【推荐1】乙型肝炎是由乙肝病毒（HBV）感染引起的。完整的HBV是由一个囊膜和核衣壳组成的病毒颗粒，其DNA分子是一个有部分单链区的环状双链DNA。如图所示为乙肝病毒在肝脏细胞中的增殖过程。请回答下列问题：

（1）②过程代表____________，需要__________酶参与。③过程除了图示的RNA以外还需要的核酸有________________。
（2）④过程代表____________，与①过程相比，其特有的碱基配对方式是_______________。①过程有可能发生基因突变，从而导致乙肝病毒变异。
（3）请写出人体内浆细胞中遗传信息的传递过程：______________。
（4）一个mRNA上连接多个核糖体叫做多聚核糖体，多聚核糖体形成的生物学意义是_________________。

【推荐2】果蝇的眼色由两对独立遗传的基因（A、a和B、b）控制，其中B、b仅位于X染色体上。A和B同时存在时果蝇表现为红眼，B存在而A不存在时为粉红眼，其余情况为白眼。
(1)果蝇被用作遗传学研究的实验材料是其具有哪些优点______（至少写出两点）
(2)一只纯合粉红眼雌果蝇与一只白眼雄果蝇杂交，F₁代全为红眼。则亲代雄果蝇的基因型为________________   若将F₁代雌雄果蝇随机交配，所得F₂代中粉红眼果蝇的比例为_____，在F₂代红眼雌果蝇中杂合子的比例为_____。
(3)果蝇体内另有一对常染色体的基因T、t与A、a不在同一对同源染色体上。当t基因纯合时对雄果蝇无影响，但会使雌果蝇性反转成不育的雄果蝇。让一只纯合红眼雌果蝇与一只白眼雄果蝇杂交，所得F₁代的雌雄果蝇随机交配，F₂代雌雄比例为3：5，无粉红眼出现。则亲代果蝇的基因型为______。F₂代雌果蝇共有_______种基因型；F₂代雄果蝇中含Y染色体的个体所占比例为______。若用带荧光标记的B、b基因共有的特异序列作探针，与F₂代雄果蝇的细胞装片中各细胞内染色体上B、b基因杂交，通过观察荧光点的个数可确定细胞中B、b基因的数目，从而判断该果蝇是否可育。在一个处于有丝分裂后期的细胞中，若观察到_______个荧光点，则该雄果蝇不育。
(4)果蝇的某些性状是由基因突变导致的，如果某基因突变前的部分序列（含起始密码信息）如下图所示（注：起始密码子为AUG，终止密码子为UAA、UAG或UGA）。

上图所示的基因片段在转录时，以_______链为模板合成mRNA；若“↑”所指碱基对缺失，该基因控制合成的肽链含_______个氨基酸。

【推荐3】阿尔茨海默症（AD）是一种神经系统退行性疾病，其发病的主要诱因是β—淀粉样蛋白（Aβ）在脑组织液中沉积，影响了神经小胶质细胞（MC细胞）的功能，发病机制模式图如图1，请回答下列问题：

（1）MC细胞接收到Aβ沉积的信号后，细胞质中经磷酸化的K酶可以______________IK磷酸化，磷酸化的IK蛋白很快就与NF蛋白分离，游离的NF进入______________内，与IL-1基因前端的调控序列结合，该基因通过______________过程合成IL-1mRNA，mRNA通过进入细胞质，经______________过程合成并分泌大量IL-1蛋白，诱发炎症，最终导致神经系统的功能障碍。
（2）为探明药物X治疗AD的机理，科研人员利用正常的MC细胞进行了相关实验，获得实验结果如图2。

由图2结果可知，药物X能够抑制Aβ的作用，判断的依据是___________。已知药物X对细胞核中NF蛋白含量无显著影响，综合图1和图2，药物X治疗AD的机理可能是___________。
（3）已知IK的磷酸化位点位于其末端肽段N。欲验证“IK磷酸化能诱发炎症”，请在空格处填入字母编号将实验设计补充完整（已有研究表明，实验中的肽段对细胞内NF蛋白的入核、IL-1蛋白的合成与分泌均无直接影响）。

分组	实验处理	炎症检测指标
对照组	①________ ②________	______
实验组	③______ ④c

a．细胞中导入与N的氨基酸种类、数目、序列相同的肽段
b．细胞中导入与N的氨基酸种类、数目、序列不同的肽段
c．加入溶于缓冲液的Aβ沉积物
d．加入与c等量的同种缓冲液
e．培养液中IL-1的含量
f．MC细胞中磷酸化IK与IK的比值

【推荐2】结核病是由结核杆菌引起的人畜共患病。结核杆菌通常以气溶胶形式传播，气溶胶颗粒被肺泡吞噬细胞吞噬，吞噬细胞破裂导致结核杆菌在机体内进一步传播。羊痒病是由正常细胞的非致病性朊蛋白异构化为痒病朊蛋白所致。为研制既能抗结核病又能抗羊痒病的双抗羊，科学家进行了如下操作。
(1)小鼠SP110基因是目前发现的具有抗结核杆菌感染功能的基因。研究人员为了验证SP110基因的功能，同时也为了验证山羊吞噬细胞特异性启动子MSR可以启动SP110基因在吞噬细胞内的表达，将MRS启动子与小鼠SP110基因形成融合基因，设计了下表所示的三组实验。

组别	主要操作	培养细胞后，使之破裂
对照组1	空质粒导入山羊肺泡吞噬细胞，接种适量结核杆菌	细胞培养72小时后，加入③_____，使吞噬细胞破裂，释放结核杆菌
对照组2	含有能广泛表达SP110基因的山羊肺泡吞噬细胞，①_____
实验组	②_____，接种等量的结核杆菌

取三组实验等量的细胞裂解液，用_____法培养，结果如下图1所示。由图可知小鼠SP110基因可用于双抗羊的研制，依据的实验现象是_____。

(2)非致病性朊蛋白是由山羊13号染色体上的PRNP基因的第三外显子控制合成的，PRNP基因的结构如图2．研究人员用新型基因敲除技术对体外培养的山羊成纤维细胞PRNP基因的外显子3序列实施定点敲除。请根据上述信息，设计一个检测敲除是否成功的思路：提取山羊成纤维细胞的DNA，根据_____设计引物进行PCR，并用_____作用于PCR产物后进行凝胶电泳，若仅获得一条电泳条带，说明定点敲除成功。

(3)用TALEN敲除载体与供体DNA表达载体（图4）共同转化体外培养的幼羊成纤维细胞，可将融合基因定点敲入PRNP基因的外显子3部位，原理如图3．请指出图4中数字1和2的分别代表的结构：1．_____、2．_____。经用_____法检测，山羊成纤维细胞中非致病性朊蛋白基因和SP110基因的表达情况是_____（填“两者均增加”或“两者均减少或不表达”或“前者减少、后者增加”或“前者增加、后者减少”）。

(4)欲用上述细胞获得双抗羊，需要用到的技术有_____（至少写出两项）。

【推荐3】人绒毛膜促性腺激素是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，由α链和β链（hCGβ）结合而成。近年研究显示，hCGβ可表达于结肠癌等多种恶性肿瘤细胞，与肿瘤的发生、发展及转移有一定关系。研发抗hCGβ疫苗已成为近年来肿瘤生物治疗新的热点，下图1为其制备的基本方案。请分析回答下列有关问题：

注1：甲序列指导合成的信号肽能引导后续合成的肽链进入内质网腔
注2：AOX1为甲醇氧化酶基因的启动子，只能在以甲醇为唯一碳源的培养基中正常表达
(1)图中hCGβ基因需要与甲序列一起构建形成融合基因，其目的是______。
(2)当目的基因两侧的小段序列与基因表达载体上某序列相同时，就可以发生同源切割，将目的基因直接插入。同源切割是一种代替_______将目的基因导入基因表达载体的方法。
(3)阶段Ⅱ将环化质粒导入CaCl₂处理的大肠杆菌，然后在含有______的培养基中筛选得到含hCGβ基因表达载体的大肠杆菌后进行扩增。
(4)鉴定基因表达载体。为了检验目的基因是否融合成功，提取大肠杆菌中的质粒为模板，设计相应的引物对融合基因进行PCR，再将扩增产物进行电泳。电泳后得到图2所示结果，据图可判断______号样品最符合要求。

(5)阶段Ⅳ需将处理后的酵母菌接种在培养基上培养，该培养基不需要添加以下哪些成分_____（a、氨苄青霉素       b、组氨酸       c、无机盐       d、琼脂），可在此培养基上生长的酵母菌即为含有hCGβ基因表达载体的目的菌株。将此菌株扩大培养后，离心取上清液，用______方法进行检测。若上清液中能检测到hCGβ蛋白，则说明hCGβ基因得以表达。
(6)从生产控制的角度分析，选用AOX1作为hCGβ基因启动子的优点是______。

【推荐2】重组人血小板生成素(rhTP0)是一种新发现的造血生长因子，如图为通过乳腺生物发生器产生rhTP0的相关过程。回答下列问题：

（1）构建重组质粒时选用的限制酶是__________，原因是_________。重组质粒中的标记基因是________，标记基因的作用是____________。
（2）图中所示的过程与胚胎工程相关的有_____________(至少写出两个)。
（3）若检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，检测方法是___________技术，其次还需检测目的基因____________，这是检测目的基因是否发挥作用的第一步，最后检测目的基因是否翻译成蛋白质。

【推荐1】多不饱和脂肪酸（PUFAs）是人体必需脂肪酸，猪肉是我国主要的肉类消费品，提高其PUFAs含量对居民健康具重要意义。为解决猪肉中PUFAs含量不足的问题，研究者从线虫中获得控制PUFAs合成的必需酶基因fat1，培育转fat1基因猪，操作过程如图1。图中GFP基因表达出绿色荧光蛋白。

       

(1)利用PCR技术扩增fat1基因时，应在两种引物的一端分别加上限制酶______________识别与切割的序列。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体一般选用两种限制酶，选择的原则是______________（选填下列选项）。
a、目的基因编码蛋白质的序列中有两种限制酶切割位点
b、表达载体内，每种限制酶只有一个切割位点
c、酶切后，目的基因两端的黏性末端序列相同
d、酶切后，载体形成的两个黏性末端序列不同
(2)图1中的连接产物需先导入大肠杆菌中的原因是______________。
(3)将重组表达载体转染猪成纤维细胞，另设一组空白对照。48小时后于荧光显微镜下观察到________________，说明转染成功。然后以转基因细胞为核供体构建克隆胚胎，最终获得转fat1基因猪。
(4)研究者提取转基因猪的基因组DNA，利用限制酶DraⅢ将其完全酶切并电泳分离。然后用探针通过______________的方法，检测fat1基因是否成功整合在猪基因组DNA中，酶切方式及检测结果如图2。

     

①转基因猪1、2、3中分别被转入了______________个fat1基因。
②该实验不能说明成功培育转基因猪，理由是__________________。

【推荐2】人乳铁蛋白对细菌、病毒和真菌等都有相应的抗性，从而被开发成食品添加剂和保健品等。研究人员为培育出转人乳铁蛋白基因（hLF）奶山羊进行了相关研究，部分过程如下图，其中pBLG为β-乳球蛋白基因启动子，GFP为绿色荧光蛋白基因，neo^r为新霉素抗性基因，BclI、EcoRI、San3AI和XbaI代表相关限制酶切点。请回答下列问题。

   

(1)过程①中，只能从人乳腺细胞中提取总RNA进行RT-PCR以获得人乳铁蛋白基因（hLF），其原因是____。RT-PCR过程中，所需的工具酶有______，为使获得的hLF基因与质粒定向连接，扩增时应选用的一对引物为_____。
a、5′-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3′
b、5′-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3′
c、5′-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3′
d、5′-GTTGAATTCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3′
(2)过程②中，应将hLF基因插入到pBLG之后，目的是_______。过程③中，使用人工膜制成的脂质体将重组质粒导入受体细胞，依据的主要原理是______
(3)将转染后的山羊耳成纤维细胞先置于含______的培养基中初筛培养，一段时间后，利用荧光显微镜观察并筛选出______的细胞进行PCR鉴定或培养。
(4)为促进转人乳铁蛋白基因奶山羊的繁育，科研人员在上述研究基础上进行了进一步试验，过程如下，请完成下表：

操作步骤	简要操作过程
受体母羊的选择与①_____处理	选择具有健康体质和正常繁殖能力的母羊并注射孕激素等
胚胎分割	用分割针将发育良好、形态正常的②_____均等分割
③_____	将盛有胚胎的移液管送入受体母羊子宫的相应部位，注入胚胎
妊娠检查	利用兽用B超诊断仪对受体母羊进行早期妊娠检查
转人乳铁蛋白基因奶山羊的选育	转人乳铁蛋白基因奶山羊进入泌乳期后，利用④______技术检测乳汁是否含有人乳铁蛋白，对符合要求的个体进行繁育

【推荐3】基因工程在医药卫生、农牧业等方面应用广泛。请回答：
（1）p53基因是人体内的一种抑癌基因，其主要作用是___________，因此，p53基因与腺病毒拼装而成的重组病毒导入人体可用于肿瘤治疗。拼装该重组病毒所需的工具酶有_________________。
（2）用上述重组病毒治疗肿瘤，在再次给药时，重组病毒常常无法或很少能进入靶细胞，从而影响治疗效果。你认为原因是什么？________
（3）基因工程技术可以使母羊成为乳腺生物反应器，通过母羊分泌的乳汁来生产人抗凝血酶Ⅲ等药用蛋白。在具体操作过程中，要用_________法把目的基因导入受精卵并培养成早期胚胎。在胚胎移植前，还要取用囊胚的_______________细胞进行性别鉴定。构建基因表达载体时，必须把目的基因与羊乳腺分泌蛋白基因的启动子结合在一起。使用该启动子的原因是_____________________。