【推荐1】蝴蝶兰花朵艳丽，是重要的盆栽观赏花卉，但其易受乙烯影响，花期较短。研究人员从乙烯生成过程中的关键酶——ACC合成酶（ACS）入手，克隆蝴蝶兰ACS基因片段（461bp），并构建ACS反义基因（RACS）植物表达载体，导入蝴蝶兰植株后使其表达，降低植株体内ACS的水平，从而获得花期延长的蝴蝶兰新品系。下图为ACS反义基因重组质粒的构建过程。回答下列问题：

注：Ampr为氨苄青霉素抗性基因，Kanr是卡那霉素抗性基因，LacZ是一种报告基因（其表达产物易被检测）。PstI、EcoRI、SacI、XbaI为几种限制酶。
1．PCR技术扩增ACS基因的过程中需要根据基因的结构设计_________种引物，为保证ACS基因准确插入到质粒中，需在引物的_________端分别添加限制酶_________的识别序列。
2．基因表达载体PMD19-ACS除了图示结构外，还有_________（答两点）等。报告基因LacZ的编码产物β-半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。利用该原理，筛选时在培养基中加入相关抗生素和X-gal等成分，其中_________的菌落是导入了重组PMD19-ACS质粒的菌落。
3．T4DNA连接酶的作用是在DNA片段两个单链的游离的磷酸基和羟基末端之间形成_________键。ACS基因转录产物与重组质粒PCAMBIA3301-RACS中目的基因转录产物的碱基序列_________（填“相同”或“互补”）；构建重组质粒PBI221-RACS和重组质粒PCAMBIA3301-RACS时都使用了双酶切，该方法的优点是_________。
4．采用冻融法将PCAMBIA3301-RACS质粒导入根癌农杆菌，涂布在含有_________的培养基上培养48小时。待菌落长出后，挑取单菌落进行扩大培养。用目的基因序列特异引物进行PCR检测，若电泳结果为_________，则证明重组质粒PCAMBIA3301-RACS已经导入根癌农杆菌中，可用于下一步的遗传转化。