【推荐1】紫杉醇是红豆杉产生的一种重要抗癌物质，利用植物组织培养技术获得紫杉醇的基本过程如图所示。回答下列问题：

(1)用纤维素酶和果胶酶对愈伤组织进行处理的目的是____。该植物组织培养过程属于____（A.器官发育水平       B.个体发育水平       C.都不是）。
(2)如要将外源基因导入红豆杉细胞进行遗传改造，图 1 表示构建重组 DNA 的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因（tet^r）和氨苄青霉素抗性基因（amp^r），回答下列问题：

①图中酶 1 和酶 3 分别是______；②为筛选出含重组质粒P3 的菌落，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到甲、乙、丙三类菌落，三类菌落形态相同，生长情况如图 2 所示，应选择的菌落类型是_____类，未转入质粒的菌落类型是____类（填字母类型）；③为鉴定筛选出的菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR 鉴定。甲、乙、丙 3 条引物（目的基因中的→表示复制方向）在正确重组质粒中的相应位置如图 3 所示，PCR 鉴定时应选择的一对引物是_____，某学生尝试用图中另外一对引物从某一菌落的质粒中扩增出了 400bp 片段，原因是______。

【推荐2】PCR技术是20世纪80年代发展起来的新技术，广泛用于分子生物学、基因工程及其他与DNA鉴定相关的领域，如疾病检测、法医鉴定等。通过咽拭子取样进行RT-PCR技术检测是目前临床上诊断新型冠状病毒感染疑似患者的常用方法，用于核酸检测的RT-PCR试剂盒的部分工作原理简图（如图所示）:

(1)RT-PCR是指以病毒的RNA为模板通过__________过程合成cDNA，并对cDNA进行PCR扩增的过程。利用RT-PCR试剂盒对新型冠状病毒进行检测时，除借助上述RT-PCR技术外，还需要有特异性探针，利用该探针对新型冠状病毒进行核酸检测的原理是__________。若用RT-PCT技术扩增胰岛素基因，应选择__________细胞提取RNA。
(2)PCR与体内DNA复制相比，不需要__________酶。利用PCR技术扩增目的基因的前提是__________。
(3)若将1个DNA分子拷贝10次，则需要在缓冲液中至少加入__________个引物。
(4)PCR反应中的每次循环可分为变性、复性、__________三步，其中复性的结果是__________。

【推荐3】花生中的白藜芦醇在人体中有抗氧化、抗炎症、预防心血管及肿瘤等疾病的作用。有研究发现白藜芦醇在植物抗病尤其是真菌类病害中发挥重要作用。科学家将白藜芦醇合酶基因PNRSC导入水稻中，使水稻获得了对稻瘟病（由真菌感染引起，导致水稻减产）的抗性。根据信息回答下列问题：

(1)科学家提取花生组织的mRNA后通过____________过程获得其cDNA。除cDNA、dNTP外，PCR反应还需要____________（写出3点）等物质条件才能顺利进行，经PCR技术扩增PNRSC基因。
(2)____________是培育抗稻瘟病水稻的核心步骤；为防止目的基因的反向连接，据图信息可知，应用限制酶____________处理质粒载体，用限制酶____________处理PNRSC基因。
(3)将得到的重组质粒导入水稻的愈伤组织中，再经___________过程得到转基因幼苗，该过程需在光照培养的原因是____________。
(4)将幼苗培养成植物体，用除草剂处理后得到能正常生长的植株并非都是抗稻瘟病水稻的原因是______。因此还应进行____________实验来确定其抗性。

【推荐1】中国女科学家屠呦呦获2015年诺贝尔生理医学奖，她研制的抗疟药膏青蒿素挽救了数百万人的生命。但是青蒿中青蒿素的含量很低，且受地域性种植影响较大。研究人员已经弄清了青蒿细胞中青蒿素的合成途径（如图实线框内所示），并且发现酵母细胞也能够产生青蒿素合成的中间产物FPP（如图虚线框内所示）。请回答问题：

（1）在FPP合成酶基因表达过程中，完成过程①需要______酶催化，完成过程②需要的物质有___、___、
（2）根据图示代谢过程，科学家在设计培育能生产青蒿素的酵母细胞过程中，需要向酵母细 胞中导入___、 等基因。
（3）实验发现，酵母细胞导入相关基因后，这些基因能正常表达，但酵母合成的青蒿素仍很少，根据图解分析原因可能是______，为提高酵母菌合成的青蒿素的产量，请提出一个合理的思路_________。
（4）利用酵母细胞生产青蒿素与从植物体内直接提取相比较，明显的优势有_____、____ 、____ 等。

【推荐2】某学校研究小组准备克隆含有SLA﹣2基因的质粒，首先构建该基因的表达载体，然后通过大肠杆菌进行克隆重组质粒，下表为不同限制酶的识别序列及切割位点。请回答下列问题：

限制酶	BclⅠ	NotⅠ	XbaⅠ	Sau3AⅠ
识别序列及切割位点	T↓GATCA	GC↓GGCCGC	T↓CTAGA	↓GATC

       
(1)图1过程①中，PCR扩增SLA﹣2基因需要的酶是 _______________需要 _____种引物参与。
(2)在进行图1的②过程之前，需切割目的基因和质粒，选用的限制酶是 ______________，③过程初步筛选导入重组质粒的大肠杆菌，应在含 __________（抗生素）的培养基上培养。
(3)在培养大肠杆菌前，检测培养基平板灭菌是否合格的操作是 ____________________。用稀释涂布平板法统计细菌数目时，统计的菌落数往往 _______（填“多于”或“少于”）稀释液中的活菌数，原因是 ____________________。若其中一个平板的菌落分布如图2，推测该同学接种时可能的操作失误是 __________。

【推荐3】甜玉米与普通玉米相比，甜玉米中可溶性糖向淀粉的转化较慢含可溶性糖量高，汁多质脆，富含多种维生素。为了使甜玉米更富有生产应用价值，科研人员通过转基因技术培育出了超量表达P蛋白转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图1所示，P蛋白在玉米株系的表达量如图2所示。回答下列问题：

(1)强启动子是一段有特殊结构的DNA片段，能被________识别并结合，驱动基因的持续转录。为使P基因在玉米植株中超量表达，应优先选用________酶组合，将片段和Ti质粒切开后构建重组表达载体。TDNA在该实验中的作用是________。
(2)将农杆菌液浸泡过的玉米愈伤组织进行植物组织培养，培养基中需加入________进行筛选，筛选出的愈伤组织 ______形成丛芽，最终获得多个玉米株系a₁、a₂、a₃、a₄。通过对a₁、a₂、a₃、a₄四株甜玉米株系的蛋白质表达量进行测定结果如图2，其中a₄株系P蛋白表达量较低的原因可能是________。
(3)为了进一步提高甜玉米中淀粉的含量，科研人员提出通过降低淀粉酶合成有关基因的表达实现生产目标。研究人员研究发现吗啉反义寡核苷酸是一种RNA剪接抑制剂，将其注入植物细胞内会使基因表达受阻，科研人员将吗啉反义寡核苷酸导入玉米的受精卵中起到明显效果。针对它的具体作用，科研人员提出以下假说：
假说1：导致RNA前体上内含子1的对应序列不能被剪。
假说2：导致RNA前体上内含子1和外显子2的对应序列同时被剪切。
为了验证上述假说，分别从受精卵发育后3天的实验组和对照组胚细胞中提取______，逆转录形成______。
(4)在PCR反应体系中，需加入引物、模板基因、缓冲液、Mg^2＋等外，还需加入______等。PCR的反应程序为：94℃ 3min；94℃ 30s，58℃ 30s，72℃ 50s，30个循环。在循环之前的94℃ 3min处理为预变性；循环中72℃处理的目的是_________________。

【推荐1】目的基因在酵母菌细胞中表达出的蛋白可能被细胞内的蛋白酶降解，某科研团队构建重组表达载体解决了此问题。下图为该重组表达载体构建示意图，图中改造了的目的基因序列融合了信号肽的核酸序列S和2个合成的核酸序列Z，信号肽能引导融合蛋白出胞，折叠后的Z肽段能与抗体IgG结合。请据图回答有关问题：

(1)Ori是基因组的复制起始序列，是___酶的作用位点，该序列富含___碱基对。
(2)Plac是启动子序列，是___酶的作用位点，转录沿DNA模板链的___方向进行。
(3)双酶切是构建表达载体的重要环节，下列关于双酶切的叙述正确的是___。

A．目的基因内不能含有所选的酶切位点

B．2个酶切位点距离越近酶切效果越佳

C．若2种限制酶最适温度相差较大，应实行2次单酶切

D．确保酶切位点一个产生黏性末端另一个产生平末端，方可避免载体自连

(4)为使目的基因能定向插入载体，需对目的基因进行改造，通常的做法是___。检验表达载体是否已经准确连接了目的基因，需对扩增的表达载体再次双酶切处理，完全酶切后经电泳处理，理想的结果有___条条带。
(5)构建好基因表达载体后，需要用___处理菌体，使其处于___。

【推荐2】β-1，3葡聚糖酶可以水解许多病原真菌细胞壁外层的β-1，3葡聚糖和几丁质，降解真菌细胞壁，从而抑制真菌的生长与繁殖。研究人员在植物中克隆到β-1，3葡聚糖酶基因（BG2）并转入苹果主栽品种，以减少苹果真菌病害、实现无公害生产。据图回答下列问题：

(1)BG2的克隆可利用PCR技术，需要一小段能与该基因碱基序列互补配对的______作为引物，BG2在克隆前，需准备______种引物。
(2)上图为利用PATC940（经农杆菌Ti质粒改造获得）构建BG2抗病质粒的过程。图中右下处的酶为DNA连接酶，人工设计的复合启动子的作用是驱动转录和提高（增强）转录活性，它位于目的基因（BG2）的______（填“上游”或“下游”）。用Xba I 酶切、Spe I酶切、Not I酶切目的基因与PATC940的优点是构建基因表达载体时，可以防止______、______以及防止目的基因与质粒反向连接。
(3)中国科学家独创的一种方法，将Bt基因导入棉花细胞，这种方法是______，例如，可以用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入______中、研究人员将转入BG2抗病质粒的农杆菌与苹果外植体共培养，进行遗传转化。目的基因BG2将随着T-DNA转移到被侵染的细胞而进入细胞，并随其整合到该细胞的染色体DNA上。
(4)在完成遗传转化后，培养基中至少要加入两种抗生素，请推测其作用分别是：一种用于杀死农杆菌，另一种用于______。

【推荐3】某种转基因油菜的产油率明显高于普通油菜，原因是转入的基因A的表达产物可抑制油菜细胞内糖类和蛋白质的合成，促进丙酮酸大量转化为油脂。如图为科研人员培育产油率高的转基因油菜的主要过程示意图。请回答下列问题：

(1)获取基因A后可利用_____________技术对其进行扩增，一个基因A通过该技术进行n次循环，一共需要消耗___________对引物。
(2)我国科学家独创的将目的基因导入植物细胞的方法为______________。图中将目的基因导入植物细胞的方法为农杆菌转化法，转化是指_____________。
(3)过程①中，通常将基因A插入到Ti质粒T-DNA中的____________之间，以利于基因A的表达。过程④中，需要添加的具有启动细胞分裂、再分化作用的关键激素为____________。经图示过程获得的油菜是否为产油率高的转基因油菜，还需要对其进行____________的鉴定，该种鉴定方法属于个体生物学水平的鉴定，只有符合要求并通过安全性测试的转基因油菜才能推广并种植。

【推荐1】长春花是原产于非洲东海岸的野生花卉，其所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。基因tms的编码产物能促进生长素的合成，科研人员利用基因tms构建重组Ti质粒，对愈伤组织进行遗传改造，解决了长春碱供不应求的问题，操作流程如下。请回答下列问题：

(1)为获取tms基因，需要在春花细胞中提取_________，通过反转录产生cDNA，再通过_______技术进行快速扩增
(2)将上述方法获得的tms基因与长春花细胞中原基因的_________等调控组件重组，构建基因表达载体即重组Ti质粒，然后通过过程②导入愈伤组织中，过程②多采用的方法是_________。
(3)过程①是指_________，过程③与动物细胞培养的主要区别是不需要加入_________。
(4)长春碱杀死癌细胞的同时对正常细胞也有毒性作用，为降低长春碱对正常细胞的毒性，可以利用_________制备技术制成“生物导弹”进行靶向治疗。