【推荐1】回答下列问题：
（一）啤酒生产需经过制麦、糖化、发酵等主要环节。糖化主要是将麦芽中的淀粉等有机物水解为小分子。主要工艺流程如下图所示，请回答下列问题：

(1)制麦过程需促使大麦种子萌发，发芽大麦合成大量______，直接促进糖化，淀粉糖化后啤酒酵母才能充分发酵的原因是______。
(2)大麦发芽会消耗部分储存的有机物，影响产量，提高成本，厂家试行用______（激素）诱导处理大麦种子，解决以上问题。
(3)啤酒泡沫的稳定性是啤酒品质的一个重要指标，发酵液中的蛋白质有助于泡沫的稳定。为获得优质啤酒酵母，把经射线处理后的酵母菌液，稀释后______在含酪蛋白的固体培养基上，选取周围透明圈小的菌落，表明其蛋白酶活性______，扩增鉴定后获取用于生产的菌株。
(4)发酵过程中要随时检测培养液的______、______等，以了解发酵进程，严格控制好发酵条件。
(5)现在市场上流行一种不添加食品添加剂、不进行过滤和消毒处理的“精酿”啤酒，有人认为“精酿”啤酒不如普通啤酒卫生，请分析原因：______。
（二）新型冠状病毒是一种单链RNA病毒，检测方法主要有抗原检测和核酸检测。请分析回答下列问题：
(6)抗原检测测的是病毒表面的抗原蛋白，利用______原理，可用相应抗体检测抗原的存在，从而证明样本中有新冠病毒。
(7)核酸检测是检测疑似患者样本中是否存在新型冠状病毒的特异性RNA序列，最常用的方法是“实时荧光RT—PCR技术”。其过程是先将RNA经______合成cDNA，再以此cDNA为模板进行PCR扩增。在PCR反应体系中，加入的荧光探针与模板DNA的某条链互补结合，探针完整时，报告荧光基团发射的荧光信号被淬灭荧光基团吸收。当子链延伸至探针处，探针被TaqDNA聚合酶降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而发出荧光（如图所示）。即每扩增1个DNA分子，就有1个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

①在基因工程中，目前获取目的基因的常用方法除了利用PCR技术外，还有人工合成和______等方法。
②在PCR反应体系中要加入相应的模板、探针、______、dNTP和TaqDNA聚合酶等，其中酶发挥的具体作用是延伸DNA链和______，延伸时，在酶催化下，原料与延伸链的______端形成磷酸二酯键。
③若最初该反应体系中只有1个DNA模板，经n次循环后，需要消耗荧光探针______个。
④荧光强度一般要达到或超过阈值时才确诊。若检测出现假阴性，原因可能是______。

【推荐2】角蛋白酶能降解角蛋白，在饲料工业中具有广阔的应用前景。某实验小组将角蛋白酶基因（KerA）导人大肠杆菌中，获得了能高效表达角蛋白酶的工程菌，下图为含KerA基因的外源DNA和质粒，EcoR I、BamH I、Sal I、Xho I均为限制酶，其切割位点如图所示。Kan^r、Tc^r分别为卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因。请回答下列相关问题：
   
(1)据图可知，构建重组质粒时选用的工具酶包括_________和DNA连接酶，这些工具酶作用的化学键_________（填“相同”或“不同”）。
(2)利用PCR技术扩增KerA基因时，需根据其两端序列设计引物。若KerA两端部分序列为一5'AATGGA……ATTCTC-3'，则需要设计的一对引物序列是__________________。若一个KerA基因扩增了4次，则需要_________个引物，同时含两种引物的DNA分子所占的比例为_________。KerA基因扩增过程可以在PCR仪中自动完成，完成以后，常采用_________来鉴定PCR的产物。
(3)将构建的重组质粒导入大肠杆菌时，需使用_________处理大肠杆菌，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。将目的基因导入大肠杆菌时，常出现三种情况：未转化的细菌、含空载体（普通质粒）的细菌、含重组质粒的细菌。可在添加有_________的培养基中进行初步筛选，能在该培养基上生长的是_________________。
(4)转基因技术除了在微生物领域取得广泛的成果，在动植物领域也取得了巨大的成果。下列有关转基因技术的叙述，正确的是_________。
①我国对农业转基因生物实行了标识制度
②只要有证据表明转基因产品有害，就应该禁止转基因技术的应用
③转基因技术本身是中性的，应理性看待该技术
④转基因植物的基因来自自然界，不会产生安全性问题

【推荐2】烟草是我国重要的经济作物，其栽培容易受到气候、土壤等诸多生态因子的强烈制约，因而烟草的栽培区域受到限制。土壤中的盐分是制约烟草生长的重要因素，它不仅造成烟草产量和品质降低，同时还使土壤板结。某科研团队为获得抗逆性强的抗盐烟草品种，将抗盐基因H与质粒重组，再借助农杆菌导入烟草细胞中。叶绿体是植物基因工程的理想受体，将外源基因整合到叶绿体DNA 中往往能够获得高效表达，由此发展出叶绿体基因工程。回答下列有关问题：
(1)基因工程的核心是___________，质粒作为基因工程的工具，应具备的基本条件有___________（答出2点即可）等。
(2)检测目的基因是否成功导入受体细胞的叶绿体时，实验组以待测的样本 DNA 为模板，使用目的基因的特异性引物进行PCR 技术扩增，利用PCR 技术扩增的前提条件是___________。
(3)转入叶绿体中的基因___________（填“会”或“不会”）随花粉传递给子代，理由是___________。
(4)若要获得抗盐能力更强的抗盐基因，可以对基因H进行改造，最终得到相应的蛋白质，该过程可以通过蛋白质工程完成，该过程的基本思路是：①___________、②设计抗盐蛋白质的结构、③___________、④找到对应的基因序列。

【推荐3】下图为吉林大学农学部培育出世界首例赖氨酸转基因克隆奶牛“织女”的大致过程，请回答：

(1)实施基因工程的核心操作步骤是________________，实现②过程的常用方法是_________________。
(2)获得黑白花奶牛成纤维细胞后，利用______________技术扩增细胞，培养液中除了提供必要的营养物质之外，还需要添加_____________等天然成分。
(3)获得重组细胞④时，以去核卵细胞为受体细胞的原因是_______________________。
(4)将早期胚胎移入代孕母牛体内之前，需要对代孕母牛进行___________处理，目的是_____________________________。
(5)要通过⑤过程获得较多的遗传同质早期胚胎，应采用______________技术，操作时应选择发育至__________期的胚胎，并将内细胞团___________。“织女”牛⑦进入泌乳期后，可以通过分泌乳汁来生产人类所需的赖氨酸，因而称为________________。

【推荐1】乳酸菌是乳酸的传统生产菌，但耐酸能力较差，影响产量。酿酒酵母耐酸能力较强，但不产生乳酸。研究者将乳酸菌的乳酸脱氢酶基因（LDH）导入酿酒酵母，获得能产生乳酸的工程菌株。下图为构建表达载体时所需的关键条件，图中XbaI、BamHI分别表示限制酶XbaI、BamHI的识别序列。

(1)获得转基因酿酒酵母菌株的过程如下：
①设计引物扩增乳酸脱氢酶编码序列。在PCR扩增过程中引物在__________阶段与模板结合。为使扩增出的序列编码起始密码子的序列由原核生物偏好的GTG转变为真核生物偏好的ATG，且能通过双酶切以正确方向插入质粒，需设计引物1和2。其中引物1的5′端序列应考虑__________和__________。
②将上述PCR产物和质粒重组后，导入大肠杆菌，筛选、鉴定，扩增重组质粒。重组质粒上有__________，所以能在大肠杆菌中扩增。启动子存在物种特异性，易被本物种的转录系统识别并启动转录，因此重组质粒上的乳酸脱氢酶编码序列__________（填“能”或“不能”）在大肠杆菌中高效表达。
③提取重组质粒并转入不能合成尿嘧啶的酿酒酵母菌株，在__________的固体培养基上筛选出转基因酿酒酵母，并进行鉴定。
(2)为了得到纯培养的酿酒酵母，技术人员进行培养基配制、灭菌、接种、分离和培养。对于培养基灭菌宜采用__________方法；接种时，如果采用__________方法还可以在培养后期对菌落进行计数；值得注意的是，统计的菌落数往往比活菌的实际数目__________。

【推荐2】毕赤酵母不能直接利用木糖作为原料生产酒精，因为其体内缺少木酮糖激酶。科研人员为了制造直接利用木糖酿酒的基因工程酵母，将木酮糖激酶基因与启动子结合并导入酿酒酵母细胞（如图）。回答下列问题：
   
(1)能识别启动子并与之结合从而启动转录的物质是_______，启动子和木酮糖激酶基因一起导入质粒的作用是______。
(2)四环素抗性基因在重组质粒中的作用是______，在含四环素的培养基上筛选出的酵母菌，不一定导入了重组质粒，原因是______。
(3)科研人员根据研究需要，尝试让目的基因保持“沉默”，不能表达。研究思路是再导入一个相同的目的基因，有关过程如图所示。
I、过程③构建重组质粒所用的限制酶是______，利用限制酶BamHI打开重组质粒甲后，需要立即进行去磷酸化，其目的是______。
Ⅱ、重组质粒乙导入酵母细胞后，在表达过程中，形成双链RNA“发卡”结构，是因为发生了_______。“发卡”在酵母细胞内阻止了_____过程，从而使基因“沉默”。

【推荐3】某种病毒可通过其S蛋白和RBD 蛋白与人体细胞表面的受体结合而进入细胞，是宿主抗体的重要作用位点。下图1是科研人员利用该病毒S蛋白基因和RBD 蛋白基因，研制该病毒双抗原疫苗的技术路线。

(1)PCR扩增时，微量离心管中需加入的物质有：模板、特异性引物、原料、__、__。PCR过程需要特异性引物的原因是__，PCR的最后一个循环结束后通常还需要在72 ℃维持7 min左右，其目的是__。
(2)为使S-RBD 基因能与pX 质粒相连接，并在工程菌中表达时先合成S蛋白，再合成RBD蛋白，则PCR过程中，应在引物1的5′端添加的限制酶序列是__，在引物 2的5′端添加的限制酶序列是__。
(3)过程B需要的工具酶有__，基因表达载体时，复制原点中A－T的比例较高，有利于__。
(4)为筛选出含有目的基因的大肠杆菌，通常可先后用两种抗生素进行原位影印培养（使用无菌的线毡布压在培养基A 的菌落上，带出少许菌种，平移并压在培养基B上，结果如图2）。培养基A 中应添加__，培养基B中应添加__，含有重组质粒的菌落是__（填写数字），根据图中信息，鉴定pX质粒和重组pX质粒是否导入工程菌在细菌群体水平上还可以通过观察__。