【推荐1】【生物—选修3：现代生物科技专题】我国科技人员培育了一批人乳铁蛋白转基因奶牛，其培育过程如图所示，生产的牛奶中人乳铁蛋白的含量大幅增加。请回答：

(1)图中获取目的基因的方法为___________。①过程与细胞中DNA复制过程相比，该过程不需要________催化。③是在________的催化作用下进行延伸的。
(2)图中含人乳铁蛋白基因的载体除包括人乳铁蛋白基因外，还必须有___________和标记基因等。图中的技术方法C是指_______________。
(3)图中的A、B分别表示______________过程，A中所用培养液的成分除一些无机盐和有机盐外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及____________等物质。
(4)采用___________技术处理早期胚胎可同时获得更多的相同转基因奶牛。若对囊胚进行操作，应注意____________________________。
(5)检测人乳铁蛋白基因是否成功表达的方法是________________________。

【推荐2】磷脂酸（PA）是调节植物生长发育和逆境响应的重要信使物质。为了解植物细胞中PA的动态变化，研究人员用无缝克隆技术将高度专一的PA结合蛋白（PABD）基因与绿色荧光蛋白（GFP）基因融合，构建有效监测细胞PA变化的荧光探针，并测定拟南芥细胞内PA含量。无缝克隆技术连接DNA片段的机理和构建荧光探针表达载体的过程如图所示，请回答下列问题。

注：bar为草胺膦抗性基因；Kan^r为卡那霉素抗性基因。
(1)无缝克隆时，T5核酸外切酶沿_____（填“5´→3´或“3´→5´”）的方向水解DNA，其目的是形成_____。T5核酸外切酶催化的最适温度为37℃，而过程①选择的温度为50℃，目的是降低酶活性， _______。
(2)过程②两个片段复性后存在“缺口”的原因是______，过程③所需的酶有_______。
(3)与传统的酶切再连法相比无缝克隆技术构建重组质粒的优点有________。

A．不受限制酶切位点的限制

B．不会引入多余碱基，不会出现移码突变

C．操作相对简单，成功率高

D．不需要使用PCR技术扩增目的基因

(4)PCR扩增PABD基因时需依据______的核苷酸序列设计引物R1。据图分析扩增目的片段的所用的引物F1和R2可对应下表中的________（填序号）。

①	5´-TCCGGACTCAGATCTCGAGC-3´
②	5´-AGCTATAGTTCTAGATCTAGATTAACTAGTCTTAGTGGCGTC-3´
③	5´-TATCGATGGCGCCAGCTGAGGATGGTGAGCAAGGGCGA-3´
④	5´-GCTCGAGATCTGAGTCCGGACTTGTACAGCTCGTCCA-3´

(5)利用农杆菌花序侵染法转化拟南芥，将获得的种子进行表面消毒，均匀铺在含有______的MS培养基上进行筛选和鉴定，将筛选得到的种子种植可得到转基因拟南芥，通过观测转基因拟南芥根尖细胞中_____，了解PA的分布和含量。

【推荐3】某生物的W基因可编码一种营养价值极高的W物质。为了大批量获得W物质，某研究小组构建了W基因的表达载体，并利用工程菌生产W物质。质粒、含W基因的DNA片段及有关限制酶识别序列和切割位点如图所示。回答下列问题：

限制酶	BamHI	EcoRI	MfeI	KpnI	HindⅢ
识别序列和切割位点（5'→3'）	G↓GATTC	G↓AATTC	C↓AATTG	GGTAC↓C	A↓AGCTT

部分限制酶及其识别序列
(1)质粒作为常用的运载体，其特点有____________（答出2点）。
(2)若图中W基因的转录方向是从左向右，结合图1和图2分析，应使用限制酶____________切割图中质粒，使用限制酶____________切割图中含W基因的DNA片段。不能选择BamHI切割质粒和含W基因的DNA片段的理由是____________。
(3)若图中W基因的转录方向是从左向右，则W基因转录的模板链是____________（填“甲链”或“乙链”）。利用PCR技术对W基因进行扩增的原理是______。
(4)研究人员利用W基因的mRNA进行逆转录得到了cDNA，已知其mRNA的序列为5'—UGAACGCUA…（中间序列）…GUCGACUCG—3'。为了便于将扩增后的基因和载体连接构建重组质粒，用于PCR扩增的引物应为____________。

A．5'—GAATTCTGAACG—3'	B．5'—AAGCTTCGAGTC—3'
C．5'—GAATTCCGAGTC—3'	D．5'—AAGCTTTGAACG—3'

【推荐1】请结合所学知识，回答下列有关问题：
（1）基因工程中将目的基因导入植物细胞时多采用_________________法。这种方法一般不适用于_____________（单子叶/双子叶）植物。将目的基因导入受体细胞时，主要是利用T－DNA的可转移到受体细胞并_____________________________________特点。要想检测导入抗虫棉的Bt毒素蛋白基因是否表达，在分子水平上可用_______________法进行检测。
（2）在单克隆抗体制备过程中，将杂交瘤细胞进行扩大培养之前至少需要经过两次筛选，方法分别是_____________________________和___________________________。单克隆抗体的优点是_____________________。
（3）在胚胎工程中，胚胎移植前，通过______________技术可获得较多胚胎；移植后的胚胎能在受体子宫中存活的生理基础是___________________________________。进行胚胎移植的优势是可以充分发挥雌性优良个体的______________________________。
（4）体外基因治疗与一般的异体移植相比最大的优点是___________________。胚胎干细胞可以作为基因治疗的受体细胞，原因是______________________________________。

【推荐2】科研人员从荒漠植物中成功克隆抗旱功能基因培育出抗旱耐盐碱和耐贫瘠能力明显的转基因紫花苜蓿新品系，它的研究成功对改良与利用大面积盐荒地、改善生态环境以及促进农牧业可持续发展具有现实意义。结合所学知识回答下列问题。
（1）题目中“克隆”是指______技术，其原理为_____________________。   
（2）图1为某种常用质粒的序列图。Lac Z基因编码的酶能使无色X-gal变为蓝色，Amp^r为氨卡青霉素抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。科研人员欲用BamHⅠ和BamH Ⅱ两种限制酶切割目的基因和质粒后，筛选成功导入目的基因的重组质粒，培养基中应加入的物质有___________和氨卡青霉素，构建重组质粒时需要的工具酶有__________________________。

（3）紫花苜蓿为双子叶植物，常用的导入目的基因的方法是__________________。
（4）在对转基因植物进行个体水平的检测时，需将该植株栽培于__________环境中，以观察其生长状况。
（5）欲大规模的推广新品系，科研人员将转基因紫花苜蓿的__________制备成人工种子。
（6）在西北某些地区出现“前面造林，后面砍林”的现象，是因为发展中___________原理失调造成的。

【推荐3】红细胞生成素(EPO)是人体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。目前临床使用的是重组人红细胞生成素(rhEPO)，其简易生产流程如图所示。

请回答问题：
(1)图中①所指的物质是________，②所指的物质是________。
(2)基因表达载体导入中国仓鼠卵巢细胞系(CHO)最常采用的方法是____________________。
(3)CHO是仓鼠的卵巢细胞经过细胞培养过程中的___________________培养获得的无限增殖细胞。重组CHO细胞培养需要____________的环境及营养、温度、pH和气体环境适宜的条件。
(4)检测rhEPO的体外活性需用抗rhEPO的单克隆抗体。单克隆抗体的优点是__________________________，并可大量制备，它是由小鼠的骨髓瘤细胞与其特定 B淋巴细胞通过____________技术获得的杂交瘤细胞分泌的。

【推荐2】甜蛋白是一种高甜度的特殊蛋白质，某甜蛋白基因编码区共含1178个碱基对（如图1）。为改善黄瓜的品质，科学家将该甜蛋白基因成功导入黄瓜细胞，得到了转基因植株。科学家利用PBI121质粒（如图2），以及两种限制酶，运用农杆菌转化法，将该甜蛋白基因导入黄瓜试管苗叶片细胞，再经植物组织培养获得甜蛋白基因过量表达的转基因黄瓜植株。请回答下列问题：

   

(1)限制酶切割DNA分子的时候破坏的化学键是____________。上述实现转基因技术过程中，科学家利用了如图2所示PBI121质粒，为了保证目的基因能够正确插入质粒，切割目的基因及PBI121质粒可用的限制酶为____________，该过程属于基因工程的核心工作——_____________，若重组质粒利用SacI和HindⅢ切割后能得到_________bp左右的片段，则表明目的基因正确插入质粒。
(2)转入甜蛋白基因后的黄瓜细胞，转化后应在培养基中添加________（填“新霉素”或“卡那霉素”或“新霉素和卡那霉素”），筛选转化成功的愈伤组织。若要获得产甜蛋白能力更强的基因，可以对甜蛋白基因进行改造，最终得到更多的甜蛋白，该过程可以通过蛋白质工程完成，基本思路为_____________（用文字和箭头表示）
(3)下表是鉴定含甜蛋白基因黄瓜植株的4种方法。请预测同一后代群体中，通过4种方法检出的含甜蛋白基因黄瓜植株的比例，

方法	检测对象	检测目标	检出的含甜蛋白基因植株的比例
PCR扩增	基因组DNA	甜蛋白基因	P1
分子杂交	总mRNA	甜蛋白基因转录产物	P2
抗原——抗体杂交	总蛋白质	甜蛋白基因编码的蛋白质	P3
测甜度	黄瓜	含甜蛋白基因黄瓜	P4

从小到大依次是___________________。

【推荐3】抗体分子含有两条短肽和两条长肽链，科研人员将小鼠编码抗体（抗禽流感病毒HA抗原）可变区的基因片段与人编码抗体恒定区的基因片段整合，构建图1所示表达载体（HindⅢ等表示不同限制酶的切割位点，EcoRV识别序列和切割位点是GAT↓ATC），导入中国仓鼠卵巢细胞后，筛选能够稳定表达的细胞株，成功获得大量嵌合抗体（图2）。请根据资料回答下列问题：

(1)为构建人鼠嵌合抗体基因表达载体，需要对编码抗体不同片段的基因进行重组，为此需从分泌鼠源单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取________，经逆转录得到________用于PCR扩增，并分别与人抗体的恒定区DNA序列拼接。
(2)在PCR反应体系中需加入模板、________、Taq酶、引物、缓冲液等，扩增过程中高温处理的目的是________。若利用PCR技术扩增某基因片段时消耗了126个引物分子，则该过程扩增了________次。
(3)图1所示表达载体中除标注出的结构外还必须有________，图中①是________识别和结合的部位。构建该基因表达载体时，先将人抗体的长链、短链基因部分序列分别与相应鼠抗体的可变区序列整合后插入到两个启动子的下游，这过程需要用到多种限制酶，如获得鼠抗体长链可变区基因用________酶切；图中⑤和⑥用________（填“T₄DNA”或“E·coliDNA”）连接酶连接。
(4)将重组质粒导入中国仓鼠卵巢细胞后，可采用________技术检验基因是否成功转录。通过基因工程技术成功表达并组装出有生物学活性的嵌合抗体，该嵌合抗体的优点是________。

【推荐1】人胰岛素基因表达的最初产物是一条肽链构成的胰岛素原，切除部分肽段（C肽段）后形成成熟的胰岛素，如图1所示。科学家据此提出了利用基因工程改造的大肠杆菌生产人胰岛素的两种方法：AB法是根据胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列人工合成两种DNA片段，利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素；BCA法是利用人体某细胞中的mRNA得到胰岛素基因，表达出胰岛素原后再用特定酶切掉C肽段。这两种方法使用同一种质粒作为载体。


(1)BCA法是从人体______细胞中获取mRNA，再由mRNA逆转录得到胰岛素基因。获取的目的基因中不含人胰岛素基因启动子的方法是______（填“AB”或“BCA”或“AB和BCA”）法。启动子是______酶识别和结合的位点，驱动转录。
(2)图2是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。为使目的基因与载体正确连接，在设计PCR引物时可添加限制酶______的识别序列。通过添加保护碱基序列可以延长限制酶识别序列一端的碱基数，从而提高限制酶识别及切割的效率，保护碱基序列应添加在限制酶识别序列的______（填“3'”或“5'”）端。根据上述信息，以下序列中适合作为上游、下游引物（GGG是保护碱基序列）分别是______、______。
a：5'-GGGCAATTGATGCCAATC-3'                           b：5'-GGGCTCGAGATGCCAATC-3'
c：5'-CAATTGGGGGTAGTCGAA-3'                           d：5'-GGGGAATTCATGCCAATC-3'
e：5'-GGGCAATTGGTAGTCGAA-3'                           f：5'-CTCGAGGGGATGCCAATC-3'
g：5'-ATGCCAATCGGGCTCGAG-3'                           h：5'-GGGCTCGAGGTAGTCGAA-3'
(3)将重组质粒导入大肠杆菌可采用的方法是______。β-半乳糖苷酶可以分解无色的Xga I产生蓝色物质，筛选导入重组质粒的大肠杆菌时，应在培养基中加入______和______物质，应选择培养基上______（“蓝色”或“白色”）的菌落，原因是______。

【推荐2】科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstI、SmaI、HindIII、AIuI等四种限制性核酸内切酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（amp^t为抗氨苄青霉素基因），其中①∽④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，I、II表示相关结构或细胞。请据图作答：

（1）在构建重组DNA时，可用一种或多种限制性核酸内切酶进行切割，为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实验中应该选用限制性核酸内切酶______________分别对鱼抗冻蛋白基因和质粒进行切割，切割后产生的DNA片段分别为__________、_________种。
（2）基因工程中核心步骤是_________（填序号）,该步骤的目的是_________________________。为了使目的基因正常表达，其首端必须有启动子，它是___________识别和结合的部位。若限制酶切出了平末端，要选择___________进行连接。（填“E·coliDNA连接酶”或“T₄DNA连接酶”）
（3）图中将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞的方法称为____________________。它是利用运载体Ti质粒中含有___________，可以将目的基因整合到宿主细胞的染色体上。
（4）检测番茄植株细胞中鱼抗冻蛋白基因是否成功表达，从分子水平常采用的方法是________。