【推荐1】幽门螺旋菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：

请回答：
（1）在微生物培养的样品稀释和涂布平板步骤中,下列选项不需要的是 _________ (填序号)。
①酒精灯   ②培养皿   ③移液管   ④显微镜   ⑤涂布器
（2）在涂布平板时,取少量菌液滴加到培养基表面的原因是____________________。
（3）在配制培养基时，要加入______和_________指示剂，这是因为Hp含有脲酶，它能以尿素为氮源；若有Hp ，则菌落周围会出现______色环带。
（4）临床上用¹⁴C呼气试验检测人体是否感染Hp ，其基本原理是_____________。
（5）上述（3）中的指示剂出现对应的颜色是因为____________________________。

【推荐2】塑料污染是当今世界面临的一大环境问题，如何有效回收利用塑料成为迫切的课题。目前已经发现了一些能分解塑料的微生物，但它们的分解酶在工业应用时，通常只能在30℃以上的温度下才有效。最近，科学家们发现了一种能在低温下分解和消化塑料的微生物，这可能是微生物回收领域的一次科学飞跃。回答相关问题：
(1)欲分离低温下降解塑料的微生物，需从__________的土壤中取样，利用__________（从功能角度）培养基分离，相比普通培养基，该培养基添加的特有物质为__________。
(2)分离过程中，培养基平板上获得的低温降解塑料微生物菌落，纯化培养时通常需要将接种培养基与未接种培养基同时培养，设置对照组的目的是______________________________。
(3)科研小组将100 mL含有塑料分解菌的土壤样品溶液稀释10⁴倍后，取0.1 mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为150个，则1 L原菌液中有塑料分解菌约有__________个。通过该方法测量的菌落数值与实际值相比一般会少的原因是____________________。
(4)与之前发现的塑料分解菌相比，利用该菌分解塑料的优点在于_____________，欲临时保藏纯化得到的高效菌，可进行的操作是_____________________。

【推荐3】反硝化细菌能在无氧环境中将硝酸盐转化为氮气（2NO₃^-+10e^-+12H⁺→…N₂O→N₂），在处理工业污水、治理水体富营养化中具有重要作用。科研人员想从一污水处理厂的活性污泥中筛选分离出耐高温（42℃）的反硝化细菌（目的菌），用于提升温度较高的工业污水的脱氮效率，具体流程如图所示（BTB培养基初始pH=6.8，BTB是酸碱指示剂，酸性条件下为黄色，中性条件下为绿色，碱性条件下为蓝色）：

(1)BTB培养基灭菌后待平板凝固后，应倒置放在超净台上，目的是___________。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，目的是___________。
(2)将污泥样品梯度稀释后，使用__________（填工具）将样液均匀涂布在BTB培养基上，放在__________环境中培养2~3天后，挑选周围显__________色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。
(3)将纯菌株接种在液体培养基上培养一段时间，若在培养瓶顶部检测到N₂O，即可鉴定为目的菌。不能依据培养液中硝酸盐的浓度变低来鉴定目的菌，原因是__________。
(4)为保持纯化后的微生物菌种的纯净，需要对菌种进行保藏。临时保藏的方法具有___________等缺点，它比较适合那些使用频率高的菌种的保藏。
(5)C/N（碳氮含量比）对反硝化效率有一定的影响。科研人员测得不同C/N条件下目的菌对硝酸盐的去除率，结果如图所示：

科研人员提出，在利用目的菌株处理工业污水时，需要适当向污水中投放少量淀粉，据图分析这样做的主要目的是__________。

【推荐1】dMAb技术是一种通过DNA编码产生单克隆抗体的技术，比传统单克隆抗体制备方法更有发展潜力。此前发表的研究显示，以埃博拉病毒为目标且高度优化的基于DNA的单克隆抗体，单次给药在小鼠血液中产生了高水平的抗体表现。下图表示dMAb技术在埃博拉病毒感染疾病的临床研究中的操作流程。回答下列问题：

(1)根据抵御埃博拉病毒的抗体的结构获得目的基因，常用PCR技术快速扩增目的基因。在扩增过程中，需要的原料是__________，将温度控制在90℃以上的目的是__________。
(2)构建重组质粒时，一般用相同的限制酶切割目的基因和Ti质粒的脱氧核苷酸片段，目的是__________。重组质粒中含有启动子，其作用是___________。
(3)单克隆抗体与埃博拉病毒结合利用的原理是___________。利用动物细胞融合技术生产单克隆抗体时，经选择性培养基筛选出的杂交瘤细胞还需要进行抗体检测，其目的是___________。与传统利用杂交瘤细胞生产单克隆抗体的技术相比，dMAb技术的优势是__________（写出2点）。

【推荐2】为提高棉花的耐盐能力，研究者将径柳匙叶草液泡膜Na^＋/K^＋逆向转运蛋白基因（TaNHX2基因）转移到棉花细胞内，获得耐盐棉花。下图为TaNHX2基因以及可与其连接的四种引物。回答下列问题：

(1)在目的基因的获取以及连接中都会用到限制酶，该酶主要来源于原核细胞，而原核细胞中DNA是裸露的，推断限制酶不切割自身DNA的原因是__________，可以看做是原核生物的“免疫系统”。
(2)通过反转录的方法获得的TaNHX2基因若要正常表达，需要在基因上连接调控序列__________，采用PCR技术对目的基因进行扩增时，需选用的引物为__________（填图中字母），该过程必须有引物的原因是__________。引物不能循环利用的原因是__________，因此在具体操作中应在PCR反应体系中源源不断地加入两种引物。
(3)我国在转基因棉花的培育上独创的方法是__________，为检测棉花转基因是否成功，可采用个体水平的检测方法，即__________，完成转基因的棉花表现出耐盐特性的机理是__________，使棉花耐盐性增强。

【推荐3】为生产高效价疫苗和简化计划免疫程序，科学家研制出基因工程乙肝-百白破（rHB-DTP）四联疫苗，经各项检测均通过rHB-DTP四联疫苗质检规程的要求。其有效成分是乙肝病毒表面抗原、百日咳杆菌、白喉杆菌和破伤风杆菌的四种类毒素。请分析回答下列问题：
(1)为获取百日咳杆菌类毒素的基因，可从百日咳杆菌的细胞中提取对应mRNA，在_____的作用下合成双链cDNA片段，因此获得的cDNA片段与百日咳杆菌中该基因碱基序列_____（填“相同”或“不同”）。
(2)由于乙肝病毒表面抗原的基因比较小，且核苷酸序列已知，因此获得此目的基因可采用的方法是_____。目的基因还可以从基因文库中获取，基因文库包括_____。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是_____。目前在PCR反应中使用Taq酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是_____。
(3)基因工程的核心是_____。如图为其模式图，若欲通过乳腺生物反应器生产预期蛋白质，图中序号[1]代表的是_____。

【推荐1】应用基因工程技术可以获得人们需要的生物新品种或新产品。请根据资料和图解回答下列     问题：
材料一：蜘蛛丝(丝蛋白)被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度,可制成防弹背心、降落伞绳等.蜘蛛丝还可被制成人造韧带和人造肌腱.科学家研究出集中生产蜘蛛丝的方法——培育转基因蜘蛛羊。
材料二：注射疫苗往往会在儿童和部分成年人身上引起痛苦,将疫苗藏身于水果蔬菜中,人们在食用这些转基因植物的同时也获得免疫力,因而无需免疫接种,这一新概念将引起疫苗研究的一场革命。

（1）过程①⑤所需要的工具酶有_____，构建的乙肝表面抗原蛋白基因表达载体一般由_____等部分组成。
（2）过程②是将重组质粒导入山羊受体细胞,受体细胞应选择_____，采用最多的也是最有效的导入方法是_____；过程⑥是将重组质粒导入莴苣受体细胞,受体细胞可为_____，采用最多的导入方法是_____。
（3）通过⑤⑥⑦培育转基因莴苣，相比诱变育种和杂交育种方法，具有__________和_____等突出优点。

【推荐2】下图表示利用基因工程培育抗虫棉过程的示意图。Ⅲ是导入目的基因的受体细胞，经培养、筛选获得一株有抗虫特性的转基因植株。经分析，该植株细胞中含有一个携带目的基因的DNA片段，因此可以把它看作是杂合子。已知几种氨基酸的密码子：甲硫氨酸(AUG)、甘氨酸(GGA)、丝氨酸(UCU)、酪氨酸(UAC)、精氨酸(AGA)、丙氨酸(GCU)，请根据下图结合你所学过的知识回答以下问题：

(1)①步骤为________，该过程是基因工程操作程序的核心，Ⅱ包括________、四环素抗性基因、启动子、终止子以及复制原点等。将Ⅱ导入双子叶植物棉花受体细胞最常用的方法是________。
(2)为在短时间内大量获得目的基因，可用_____扩增的方法，其原理是________。
(3)③过程的原理是________________________。理论上，在该转基因植物自交产生的F₁代中，仍具有抗虫特性的植株占总数的________。
(4)图中合成的多肽，其前三个氨基酸的序列是____________________。

【推荐3】糖尿病是一种常见病，其发病率有逐年上升的局势，治疗糖尿病少不了胰岛素。如图表示运用基因工程技术生产胰岛素的几条途径。据图回答下列问题：

(1)图中①过程为______________，构建之前可以根据___________设计引物，利用PCR技术对目的基因进行扩增。将重组质粒M转移到受体细胞A中常用的方法是_____________。
(2)过程③用到的技术手段有__________________________。
(3)过程②可用的方法是_____________________。导入该细胞后，需对该细胞进行组织培养，经________过程形成愈伤组织。
(4)若该转基因“胰岛素羊”乳汁中检测到胰岛素，该胰岛素与转基因“胰岛素细菌”产生的胰岛素相比不同之处是_____________________。其原因___________________。

【推荐1】嗜热土壤芽孢杆菌产生的β­葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：
Ⅰ.利用大肠杆菌表达BglB酶
(1)下图为质粒限制酶酶切图谱。BglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的BglB基因重组进该质粒，并且让其能够正常表达，扩增的BglB基因两端需分别引入_______和_______不同限制酶的识别序列。

(2)大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为_______________。
(3)本试验中，用PCR等技术检测受体细胞中是否含有BglB基因，应选用_____________的基因组DNA作模板。
Ⅱ.温度对BglB酶活性的影响
(4)据图2、3可知，80 ℃保温30分钟后，BglB酶会_______；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在_______。
A．50 ℃　　B．60 ℃　　C．70 ℃　　D．80 ℃

Ⅲ.利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性
(5)在PCR扩增BglB基因的过程中，加入诱变剂可提高BglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽孢杆菌相比，上述育种技术获取热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中_______。

A．仅针对BglB基因进行诱变

B．BglB基因产生了定向突变

C．BglB基因可快速累积突变

D．BglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变

【推荐2】埃博拉病毒（EBO）呈纤维状，EBO衣壳外有包膜，包膜上有5种蛋白棘突（VP系列蛋白和GP蛋白），其中GP蛋白最为关键，能被宿主细胞强烈识别。EBO是一种负链RNA病毒，即作为基因组的RNA进入细胞后必须先产生出与之互补的RNA，后者才是mRNA。
(1)EBO的病毒中必须有___酶，因为该酶是其宿主细胞中没有的又是病毒核酸复制必需的。而mRNA是___过程产生该酶的模板。
(2)以GP作为疫苗比减毒疫苗___（填“安全”或“不安全”），原因是___。
(3)科研人员利用经EBO免疫后小鼠的___细胞与鼠的瘤细胞进行杂交，获得纯净的单一品种抗体，其特点是___。
(4)为了从羊奶中分离纯化GP蛋白，科研人员将GP蛋白基因通过___（方法）导入___中，基因的首段必须含有使其仅能在羊的___中特异性表达的___。若用抗GP抗体检测早期胚胎培养液，正确的检测结果应该是___（填“阳性”或“阴性”），为了确认目的基因转化成功，需要进一步提取体外培养至___时期的胚胎的___细胞的DNA，用___技术进行检测。