【推荐1】类胡萝卜素具有抗癌、降血脂等多种生物学功能。P蛋白是催化类胡萝卜素形成的关键酶，研究者从裙带菜中克隆了P基因，按下图所示流程进行基因工程操作。

(1)研究者从裙带菜中提取了总RNA，利用逆转录方法获得_________（作为模板），设计特异性_________，利用PCR技术扩增得到P基因。将P基因与质粒载体重组时，需要使用的酶包括_________________________。流程图中①_______菌，②________________技术。
(2)随机选取9株转基因苗，利用PCR、电泳检测的结果如图2，分析结果说明没有成功转入P基因的植株是_________。检测P基因的mRNA相对含量，结果如图3，研究者选择转基因烟草植株2进行后续研究，请说明理由________________________________________。

【推荐2】质粒A和质粒B各自有一个限制酶EcoR I和限制酶BamH I的识别位点，两种酶切割DNA产生的黏性末端不同。限制酶EcoR I剪切位置旁边的数字表示其与限制酶BamH I剪切部位之间的碱基对数(bp)。在含有质粒A和B的混合溶液中加入限制酶EcoR I和BamH I，令其反应充分；然后，向剪切产物中加入DNA连接酶进行反应，再将其产物导入大肠杆菌中。（实验中不考虑：无ori的质粒；拥有两个或以上ori的质粒；两个或以上质粒同时进入大肠杆菌；三个或以上DNA片段发生连接）请回答下列问题：

（1）只拥有质粒A的大肠杆菌________（填“可以”或“不可以”）在含有氨苄青霉素及乳糖作为唯一碳元素来源的培养基中生存？说明理由____________。
（2）DNA连接酶进行反应后，存在________种大小不同的质粒，有________种质粒使大肠杆菌能够在含有氨苄青霉素及乳糖作为唯一碳源的培养基中生存。
（3）绿色荧光蛋白基因是标记基因一种，标记基因的功能是________。
（4）质粒导入大肠杆菌通常要用________处理，其作用是________。

【推荐3】I、叶性状与植物的生长和抗旱能力密切相关，能够准确反映植物适应干旱胁迫的适应性策略，比叶面积（SLA·m²/kg）即叶片的单面面积与其干重之比，是植物叶性状的一个重要指标。研究人员对5种植物的叶片进行了测量，得出比叶面积如下表所示，回答下列问题：

物种	扁担木	柘树	构树	牡荆	酸枣
SLA平均值	24.69	30.50	16.97	22.06	20.83

(1)已知伴随着植物单位叶面积中干物质含量的增加，叶片厚度相对增加，使得叶片内部的水分向叶片表面扩散的距离或阻力增大，从上表数据分析可以得出___________（填植物名称）最适合生活在相对干旱的环境下，原因是____________。
(2)下图是植物的叶面积系数（单位土地面积上的叶面积总和）与植物群体光合速率及群体干物质积累速率之间的关系，当叶面积系数超过b时，群体干物质积累速率降低，推测其可能原因是____________。欲使作物获得高产，应控制叶面积系数在___________（用图中字母表示）。

II、A基因可提高植物的抗旱性，现用基因工程技术对某植物进行改造以提高抗旱性。
(3)图1和图2分别是A基因的cDNA和载体的限制酶酶谱，图3是三种限制酶的识别序列及酶切位点。

为了使A基因与载体定向连接，切割A基因的cDNA最好选用_________酶，所得基因表达载体_______（填“能”、“不能”、“不一定能”）被BanHⅠ切割。为了得到足够多的A基因，需对A基因进行PCR扩增，扩增过程中用到了引物I和引物I两种引物，1个A基因经PCR扩增，第n次时需要消耗引物I_________个。

【推荐1】为降低乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体药物偶联物（ADC），过程如下图1所示。回答下列有关问题：

   

(1)本实验中，小鼠注射的特定抗原应取自____________。
(2)步骤①常用方法包括_____________融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。
(3)步骤②的细胞必须经过步骤③克隆化培养和______________才能筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，杂交瘤细胞可采用注射到小鼠腹腔内培养或进行体外培养的方式进行扩大培养。体外培养时，首先应保证其处于_________的环境，除了适宜的营养物质、温度等条件外，还需要控制气体条件是_________与5%二氧化碳的混合气体，二氧化碳的主要作用是____________。在使用合成培养基时通常需加入血清，血清的作用是_________。
(4)单克隆抗体的优点是___________、与特定抗原发生特异性结合、并且可大量制备。单克隆抗体是ADC中的______________（填“a”或“b”）部分。
(5)研究发现，ADC在患者体内的作用如下图2所示。

   

①单克隆抗体除了运载药物外，还有作为诊断试剂、治疗疾病等作用。
②ADC进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其水解，释放出的药物最终作用于细胞核，导致细胞凋亡，推测其原理是_____________。

【推荐2】科学家通过转基因技术获得了含有人生长激素基因的奶牛，如果要加速转基因奶牛的繁育，可以对此转基因奶牛进行克隆(如图所示)，请结合图示回答下列相关问题：

(1)在进行细胞培养之前，要对取自转基因奶牛的组织细胞进行分散，形成单个细胞，该过程中需要利用__________________处理。
(2)用于核移植的供体细胞，一般都选用传代10代以内的细胞，原因是___________________。
(3)在进行原代培养时，细胞增殖的方式是________，此外，培养过程中还会出现________和______________等特点。
(4)将培养的供体细胞注入去核的卵母细胞中，用去核卵母细胞作受体细胞的原因是____________。
(5)将重组细胞在培养液中培养成重组早期胚胎后移入受体母牛子宫中发育，该母牛就会生出与供体奶牛遗传物质基本相同的牛犊，但也不是100%的复制，原因可能是_________________。

【推荐3】2019年1月24日，5只生物钟紊乱体细胞克隆猴登上中国期刊《国家科学评论》封面，标志着中国体细胞克隆技术走向成熟。利用这项技术可批量生产实验用疾病模型猴。如图是体细胞克隆猴的培育过程。请回答下列问题：

   

(1)研究者选择出生夭折的猕猴作为供核个体，先取相应组织，剪碎，用______酶处理后，置于含有______的混合气体的CO₂培养箱中进行培养。
(2)克隆猴的获得属于______繁殖，该过程需要先获得卵母细胞，为获得更多的卵母细胞，需要对母猴进行______处理，然后对卵母细胞去核。实际上去掉的是______________________________
(3)核移植过程中用去核卵母细胞作为受体细胞的原因是①卵母细胞比较大，容易操作；②_____。
(4)非人灵长类的体细胞核移植非常困难，研究发现体细胞克隆猴胚胎发育障碍与克隆胚胎基因组上大量组蛋白的甲基化密切相关。据此提出攻克技术难点的思路是________。

【推荐1】我国科学家屠呦呦因在青蒿素研究中的特殊贡献荣获2015年诺贝尔生理学或医学奖。青蒿素是青蒿植株的次级代谢产物，其化学本质是一种萜类化合物，其生物合成途径如图1所示。正常青蒿植株的青蒿素产量很低，难以满足临床需求，科学家为了提高青蒿素产量，将棉花中的FPP合成酶基因导入了青蒿植株并让其成功表达，获得了高产青蒿植株，过程如图2所示。请据图回答问题：

（1）研究人员从棉花基因文库中获取FPP合成酶基因后，可以采用PCR技术对该目的基因进行大量扩增，该技术除了需要提供模板、原料、Taq酶外，还需要根据______________设计引物。
（2）图2中①上启动子的作用是____________________________。
（3）①需要与______________处理的农杆菌混合于培养基中完成转化，在制备此培养基时，需先挑取上述单菌落在培养液中培养并接种于固体培养基上，并使其均匀分布在含有_________的培养基上培养一段时间后，挑选出部分菌株。若②不能在以上培养基上生存，说明______________。
（4）用农杆菌感染青蒿植株，是因为农杆菌中的______________可转移至青蒿植株细胞，并整合到其染色体DNA上，整合成功的分子学基础______________。
（5）据图分析，除了通过提高FPP的含量来提高青蒿素的产量外，还可以通过哪些途径来提高青蒿素的产量? ____________________________。

【推荐2】I.谷氨酸脱羧酶（GAD）催化谷氨酸脱羧形成的γ-氨基丁酸是一种神经递质，具有降血压、抗抑郁、改善睡眠等多种生理功能。

(1)下列有关γ-氨基丁酸的叙述正确的是___。
A能参与蛋白质的合成
B是谷氨酸脱羧酶的底物
C作为化学信号传递信息
D由神经元的树突末梢释放
II.对天然GAD第413位的赖氨酸进行定点突变改造，以期获得催化效率高的突变型GAD，用于工业化生产γ-氨基丁酸。图1为改造天然GAD的基本流程。

(2)修饰改造蛋白质有两大类操作策略，除题中所示的这种策略外，还有一种是___。
(3)PCR技术能用于目的基因获取、基因定点突变等，其基本程序如图2所示。在图中方框中标出模板链和引物链的5’端___。

细胞中与其类似的生理过程称为___。下列选项在两者中有差异的是___（多选）
A参与反应的酶   B反应的过程C反应的温度       D反应的模板
(4)据图1并结合所学知识判断，过程②⑤所表示的操作分别是___、___。
A构建重组质粒
B将重组质粒导入大肠杆菌细胞
C微生物分离纯化
D蛋白质分离纯化
(5)过程③所用的接种方法是___。为筛选含目的基因的受体细胞，LB固体培养基中需要添加___。
A卡那霉素          B卡那霉素降解酶
C卡那霉素基因   D卡那霉素抗性基因
(6)根据上述信息，此研究可获得的突变型GAD最多有___种。相对于天然GAD的酶活性，推测突变型GAD的酶活性变化，并从分子水平分析原因_______________。

【推荐3】有一大小为2500bp质粒A，其上包含BglⅡ、Sau3AⅠ及EcoRⅠ的酶切位点；现需要将下图所示的目的基因插入到质粒中，构建重组质粒，并转化大肠杆菌细胞，从而实现目的基因的大量扩增。三种限制酶的酶切位点如下：

限制酶	Bg/II	Sau3A I	EcoR I
识别序列及切割位点

（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有____________、______________(答出两点)，而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。
（2）质粒A可被BglⅡ、Sau3AⅠ及EcoRⅠ三种限制性内切酶同时切割。单独用BglⅡ或Sau3AⅠ单独切割，都是得到一条长链，BglⅡ和EcoRⅠ同时切割得到2个400 bp和1个1700 bp片段， Sau3AⅠ和EcoRⅠ同时切割得到2个200bp和1个2100bp片段。则BglⅡ的切割位点和Sau3AⅠ的切割位点间最短长度为_____________，三种酶同时切割时会产生__________个游离的磷酸基团。
（3）用质粒A和目的基因构建重组质粒时，选用BglⅡ和Sau3AⅠ进行切割，通过________________酶作用后形成______________键获得重组质粒。若只考虑酶切后的一个目的基因片段和一个质粒成功重组，可产生2种类型的重组质粒，简要解释其原因是_______________________________。
（4）为了扩增重组质粒，需将其转入处于_______________态的大肠杆菌。科研人员发现，作为受体细胞的大肠杆菌自身含有限制酶BglⅡ，上述两种类型的重组质粒只有一种能在大肠杆菌中保存且扩增，写出该重组质粒形成时黏性末端连接部位的碱基对序列________，对于该部位，这两种酶______（填都能、都不能或只有一种能）切开。