【推荐1】斑马鱼的酶 D 由 17 号染色体上的 D 基因编码。利用转基因技术将绿色荧光蛋白基因（G）整合到斑马鱼 17 号染色体上，带有 G 基因的胚胎能够发出绿色荧光。具有纯合突变基因（dd）的斑马鱼胚胎会发出红色荧光。未整合 G 基因的染色体的对应位点表示为 g。图 1 和图 2 所示分别为实验所用的质粒上相关酶切位点以及含绿色荧光蛋白基因（G）的外源 DNA 片段上具有的相关酶切位点。据图回答下列问题：

（1）将绿色荧光蛋白（G）基因整合到斑马鱼 17 号染色体上的实验过程中，首先要将G 基因与质粒重组，此过程需要的两种工具酶是限制酶和_________。
（2）经筛选获得的重组质粒需要经显微注射到斑马鱼的_________细胞中加以培养、筛选。如果培养得到的胚胎能_________，说明 G 基因已经成功整合到染色体上并且该基因已经得以表达。
（3）用图 1 中质粒和图 2 外源 DNA 构建重组质粒，不能使用________切割，原因是 _______。如果要防止质粒和含目的基因的外源 DNA 片段自身环化，则应选择下列方法 ________为好。
①只使用 EcoR I 处理②使用 BamH I 和 SmaⅠ同时处理
③使用 BamH I 和 HindⅢ④使用 Sma I 和 HindⅢ同时处理
（4）现用转基因个体 N 和个体 M 进行如下杂交实验得到的子代胚胎表现型如图 3 所示，推测亲代 M 的基因型是_________。

（5）子代中只发出绿色荧光的胚胎基因型包括_________。
①DDGG②DDGg③DdGg④DdGG

【推荐2】新型冠状病毒（COVID-19）的核酸检测采用逆转录PCR技术。先将样本RNA逆转录成cDNA，再以DNA为模板进行扩增。请据此回答下列问题：
（1）样本RNA逆转录成DNA的原料是______________________。
（2）逆转录PCR反应中使用的DNA聚合酶是从水生栖热菌Thermus Aquaticus（Taq）中分离提取。该菌分离提取的DNA聚合酶优势在于_____________。
（3）逆转录PCR反应中热变性过程DNA结构的变化是__________________________。
（4）下表是用于COVID-19的cDNA扩增的两种引物序列，请据表回答相关问题：

引物名称	引物序列（5′-3′）
引物1	TTCGATGTTGAGGGTGCTCAT
引物2	TCACACCAGTTGAAAATCCTAATTG

①引物1对应的模板链序列为________________。
②下图为cDNA的部分序列，请问引物1和引物2分别对应的位置是_________

A．Ⅰ和Ⅱ             B．Ⅰ和Ⅲ             C．Ⅲ和Ⅳ             D．Ⅱ和Ⅲ
（5）PCR技术获取目的基因的优势是________________________________。
（6）能否利用COVID-19的遗传物质作为基因工程的载体?请说明原因_____________________。

【推荐3】【生物——选修3：现代生物科技专题】在药品生产中，有些药品如干扰素，白细胞介素，凝血因子等，以前主要是从生物体的组织、细胞或血液中提取的，由于受原料来源限制，价格十分昂贵，而且产量低，临床供应明显不足。自70年代基因工程发展起来以后，人们逐步地在人体内发现了相应的目的基因，使之与质粒形成重组DNA，并以重组DNA引入大肠杆菌，最后利用这些工程菌，可以高效率地生产出上述各种高质量低成本的药品，请分析回答下列问题：
（1）在基因工程中，质粒是一种最常用的基因的运载体，它广泛地存在于细菌细胞中，是一种拟核外能自主复制的很小的环状______分子。
（2）在用目的基因与质粒形成重组DNA过程中，一般要用到的工具酶是______________和 _______________。
（3）在将重组质粒导入细菌时，一般首先要用 _________处理细菌，使细菌细胞处于一种_________的生理状态；然后将重组质粒与这种感受态细胞混合，在一定的温度下促进该种感受态细胞完成 ________过程。
（4）将含有“某激素基因”的质粒导入细菌细胞后，能在细菌细胞内直接合成“某激素”，则该激素在细菌体内的合成先后包括 __________和 __________两个阶段。

【推荐1】在荧光素酶中加入相应的荧光素底物就可以发荧光。荧光素酶及其基因在生物研究中有着广泛的应用。请回答下列问题：
(1)荧光素酶基因可以人工合成，也可以从_______中获取。利用PCR技术扩增荧光素酶基因是利用_________的原理。
(2)限制酶是切割DNA的工具酶，主要从微生物中分离纯化出来下表为4种限制酶的识别序列和酶切位点，下图为含有荧光素酶基因的DNA片段及其具有的限制酶切点．若只选用1种酶切获得荧光素酶基因，最应选择的限制酶是________产生黏性末端。若选用2种限制酶，应选用__________，该方法的优点是____________________。

限制酶	Msp I	BamH I	Mbo I	SmaI
酶切位点

(3)荧光素酶基因常被作为基因工程中的标记基因，其作用是将____________筛选出来。荧光素酶基因也可以作为目的基因转入某些动植物细胞中表达产生荧光素酶。将目的基因导入动物细胞之后经过____________ （写2种）等技术获得转基因哺乳动物。将目的基因导入植物细胞，目前常用的目的基因载体是Ti质粒，目的基因需插入到该基因载体的__________，将导入荧光素酶基因的植物细胞，可经过__________技术获得转基因植株

【推荐2】以我国科学家为主的科研团队将OSNL（即4个基因Oct4/Sox2/Nanog/Lin28A的缩写）导入黑羽鸡胚成纤维细胞（CEFs），诱导其重编程为诱导多能干细胞（iPS），再诱导iPS分化为诱导原始生殖细胞（iPGCs），然后将iPGCs注射到孵化2.5天的白羽鸡胚血管中，最终获得具有黑羽鸡遗传特性的后代，实验流程如图。回答下列问题。

(1)培养CEFs获得iPS细胞时，需要定期更换培养液并通入CO₂的目的分别是________。
(2)CEFs是从孵化9天的黑羽鸡胚中分离获得的，为获得单细胞悬液，鸡胚组织剪碎后需用________处理。动物细胞培养通常需要在合成培养基中添加________等天然成分，以满足细胞对某些细胞因子的需求。
(3)体外获取OSNL的方法有________。（答出1种方法即可）若要在CEFs中表达外源基因的蛋白，需构建基因表达载体，载体中除含有目的基因和标记基因外，还须有启动子和________等。启动子是________识别和结合的部位，有了它才能驱动________。
(4)iPS细胞和iPGCs细胞的形态、结构和功能不同的根本原因是________。
(5)该实验流程中用到的生物技术有________（答出2点即可）

【推荐3】干扰素是动物或人体细胞受到病毒侵染后产生的一种糖蛋白，它是一种抗病毒的特效药。“中国干扰素之父”侯云德院士利用基因工程的方法获得了人干扰素α-1b，用于临床疾病的治疗。回答下列相关问题。
(1)获得基因工程用的干扰素基因，需先从T淋巴细胞的细胞质中获得___________，经逆转录获得cDNA，再利用___________技术扩增干扰素基因，扩增干扰素基因的前提是要有一段已知目的基因的___________，以便合成引物。
(2)利用山羊乳腺生物反应器来生产干扰素时，要将改造后的人干扰素基因与山羊乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，目的是___________。然后将基因表达载体导入山羊的（填“受精卵”或“乳腺细胞”）中。____________________________
(3)有人尝试让植物细胞产生干扰素，经探索发现水稻胚乳细胞作为反应器的效果比较好。在用农杆菌Ti质粒构建基因表达载体时，应将干扰素基因插入T-DNA片段________________（填“内”或“外”），Ti质粒上的T-DNA的作用是________________。检测水稻胚乳细胞中干扰素基因是否成功表达可采用的方法是。___________________________

【推荐1】下图为科研人员研发冠状病毒疫苗的几种技术思路，请回答：

(1)途径Ⅰ与途径Ⅱ相比，疫苗安全性更高的是途径_____。途径Ⅲ中，过程①的操作需要_____酶，该途径涉及技术的核心是_____（用图中数字作答）。除图中所示外，常见疫苗类型还有_____。
(2)途径IV生产的DNA疫苗在动物细胞中表达将引起机体免疫应答。与DNA疫苗相比，mRNA疫苗的安全性更有优势，因为mRNA不会进入细胞核，无_____的风险，且易被_____水解，不会遗传给子细胞。
(3)人体在感染新冠病毒后可引发“细胞因子风暴”（机体感染病原体后，体液中多种细胞因子迅速大量产生的现象），进而伤害正常细胞。“细胞因子风暴”引发的免疫功能异常称为_____。
(4)该病毒表面蛋白A为主要抗原，为进一步获得更符合治疗要求的单克隆抗体，科研人员通过仔细研究，找到既不影响抗体空间结构又降低免疫反应的_____序列，借助基因工程技术对抗体结构进行人源化改造。
(5)科研人员发现利用农杆菌转化法培育出的抗虫棉品种自交的后代中，抗虫植株均有某抗病性状，原因可能是：
①_____。
②_____。

【推荐2】现代人们对生物工程技术发挥的作用褒贬不一，但生物工程在为人们提供需要的生物新品种或新产品方面确实发挥了重要作用。请回答下列问题：

(1)转人生长激素基因牛发生的可遗传变异是_______，③过程用到的生物技术手段有____________。如欲得到基因型相同的两头牛犊，可在__________________阶段，采用____________技术达到此目的，两头牛的性别_________（填“相同”或“不同”）。
(2)将prG（基因）导入浆细胞制备单克隆抗体的过程中，Ⅲ代表的细胞具有_______的特点，具有此类功能的细胞还可以通过_____（技术）方法获得。
(3)在抗虫棉培育过程中，将棉花细胞培养成抗虫棉植株所依据的原理是__________，④过程常用的方法是_______________ 法。若要获得该种抗虫棉的无病毒植株，应选用其___________处的组织进行培养。

【推荐1】在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan^r）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。

请据图回答下面的问题。
(1)A过程需要的酶有___________________________________________。
(2)B过程及其结果体现了质粒作为载体必须具备的两个条件是________________________________________________________________。
(3)C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入________。
(4)在D过程中，抗虫基因遗传信息的传递过程是_____________________。
(5)获取真核生物的基因常用的方法是______________，包括_____________。
(6)如果利用DNA分子杂交原理对再生植物进行检测，D过程应该用_______________________作为探针。
(7)科学家在进行实验过程中，采用了两种方案：一是将抗虫基因导入离体的棉花叶片细胞进行植物组织培养；请你想另外一种方案：可以将抗虫基因导入植物的________中，再进行培养，导入成功的标志是_______________________________________________________________。

【推荐3】乙型肝炎病毒（HBV）可引发慢性肝炎、肝硬化等疾病，乙型肝炎病毒调节蛋白HBx对HBV复制有重要作用。图1表示在PCR过程中HBx基因与引物的关系，图2表示利用中国仓鼠生产乙肝病毒HBx蛋白流程图。回答下列问题：

（1）利用PCR技术扩增图1中HBx基因时，在第______次循环结束后即可出现两条链等长的目的基因片段。图2中②过程需要用到限制酶和DNA连接酶，两种酶作用的化学键______（填“相同”或“不相同”）。
（2）基因表达载体导入受精卵常用______法，检测HBx基因是否转录出mRNA时，需要用______做探针，再与相应的物质杂交。
（3）④过程体外受精前需要对精子进行______处理，卵母细胞需要发育到______期，才具备与精子受精的能力。⑤过程将获得的早期胚胎移植到经过______处理的受体仓鼠子宫内。
（4）在⑤步聚操作前对胚胎进行了检查和筛选，发现有些胚胎因为外源基因的插入而死亡外源基因插入导致胚胎死亡的原因可能是______。