【推荐1】研究表明燕窝具有增强免疫力、调节血压和提高代谢机能等多方面功效，其主要功能成分是唾液酸。某小组通过实验测定了燕窝和燕窝酶解产物低聚肽中唾液酸的含量，结果如下表。欲研究燕窝和燕窝低聚肽对细胞毒性T细胞（T细胞）增殖效果和增强自然杀伤细胞（NK细胞）活性方面的作用，以佐证增强免疫力的效果。请你利用以下材料和用具，完成实验步骤，并按要求呈现实验结果。
材料和用具：健康小鼠若干、燕窝、燕窝低聚肽、生理盐水等（注：T细胞从小鼠脾脏中研磨后分离提取；NK细胞活性需通过淋巴瘤YAC细胞来实现，具体检测方法不作要求，若采用分组请用符号A、B等表示）。
燕窝及燕窝低聚肽中唾液酸含量分析结果

样品	检测次数	唾液酸含量（%）	唾液酸含量平均值（%）
燕窝	1	11.57	11.6
	2	11.62
	3	11.61
燕窝低聚肽	1	14.29	14.3
	2	14.32
	3	14.29

(1)唾液酸是燕窝糖蛋白中的糖基，唾液酸与蛋白质结合需要在细胞中的______中完成，实验中为了防止实验偶然性对实验结果造成干扰所采用的措施是________________________。
(2)实验思路：
①选取15只生长状况相似的健康小鼠，分为A、B、C三组，其中C组为对照组，每组5只小鼠。
②A组、B组和C组分别喂养等量且适量的燕窝溶液、燕窝低聚肽溶液和生理盐水。
③在相同且适宜条件下喂养14天后，分别取鼠脾脏______后，提取T细胞和NK细胞。
④分别测定各组样品中的细胞毒性T细胞数量和NK细胞对____________活性，取平均值。
⑤统计分析实验所得数据。
(3)实验结果：在增强K细胞活性方面，实验组效果强于对照组，而实验组之间无显著差异。请设计一个坐标系，并以柱形图的形式表示相应的结果____________。
(4)分析与讨论
①小鼠脾脏细胞中的细胞毒性T细胞是在______器官中发育成熟的，实验结果表明______提高免疫力的效果更佳。
②向淋巴瘤YAC细胞培养液中加入______激素，有利于提高其克隆率。

【推荐2】有些病原体侵入机体后，可以在机体的细胞内存活、繁殖，并在细胞间传播，称为胞内感染。研究人员为了探讨机体对这些胞内感染病原体的免疫作用，用小鼠做了下表所列的实验。

分组	处理
A	幼年时被切除胸腺，成年后让其接受某种胞内感染病原体的感染
B	？
C	幼年时被切除胸腺，成年后注射来自同种小鼠的T细胞并接受胞内感染病原体的感染
D	对幼年小鼠的处理同B组，成年后注射抗T细胞血清并接受胞内感染病原体的感染

(1)若通过A、B两组分析切除胸腺对机体免疫的影响，则B组进行的处理是________。
(2)若将A组实验中的幼年小鼠替换成成年小鼠进行重复实验，实验结果________（填“一致”或“不一致”），原因是________。
(3)对四组小鼠进行器官移植，移植器官更易在_________组小鼠体内存活，原因是________。
(4)如果从已对胞内感染病原体免疫的小鼠体内提取淋巴细胞，注射到未接触过该病原体的小鼠体内，_______（填“能”或“不能”）使该小鼠获得对该病原体的持久免疫力，理由是__________。

【推荐3】肿瘤相关成纤维细胞（CAF）存在于各种实体肿瘤中，是肿瘤微环境建立的基础，对肿瘤发生、发展和转移起促进作用。树突状细胞（DC）是一种抗原呈递细胞（下图）。科研人员通过细胞融合技术制备了DC/CAF融合细胞疫苗，用于靶向CAF的肿瘤免疫治疗。

(1)DC将抗原摄取、加工处理后，在其表面形成的_____与辅助性T细胞表面的受体特异性结合，在CD80或CD86等分子的共同作用下，激活辅助性T细胞。活化的辅助性T细胞参与_____（细胞免疫/体液免疫/细胞免疫和体液免疫）。
(2)分别从肿瘤组织和骨髓中分离出CAF和DC，诱导融合后进行_____得到DC/CAF融合细胞，加入动物细胞培养液并置于CO₂培养箱中培养，进而可获得DC/CAF融合细胞疫苗。该融合细胞疫苗的特点不包括_____（填选项字母）
A、通过激活自身免疫系统特异性杀伤CAF而发挥作用
B、融合细胞呈递的抗原种类比转特定CAF抗原基因的DC更多
C、DC来自患者自身，不会引起免疫排斥
D、只对单一肿瘤的治疗有效
(3)检测DC/CAF融合细胞表面相关分子的表达量发现，未活化的DC与CAF融合后表现出活化DC的特性，可能的原因是_____。
(4)研究人员将DC/CAF融合细胞与辅助性T细胞共培养，以_____为对照，一段时间后检测_____（写出两项）等相关指标，结果表明融合细胞能更有效地活化辅助性T细胞。进一步将用DC/CAF融合细胞激活的辅助性T细胞注射到肿瘤模型小鼠体内，若检测结果为_____，则说明该融合疫苗具有治疗肿瘤的作用。

【推荐1】如图是将某抗原基因导入大肠杆菌内制备“工程菌”的示意图，图中BamHI、EcoRI、SmaI、HindⅢ分别代表相应的限制酶。回答下列问题：

（1）获得抗原基因的途径可以是以抗原蛋白的mRNA为模板，在______酶的催化下，获得所需基因。
（2）利用质粒作为运载体时，常常需要对天然质粒进行改造，若图中P为启动子，它是_____的位点；青霉素抗性基因和四环素抗性基因可作为____基因，其作用是_____。
（3）利用PCR技术扩增抗原基因时，需要在反应体系中添加的物质有_____、成对的_______、4种dNTP和热稳定性DNA聚合酶等，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。
（4）构建重组质粒时，一般使用BamH I和HindⅢ对含抗原基因的DNA片段和质粒分别进行切割，而不单独使用EcoR I切割，是由于BamH I和HindⅢ共同切割可以防止_____。筛选该工程菌时应进行两次筛选，先在添加____的培养基中选出导入质粒的大肠杆菌单菌落，将单菌落分别接种到液体培养基中，培养一段时间后，取菌液在添加_____的平板上划线，将导入重组质粒的工程菌筛选出来。

【推荐3】图1为Ti质粒的部分结构示意图，①～⑥为部分限制酶识别位点，LB与RB为T－DNA左边界序列和右边界序列，tms与tmr为激素基因，Tet^r为四环素抗性基因，Ori为复制原点，Pro为启动子。图2为部分限制酶及其识别序列与切割位点。回答下列问题：

(1)研究人员分别将质粒A（结构如图1）、质粒B（去除了图1中tms与tmr的Ti质粒）、质粒C（去除了图1中LB或RB的Ti质粒）导入不含质粒的农杆菌中，将导入质粒的农杆菌与植物外植体分别共培养后，研究人员认为LB与RB是T－DNA进入植物细胞不可缺少的结构，与该结论相对应的实验结果是______。为获得胚状体或试管苗，研究人员用携带了质粒B的农杆菌侵染植物，而不用携带质粒A的农杆菌，原因最可能是______。
(2)在农杆菌侵染植物的过程中，农杆菌会产生酶甲，甲将T－DNA的一条核苷酸链切割下来，该单链进入植物细胞后形成双链，甲识别与切割的序列应为T－DNA中的______，甲______（填“属于”或“不属于”）限制酶，理由是______。在利用质粒B构建表达载体时，需在目的基因的首尾两端添加限制酶的识别序列，在目的基因尾端最宜添加的序列是______，理由是用该限制酶处理质粒与目的基因时______。

【推荐1】L-肉碱具有参与脂肪氧化、抗疲劳、延迟患阿尔茨海默综合症等功能。据报道大肠杆菌能将巴豆甜菜碱转化成L-肉碱，但效率较低。科研人员通过基因工程将BCD基因、F基因以及T基因导入到大肠杆菌细胞内以提高L-肉碱的转化率。实验过程及结果如下图所示，分析并回答下列问题：

（1）实验过程中用PCR技术获得目的基因，PCR反应体系需要加入的有机物有DNA模板、dNTP、耐高温DNA聚合酶和____________。实验过程中不能将BCD基因、F基因以及T基因直接导入到大肠杆菌细胞内，而是构建重组质粒后再导入大肠杆菌，原因是____________，并能遗传给下一代.图中两个重组质粒目的基因的首端都含有启动子T7，T7是____________识别和结合的部位，能驱动基因转录。
（2）将重组所粒1和重组质粒2导入大肠杆菌时，应用________处理大肠杆菌，使细胞处于________的感受态。
（3）为了筛选出同时含有BCD基因、F基因以及T基因的大肠杆菌，实验的思路是_______________。
（4）研究发现巴豆甜菜碱转化成L-肉碱是一个可逆反应过程，得到的工程菌在含有巴豆甜菜碱培养基中培养2小时后，L-肉碱的含量基本稳定，此时可以____________________________________，以提高产量。

【推荐2】三氯生是一种抑菌物质，具有优异的贮存稳定性，可以替代抗生素用于基因工程中筛选含目的基因的受体细胞。已知fabV（从霍乱弧菌中发现的烯脂酰ACP还原酶）基因可以使大肠杆菌抵抗三氯生。

(1)通过PCR方法获取fabV基因时，Taq酶只能从_____________延伸DNA链，而不能从头开始合成DNA，因此需要先根据____________设计两种特异性引物序列。反应体系的初始温度设置在90~95℃的目的是____________。
(2)在④步骤中，科研者需将大肠杆菌菌液利用_____________法接种到加有____________的细菌培养基上，待菌落长成后，直接挑取菌落加入到PCR反应系统中进行基因鉴定。PCR过程中不需要先提取细菌DNA的原因是____________。
(3)某科研团队将可以受温度调控的基因插入上述选出的重组质粒中，构建了温度调控表达质粒（如图2）。其中C基因在低温下会抑制P₁，R基因在高温下会抑制P₂。如果将lacZ基因和GFP基因插入图2质粒中，使得最后表现为低温下只表达GFP蛋白，而高温下只表达lacz蛋白。则lacZ基因插在____________之间，GFP基因插在____________之间。

【推荐3】研究发现，拟南芥的ATMYB44基因与ATMYB77基因均可以参与拟南芥耐旱性的调控。为提高水稻的耐旱性，科研工作者将一个拟南芥ATMYB44基因导入野生水稻的叶肉细胞中，经组织培养后获得了一株耐旱水稻植株M。让植株M自交得到F₁，F₁中耐旱植株：不耐旱植株=3：1.回答下列问题：
(1)科研人员提取拟南芥细胞中的ATMYB44基因的mRNA后通过逆转录可获得ATMYB44基因，通过该方法获得的ATMYB44基因与拟南芥细胞中的ATMYB44基因的DNA序列_____（填“完全一致”或“不完全一致；），原因是_____。
(2)科研工作者认为拟南芥ATMYB44基因已经成功导入了水稻细胞的染色体DNA上，根据题中信息分析，作出这一判断的依据是_____。进一步研究发现该基因己经导入了水稻细胞的J号染色体上。
(3)F₁自交，收获F₁中耐旱植株上的种子进行单独种植，其中不发生性状分离的植株约占_____，F₂中耐旱植株：不耐早植株=_____。科研人员通过反复自交，从中筛选出不发生性状分离的耐旱植株记作纯合品系甲。
(4)利一研工作者采用相同的方法将一个拟南芥AT MYB77基因导入野生水稻的叶肉细胞中，获得了耐旱的纯合品系乙。为探究AT MYB77基因是否也位于水稻细胞的5号染色体上，以纯合品系甲和纯合品系乙为材料设计最简便的遗传实验来探究，写出实验思路及预期的结果和结论，不考虑染色体互换及其他变异。
实验思路：_____。
预期结果和结论：若_____，则AT MYB77基因导入了水稻细胞的5号染色体上；若_____，则AT MYB77基因未导入水稻细胞的5号染色体上。

【推荐1】血栓调节蛋白（TM）只能在血管内皮细胞中合成，具有调节凝血的功能。为了解决异种器官移植时引起凝血紊乱的问题，科研人员研究制备了猪血管内皮特异性表达人血栓调节蛋白（hTM）的转基因猪。下图表示部分研究过程，请回答：

注：ori为复制原点，T为终止子，puro为嘌呤霉素抗性基因，pTM为猪血栓调节蛋白，相关限制酶识别序列及切割位点如表：

限制酶	XhoI	claI	EcoRV
识别序列及切割位点	C↓TCGAG	AT↓CGAT	GAT↓ATC

（1）步骤①使用的限制酶是____________，质粒中插入pTM启动子的目的是____________。
（2）步骤②中研究人员设计并合成了以下引物。合成这些引物的原料是____________，引物设计的依据有____________、____________。
引物1：ATCGATATGCTTGGGGTCCTGGTCCTTGGC
引物2：GATATCTCAGAGTCTCTCCGCCGTCCGCTC
（3）将步骤③获得的质粒经XhoI、 EcoRV酶切后电泳，结果如图，据结果可判断目的基因________（填“成功插入或“未插入”）质粒。

（4）质粒3经电转染导入猪胎儿成纤维细胞并接种至培养皿中培养48h后经____________处理分散成单个细胞，再按每孔一个细胞接种至96孔板（如图）中，加入____________筛选获得抗性细胞，再提取抗性细胞的DNA进行PCR鉴定，将呈阳性的细胞留存待用。

（5）取留存细胞的细胞核，显微注射到____________中，再经过____________技术获得能表达人血栓调节蛋白的转基因猪。

【推荐2】[生物—选修3：现代生物科技专题]
2016年9月英国《新科学家》杂志披露：美国华裔科学家张进团队利用“三父母婴儿”技术，使一对约旦夫妇成功产下一个健康男婴（婴儿母亲的线粒体携带有亚急性坏死性脑病基因，曾导致多次流产、婴儿夭折）。所谓“三父母婴儿”技术，是指利用有线粒体基因缺陷的女性卵子中的健康细胞核和捐赠者去掉细胞核的卵子，“拼装”一个新的卵子，再通过一系列现代生物技术，最终培育出正常婴儿的技术。请回答下列问题：
（1）为重新“拼装”卵子，需要通过显微操作进行_____。接下来他们又使用电脉冲方法来______“拼装”的卵子。
（2）在对“拼装”卵子体外受精前，需要对收集的精子进行_______处理，哺乳动物的处理方法有化学诱导法和____________两种。
（3）受精卵形成后，应将其移入______中继续培养。人的体外受精胚胎，即试管胚胎，可在8—16个细胞阶段进行__________________。
（4）张进告诉记者：他们碰巧、也是故意要“制造”男孩。因为男性的线粒体_______（填“会”或“不会”）不会传给下一代，理由是_________________________。

【推荐3】研究表明羊乳中的β-乳球蛋白（BLG）是人体主要过敏源，图为研究人员利用基因编辑技术敲除山羊中BLG基因同时敲入人乳铁蛋白（hLF）基因并获得转基因山羊的操作过程。
图中sgBLG /Cas9复合物中，sgBLG为能准确识别图中山羊DNA特定序列的RNA，并引导Cas9蛋白对DNA进行切割。检测发现过程②中，hLF基因成功插入在母羊乙成纤维细胞中的一条常染色体上。

(1)上述操作过程中的目的基因是______，获得该目的基因的主要方法是______。
(2)Cas9蛋白类似于基因工程中常用到的____酶，但Cas9蛋白特性与该酶的区别是___。
(3)图中复合物1 所识别的DNA序列为5’-TATACTGGC-3’，则sgBLG的序列为 。（单选）

A．5’-AUAUGACCG-3’	B．5’-GCCAGTATA -3’
C．5’-ATATGACCG-3’	D．5’-GCCAGUAUA-3’

(4)下列①—⑥生物技术中，过程①②运用到的技术有_____，过程③④⑤中，运用到的技术有______。（编号选填）
①显微注射技术②动物细胞培养技术③胚胎移植技术④DNA重组技术⑤动物细胞融合技术⑥细胞核移植技术
(5)与图中获得的转基因山羊性状最相似的是母羊      。（单选）

A．甲

B．乙

C．丙

D．丁

(6)科研团队想进一步获得纯合能稳定遗传“人乳铁蛋白基因”的转基因山羊，其技术路线的设计思路是________________。