【推荐1】解磷菌（主要为细菌）能够将土壤中植物不能利用的磷转化为可以利用的磷，在提高土壤中有效磷含量、促进磷循环等方面具有重要作用。解磷菌能分解含磷化合物，使得菌落周围出现透明圈。下图为从某植物根际土壤中筛选出高效解磷菌的部分流程示意图，步骤Ⅰ表示将1g土壤加入100mL灭过菌的PVK培养基培养，36h后，取10 mL培养液接种于100mLPVK培养基继续富集培养，连续富集培养3次后进行实验步骤Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ（B、C中培养基的营养成分与A相同）。请分析回答下列问题：

(1)用于培养解磷菌的培养基在接种前通常采取_____法进行灭菌。与A相比，B、C中的培养基多了_____成分。
(2)为尽快观察到解磷菌培养的实验结果，需将接种后的平板倒置于_____中培养，并同时设置一组未接种的空白培养基作为对照实验，其目的是_____。
(3)在C中分离培养出解磷菌后，通过测量_____的直径，比较它们的比值可确定其解磷能力，从而筛选出目标菌株。
(4)分离出的解磷菌，需通过分子鉴定进一步确定其种属关系。常用方法是对细菌的核糖体RNA（16SrRNA）所对应的16SrDNA进行序列分析，在测序前一般采用菌落PCR的方法进行扩增。
①菌落PCR直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，与传统PCR相比更加省时省力，其原因是_____。
②在PCR实验的具体操作时，按照事先设计好的配方用_____向微量离心管中依次加入各组分，按照下图的设计设置好PCR程序，其中a表示_____过程。

③在进行菌落PCR时，首先根据_____设计引物。已知相关的上游引物序列为5'-GCAATGCGTAGCCTCT—3'，则下游引物的序列最合适的是_____。
a．5'—ACAATATGTATAATCT—3'               b．5'—TCATGAGCGCATAGTT—3'
c．5'—GCAATGCGTGCATTGC—3'               d．5'—AGAGGCTACGCATTGC—3'

【推荐2】某小组开展“市售鲜猪肉中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析”的研究，进行了相关实验操作，回答下列问题：
(1)菌株的分离纯化:切取鲜猪肉表层样品接入蛋白胨大豆肉汤培养基中，放在37℃摇床振荡培养18h。取肉汤接种于琼脂平板培养基上，培养后再挑取单菌落，接种培养，培养一段时间后，再次挑取单菌落接种于固体培养基上，多次重复此步骤。菌落是指由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的______________；操作过程中液体培养的目的是______________，反复接种固体培养基的目的是____________________________。
(2)下面是纸片扩散法对猪大肠杆菌的耐药性实验。
步骤1:用打孔器制成直径约6 mm的圆形滤纸片，浸入一定浓度的氨苄西林，烘干；
步骤2:取含大肠杆菌的菌液均匀涂布于______________上；
步骤3：在培养基上，每隔一定距离贴一片含药物的圆形滤纸片，培养，观察。
分析与评价：
①观察发现，在每个纸片周围都形成了抑菌圈，其直径的大小表示大肠杆菌对氨苄西林的敏感性。抑菌圈直径越大，敏感性越______________（填“高”或“低”）。
②发现在抑菌圈外长满多种不同形态的菌落，其原因可能是_________________________。
③欲比较五倍子和黄连提取液对猪大肠杆菌的抑制作用，为治疗提供依据。请写出实验思路:________。

【推荐3】塑料给人们的生活带来了便利，但由于它的物理化学性质很稳定，又疏水，自然降解时间需要500年以上！在过去的50年里，全球塑料产量增加了20倍，在环境中留下了70亿吨的垃圾。北京航空航天大学教授杨军团队经过13年的潜心研究，发现黄粉虫肠道内的微生物能够降解塑料的最主要成分——聚苯乙烯。以下为他们的研究过程，请分析作答：
(1)分别用等量的麦麸（把小麦种子加工成面粉过程中余下的外皮，是黄粉虫喜爱的食物）和泡沫塑料喂食黄粉虫，30天后实验结果如图1和图2所示：

a． 据图1可知，饲喂30天后黄粉虫吃掉泡沫塑料_________克。
b． 据图2可知，泡沫塑料组与麦麸组黄粉虫存活率________，说明________。
c． 为证明“聚苯乙烯被黄粉虫吸收利用了”，请写出实验设计思路。______。
(2)给黄粉虫喂食对肠道菌群有很强抑制能力的庆大霉素，十天后，肠道里面的菌群数量降到零。再喂食聚苯乙烯，发现黄粉虫对聚苯乙烯的降解效率几乎为零。据此能得出的结论是____________。
(3)研究人员最终从肠道菌群中分离出两种能分解聚苯乙烯的细菌，以下是实验过程，请补充完善分离实验的操作步骤。
a． 制备黄粉虫的________________；
b． 聚苯乙烯降解菌的富集和分离：将适量菌悬液加入含聚苯乙烯薄片的____液体、固体）无碳培养基中培养，对照组的处理是_________；
c． 60天后，实验组的聚苯乙烯薄片明显变小变薄，将培养物用___法接种并培养得到单个菌落；
d． 对上述菌落进行筛选，得到对聚苯乙烯有较强降解能力的两种细菌，经鉴定为微小杆菌和金黄杆菌。

【推荐1】研究人员为了获得用于烟气脱硫的脱硫细菌，进行了相关实验。回答下列问题：
（1）获取菌种:在某热电厂烟囱周围区域采集土样，取样用的小铁铲和盛装土样的信封在使用前都需要___________。为了获得目的菌种，应该将采集的土样进行___________处理后，然后接种到培养基上进行培养，培养基中的营养物质一般包括___________、水和无机盐。
（2）分离目的菌:将目的菌转移到含少量无菌水的锥形瓶中，边搅拌边持续通入S0₂气体，驯化几分钟后接种到固体培养基上，待长出菌落后再重复上述步骤，并逐步延长通S0₂的时间，与此同时逐步降低培养基的pH。由此分离得到的脱硫细菌具有较强的___________和___________的能力。
（3）活菌计数:为获得大量的目的菌用于生产，在培养过程中技术人员需连续取样进行计数。稀释涂布平板法常用来统计样品中的活菌数目，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的___________，因此，统计平板上的菌落数即可推测出样品中含有的活菌数目。通常情况下，用此计数方法统计的菌落数往往 比活菌的实际数目___________（高/低），这是因为__________________。
（4）检测脱硫细菌对抗生素的敏感性:取该单菌落适当 稀释后的液体2滴，接种于固体培养基表面，并用___________使菌液均匀分布。在37℃培养箱中培养24小时后，将大小相同且分别含有三种抗生素的滤纸片均匀置于该平板的不同位置，再培养一段时间后，结果如下图（滤纸片周围的白色区域表示没有菌落分布），据此实验结果推测，三种抗生素中对该菌抑制作用最强的是___________。

【推荐2】实验人员从环境中分离获得白腐菌，以白腐菌的菌丝或孢子制得固定化白腐菌凝胶颗粒。各取25个两种凝胶颗粒分别处理50 mL染料废水，实验结果如下图1。进一步研究不同数量的凝胶颗粒处理50 mL染料废水结果如图2。据图分析回答：

(1)从野外采集白腐菌前，先向待采集土壤喷洒适量的染料废水的目的是______。某同学在进行白腐菌分离纯化实验时，划线某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成第一条划线无菌落可能的操作失误是______、______。将收集到的菌丝或者孢子加入到适量的海藻酸钠溶液中混匀，抽取5mL混合液，滴加到CaCl₂溶液中，该过程中CaCl₂溶液的作用是______。
(2)现要处理100L皮革生产过程中产生的染料废水。从实验结果分析，应选用______凝胶颗粒，添加______个凝胶颗粒后，保持______天以上，以达到最好的净化效果。
(3)与向染料废水中直接接种白腐菌相比，在工业生产中使用固定化白腐菌凝胶颗粒的优点主要是______。

【推荐3】上海生命科学研究院植物生理生态研究所的覃重军，薛小莉几位研究员在国际上首次人工创建了单条染色体的真核细胞，完成了将单细胞真核生物酿酒酵母天然的十六条染色体人工创建为具有完整功能的单条染色体。为了创建一个只具有单一染色体的活酵母细胞，重军等人利用基因编辑工具CRISPR--Cas9切割端粒结构（每条染色体末端的重复核苷酸序列区域），将两条染色体组合在起博士研究生邵洋洋从2013年开始尝试并发展高效的染色体操作方法，历经4年时间，通过15轮染色体融合，最终成功创建了只有一条线型染色体的酿酒酵母菌株SY14（去除了染色体中多余的着丝粒，只保留其中一个）。研究发现，虽然人工创建的单条线型染色体的三维结构发生了巨大变化，但SY14酵母具有正常的细胞功能，基因表达只发生了微小变化，这颠覆了染色体三维结构决定基因时空达的传统观念，揭示了染色体三维结构与实现细胞生命功能的全新关系。

1．左图为覃重军等科学家获得的酿酒酵母菌株SY14的落，获得该图菌落的微生物接种方法是______，若希望大量繁殖SY14菌株，可使用___________（液体/半固体/固体）培养基对其进行后续培养。
2．根据上述材料，基因编辑工具 CRISPR-C-Cas9在功能上接近（       ）

A．限制酶

B．DNA链接酶

C．RNA聚合酶

D．DA聚合酶

3．请将下列关于酿酒酵母菌株SY14构建过程进行排序（       ）

A．筛选导入成功的酿酒酵母菌株SY14

B．将重组的染色体导入去核酵母细胞中

C．利用CRISPR--cas9等技术重组酵母染色体

D．获取原始酵母染色体

4．关于酿酒酵母菌株SY14的叙述正确的是（       ）

A．SY14与野生型酿酒酵母相比，发生了染色体畸变

B．SY14的DNA并非双螺旋结构

C．SY14的代谢类型为异养兼气型

D．SY14去除染色体中多余的着丝粒的目的是为了避免染色体在细胞分裂时发生断裂

5．根据材料分析酿酒酵母菌株SY14能否应用于大规模酿酒生产?为什么?____

【推荐1】现有五种不同的抗生素（甲、乙、丙、丁、戊），有测它们对金黄色葡萄球菌的作用效果。下图-1所示在均匀接种了金黄色葡萄球菌的固体培养基上，分别于不同位置加入2mg不同的抗生素的实验结果。图-2为细菌的细胞结构模式图。请回答下列相关问题：

（1）从图-1中可知，__________种抗生素的抗菌效果最好，__________种抗生素的抗菌效果最差。
（2）图-2中4指的是__________（结构），已知丁种抗生素的作用原理是抑制葡萄球菌此结构的形成，由此推测该种抗生素对人体的毒副作用较__________（填“大”或“小”）。
（3）为保证培养基上能均匀地生长出一层金黄色葡萄球菌，将菌液接种到固体培养基上时采用_____（填“涂布平板”或“平板划线”）法。操作过程中，与用于计数的平板接种不同的是：本实验要保证滴加到培养基上的菌液__________，以缩短培养时间。
（4）本实验过程中所使用的__________技术，除了用来防止培养物（金黄色葡萄球菌）被其他外来微生物污染外，还能有效避免__________被微生物（金黄色葡萄球菌）感染。

【推荐2】科研人员培育了一种能够降解餐厨废弃物并生成乳酸的转基因毕赤酵母。基本思路是在乳酸脱氢酶基因（LDH）的单基因表达载体中逐个接入糖化酶基因（Ga）表达盒与α-淀粉酶基因（Amy）表达盒，构建出AGL—三基因表达载体，如图1所示。

(1)利用PCR技术获得目的基因的过程中，需要在PCR反应体系中加入模板、Taq酶及_____。
(2)将图1所示结构“导入”毕赤酵母后，将毕赤酵母转移至含_____的培养基中进行培养，筛选出能够生存的菌落。
(3)对筛选出的菌株进行个体水平鉴定的方法是_____，利用转基因毕赤酵母降解餐厨废弃物生成乳酸，优点有_____。
(4)构建三基因表达载体的难点在于构建目的基因的表达盒，图2为Amy表达盒的构建过程。（pro为启动子；AOX TT为终止子；Bsp119Ⅰ、XbaⅠ、BglⅡ、BamHⅠ为不同限制酶，①②为操作过程。）

操作①的处理是_____，然后用DNA连接酶拼接。在此之前，科研人员还利用点突变技术对α-淀粉酶基因序列进行了同义密码子替换（即不影响氨基酸序列）改造，推测其原因是_____。操作②中必需用_____酶对质粒2处理，才能获得能正常表达的α-淀粉酶基因表达盒。

【推荐3】乳链菌肽是由乳酸乳球菌分泌的一种由34个氨基酸组成的小肽，对许多革兰氏阳性菌，尤其是对引起食品腐败的细菌具有强烈的抑制作用，是一种高效无毒的天然食品防腐剂。研究人员从新鲜牛奶中获得多株产乳链菌肽的菌株，进行了如下实验：
（1）筛选菌株：将含有杀菌物质的滤纸片放到滴有细菌培养液的固体培养基上，经过培养，杀菌物质杀死细菌后会在滤纸片周围形成抑菌圈。将革兰氏阳性菌涂布于平板上，将灭菌的大小相同的滤纸片均匀地摆放在培养基表面，在其上分别滴加等量备选菌株培养液的上清液，对比观察______，选取抑制作用最强的菌株。
（2）纯化菌株：

A过程配制时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持______。B过程常用的方法是____________，该过程中温度是121℃，压力______，灭菌15min。D过程与C过程相比，培养基中增加的物质是______。E过程需将纯化的菌株用______（用具）接种于______培养基中4℃保存。
（3）为了解乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式是抑制细菌生长、溶菌性杀死细菌（细胞破裂）还是非溶菌性杀死细菌，科研人员活将乳链菌肽加入革兰氏阳性菌菌液中，随着发酵时间的延长，检测革兰氏阳性菌的活菌数、除去菌体的上清液中核酸含量，实验结果如下图所示。

对革兰氏阳性菌活菌的计数方法为______。以上实验表明乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式为______。
（4）口服乳链菌肽，不会改变人体肠道中的正常菌群，也不会进入内环境，推测可能的原因是______________________________。

【推荐1】下图中的①②③代表通过植物组织培养技术培育新植株的三条途径，请回答：

（1）外植体a、b、c来自同种植株，植株A、B、C中的细胞，全能性表达程度_________(填“相同”、“可能不同”)。
（2）途径②和③需要用到__________和_________（填培养基的物理性质）两种培养基。将含B1的试管放在摇床上，通过_________培养可以分散成单细胞。
（3）外植体C脱去细胞壁过程中需要加入适宜浓度的__________(A.甘露醇B.盐酸C.蒸馏水D.氯化钠）以保持一定的渗透压。原生质体培养成功标志着_________技术又向前迈进了一步。
（4）通过大量培养特定细胞系，可以实现能产生重要__________(如某些中药）的细胞的大量克隆和产物的工业化生产。

【推荐2】同源四倍体的紫花苜蓿被誉为“牧草之王”，但易造成家畜胀病；二倍体的百脉根因富含缩合单宁，饲喂时可防止家畜胀病的发生。某研究人员设计了下列技术路线，以期获得抗胀病的新型苜蓿。（注：IOA可抑制植物细胞呼吸第一阶段，R-6G可阻止线粒体的呼吸作用，二者有效抑制不同植物细胞正常代谢的临界浓度不同）

(1)常用酶解法获得紫花苜蓿与百脉根原生质体，优点是___；步骤①诱导二者原生质体融合时除可用PEG处理外，还有___（答两种）等方法。
(2)原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是___。融合后的原生质体经过细胞壁再生形成杂种细胞，进而经过___形成愈伤组织。
(3)步骤③先将生长良好的愈伤组织转接到诱导生芽培养基上，通常应在培养基中加入两类植物激素，其中起主要作用的是___。长出芽后，再将其转接到诱导生根培养基上，最终得到杂种植株。据图可知，本研究主要利用的生物技术的原理是___。此种育种方式的优点是___。
(4)上述过程中需要提供光照的是___（填序号），光照的作用是___。得到的杂种植株是___倍体，理论上是否可育?请回答并阐述理由：___。
(5)在实验前需要通过预实验来探究R-6G或IOA使原生质体失去再生愈伤组织能力的临界浓度，设计思路是___。

【推荐3】某二倍体雌雄同株植物果肉颜色有黄果肉（A）和白果肉（a），茎的颜色有红皮茎（b₁）、紫皮茎（b₂）和白皮茎（b₃），某小组为研究这两对相对性状的遗传机制进行了杂交实验，实验结果如下表所示（“-”表示无）：

亲本组合	F1植株
	黄果肉	白果肉	红皮茎	紫皮茎	白皮茎
组合一：黄果肉红皮茎×黄果肉红皮茎	240	77	238	-	79
组合二：黄果肉红皮茎×白果肉紫皮茎	134	136	133	137	-
组合三：白果肉紫皮茎×黄果肉红皮茎	408	-	101	208	99
组合四：黄果肉紫皮茎×白果肉白皮茎	124	125	-	248	1

请回答下列问题：
(1)根据结果推测，控制该植物茎颜色的基因b₁、b₂、b₃的显隐性关系为______（显隐性大小用“>”表示）。
(2)由上表统计结果无法推测控制该植物果肉颜色与茎颜色的基因的遗传是否遵循自由组合定律，其判断依据是______。取组合一F₁中的所有黄果肉红皮茎与组合二F₁中的黄果肉紫皮茎杂交，若子代出现______，则说明题述两对等位基因的遗传遵循自由组合定律。
(3)在不考虑基因突变的情况下，组合四的F₁出现白皮茎植株（性状可遗传给后代）可能的原因是______（答出2点）。快速检测该植株产生原因的方法是______。
(4)该植株在农业生产中采用无性繁殖的方式进行繁殖，它们感染的病毒很容易传给后代。病毒在作物体内逐年积累，导致产量降低、品质变差。请从植物细胞工程角度给出解决这一问题的措施：______。