕上的细菌数量和种类，有人做了下图所示的实验。回答下列问题：

（1）在培养基的制备过程中，培养基中必须含有满足微生物生长、繁殖所需的水、无机盐、碳源和________等成分；在倒平板时，需待培养基冷却至50℃左右时，在__________附近倒平板，待平板冷却后需倒置，其原因是_______________________________________ 。
（2）图中采取的接种方法是________________，实验结束后，所用的培养基必须经过灭菌处理后才能倒掉的原因是_______________。
（3）若按图中方法取样，测定某手机屏幕上的细菌数量，制成10mL菌悬液中，在3个平板上分别接入0．1mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为38、40和42，则该手机屏幕的细菌数为__________个/cm²。该方法计数的结果往往比实际结果偏__________（填“高”或“低”），原因是_____________________________________。

【推荐2】从自然菌样筛选较理想的生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。
（1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养分解纤维素的细菌样应从____________环境采集。
（2）富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，同时抑制或阻止其他微生物生长，使其在群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对纤维素分解菌的富集培养应选择_______________的培养基，此外，在筛选纤维素的分解菌的过程中则是用____________染色法，培养基中出现以纤维素分解菌为中心的_________。
（3）对分离的菌种还要做进一步的鉴定，如在鉴定分解尿素的细菌时，需在培养基中加入________指示剂，若指示剂变________色，说明有目的菌株存在。
（4）从土壤中分离出分解尿素的细菌后，如需计数，在对样品悬液进行梯度稀释时，未经振荡而直接取上层悬液进行梯度稀释，用不同稀释倍数的样液接种到平板上进行培养和计数，统计出的菌落数往往比正确操作统计出的菌落数______（填偏大、偏小或相等）。
（5）在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在____________条件下进行，通常将____________的形状、大小、颜色等特征作为鉴定菌种的依据。
（6）制作牛肉膏蛋白胨固体培养基时，应待培养基冷却至50℃左右时，在 ________附近倒平板。等待平板冷却凝固后，将平板________。
（7）DNA的鉴定中，DNA与________试剂混合经水浴加热呈________色。

【推荐3】某同学为探究变质牛奶中细菌的种类，取ImL的样液，加入盛有9mL无菌水的试管中稀释，然后采用平板划线法对牛奶中的细菌进行分离和鉴别。请回答：
(l)将配置好的牛肉膏蛋白胨培养基灭菌后，冷却到50℃左右时倒平板，平板冷凝后要倒置存放，原因是_______________________、_______________。
(2)平板划线时，在做第二次以及其后的划线操作，总是从上一次划线的末端开始，以便得到_____________________。
(3)划线操作结束时，仍然需要对接种环灼烧的理由是_______________________。接种完成后，平板放入培养箱中培养时是否需要倒置？__________（答“需要”或“不需要”）。
(4)如果要检测牛奶中是否含有大肠杆菌，需要在培养基中加入_____________（填物质），观察是否出现_____________（填颜色）的菌落。

【推荐2】某种病毒的N蛋白（棘突蛋白）可与宿主细胞的受体结合，是决定病毒入侵易感细胞的关键蛋白。下表是两种针对该病毒的疫苗研发的技术路线，请回答相关问题：

方法	技术路线
基因工程疫苗	N蛋白基因→基因表达载体- * 大肠杆菌→N蛋白→人体
腺病毒载体重组疫苗	N蛋白基因→腺病毒基因表达载体人体

(1)研究人员利用PCR技术特异性地扩增N蛋白基因，PCR过程中温度的控制至关重要。将处理温度控制在90～95℃，是为了______。
(2)在构建基因表达载体的过程中，需要用两种不同的限制酶切割目的基因和质粒，目的是防止_____以及目的基因和质粒反向连接。构建的基因表达载体上需要有启动子、终止子、复制原点、____等结构。将基因表达载体导入大肠杆菌，首先用______处理大肠杆菌细胞，使其处于一种能吸收周围环境中 DNA分子的生理状态。
(3)基因工程疫苗制备过程中需要分离和提纯大肠杆菌。通常情况下需要对培养基进行_____灭菌。当采用平板划线法分离大肠杆菌时，第二次及以后的划线都要从上一次划线的末端开始，其目的是______。
(4)制作腺病毒载体重组疫苗时需要将腺病毒的毒力相关基因除掉，删除基因时需用到____
酶，这种酶能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的_____键断开。与基因工程疫苗相比，腺病毒载体重组疫苗的优点是能持续表达抗原，使人体免疫应答更持久。

【推荐3】将葡萄球菌在含卵黄的固体培养基上培养时，葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，形成的菌落周围会出现特有的乳白色乳浊环。某兴趣小组欲通过实验室培养和计数来检测某果汁中的葡萄球菌密度。回答下列问题：
（1）微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键步骤是：_________________ ，本实验中所用的培养皿__________（填“可以”或“不可以”）放入干热灭菌箱中灭菌。
（2）若要检测果汁中的葡萄球菌密度，需先进行稀释操作，稀释操作中，用手指轻压移液管上的橡皮头，吸吹3次的目的是_____________________________________ ；将稀释后的样液用稀释涂布平板法接种在固体培养基上，利用这一方法进行活菌计数的原理是_____________________________________ 。
（3）将10⁴倍的稀释样液接种在固体培养基上培养一段时间后，统计三个平板上葡萄球菌菌落数分别是210、200、220。如果需要据此计算出果汁中葡萄球菌的密度，还需要知道的一个重要数据是_______________。
（4）配制分离葡萄球菌的培养基时，在培养基中加入一定量的卵黄液，卵黄液能给微生物提供________、水和无机盐等营养物质；从功能角度对培养基进行分类，该培养基属于________________ ；已知葡萄球菌耐受高浓度NaCl，为筛选出葡萄球菌，在配制培养基时的操作方法是_____________________________。

【推荐1】近年来，纪录片《舌尖上的中国》引发全民关注美食的热潮，其中多次讲述了利用不同微生物的发酵作用制作的美味食品。请分析回答下列问题：
(1)与黄啤相比，黑啤的营养成份更加丰富。下图是黑啤的酿造工艺流程简图：

麦汁煮沸的主要目的是_____（至少答出两点），工业制作黑啤发酵是需加入菌种为_____。
(2)在果醋制作时，运用醋酸菌在糖源不充足时，可以利用酒精生成醋酸，请写出该过程的化学反应式：_____。此发酵过程中，要适时通过充气口充气的原因是_____。
(3)制作泡菜时，蔬菜在腌制过程中，会产生亚硝酸盐。在_____条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与_____结合形成玫瑰红色染料。制备样品处理液时加入氢氧化铝乳液的目的是_____。
(4)制作泡菜到发酵中期，无氧状态形成，乳酸菌开始活跃，并产生大量乳酸，使乳酸积累量达到0．6%～0．8%，pH 为 3．5～3．8，试分析此时坛内其他微生物的活动_____（填“增强”或是“减慢”）原因是_____。

【推荐3】[生物——选修1:生物技术实践] 我国最早的诗集《诗经》中有“田中有庐，疆场有瓜是剥是菹”的诗句，其中“庐”和“瓜”是蔬菜，“剥”和“菹”是腌制加工的意思。泡菜是一种历史悠久、深受群众喜爱的传统美食。某兴趣小组的同学进行了制作泡菜的实践活动。
回答下列问题：
（1）按清水与盐质量比为4:1的比例制好盐水后，需将盐水煮沸，其作用是________________。
（2）为测定泡菜中亚硝酸盐含量，首先要配制________标准显色液，并与样品进行比较。泡菜制作的第3-5天亚硝酸盐含量较高不宜食用，原因是________________。
（3）若将稀释10⁵倍的某细菌菌液，用直接计数法和稀释涂布平板法进行计数。
①直接计数法：用吸管吸取0.1ml该菌液，滴于血球计数板上的________________边缘，待该细菌全部沉降到计数室底部，用显微镜直接计数，并计算出每升菌液的细菌数目。
②稀释涂布平板法计数：在五个固体培养基上分别接种0.1ml该细菌菌液，适宜条件下培养一段时间后，培养基上的菌落数分别为：20、40、152、154、156，则每升菌液中细菌数量为________个。
③正常操作情况下，上述两种计数法中，________________统计获得的细菌数量数目偏多，原因是________________。