【推荐1】皮素（ET）是一种含21个氨基酸的多肽，具有强烈的促进血管收缩和促进平滑肌细胞增殖等作用，其功能异常与高血压、糖尿病、癌症等有着密切联系。内皮素（ET）主要通过与靶细胞膜上的ET受体（ET_A）结合而发挥生物学效应。科研人员通过构建表达载体，实现ET_A基因在大肠杆菌细胞中的高效表达，其过程如下图所示，图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶Apa I的识别序列为   ，限制酶Xho I的识别序列为       。
请据图分析回答：
   
(1)进行过程①时，需要加入缓冲液、引物、脱氧核苷酸和________酶等。完成过程①②③的目的是_______。
(2)过程③和⑤中，限制酶Xho I切割DNA，使________键断开，形成的黏性末端是________。用两种限制酶切割，获得不同的黏性末端，其主要目的是____________。
(3)构建的重组表达载体，目的基因上游的启动子是________的部位，进而可驱动基因的转录。除图中已标出的结构外，基因表达载体还应具有的结构是________________。(答出两点）
(4)过程⑥要用CaCl₂预先处理大肠杆菌，使其处于一种能____________的生理状态 。
(5)将SNAP基因与ET_A基因结合构成融合基因，其目的是有利于检测_____________。
(6)基因工程操作时可将外源基因整合到叶绿体基因组中，不仅能有效改良植物的品质，还由于叶绿体转基因不会随________（“花粉”或“卵细胞”）传给后代，从而能在一定程度上避免转基因作物中的外源基因扩散到其他同类作物。

【推荐2】1997年，科学家将动物体内的能够合成胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌中表达成功．如右图，请据图回答问题。

(1)此图表示的是采取人工合成目的基因的方法获取胰岛素基因的过程。图中DNA是_____为模板，_____形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要_____。
(2)图中②代表的是_______ 酶，在它的作用下将质粒切出_____ 末端，再以_____ 酶连接形成重组质粒，重组质粒中除了胰岛素基因以外，还必须含有启动子，终止子和_____ ，这样才能构成一个完整的_____。
(3)）图中④表示的过程是_____。

【推荐1】埃及伊蚊是登革热等病毒的重要传播媒介。科学家培育出转基因的雄性埃及伊蚊（不叮咬人），其可与野生雌性埃及伊蚊（叮咬人）生育后代，但它们的后代在幼虫阶段就会死去。回答下列问题：
(1)培育转基因蚊子需要的目的基因比较小且核苷酸序列已知，可通过________获取，该方法获得的目的基因不含________________与________________。
(2)将目的基因导入受体蚊子细胞中的方法为________________。
(3)从基因表达水平检测与鉴定目的基因存在的表达的方法依次为________、________。
(4)转基因生物安全性一直备受关注，为了打造牢靠的生物防线，科学家将人工合成蛋白质整合到转基因蚊子体内，而该种蛋白质不存在于自然界，该蛋白质可通过________生产，简述该方法基本过程________。

【推荐2】阅读下面的材料，回答问题
胰岛素的应用是糖尿病治疗历史上的一个里程碑。胰岛素自1922年用于临床以来，就成为治疗糖尿病的特效药物。目前全世界糖尿病患者已超过四亿，为临床提供充足、质量可靠的胰岛素制剂是现代生物制药领域的一项重要工程。
人胰岛素由胰岛 β 细胞合成，核糖体上最初形成的是前胰岛素原单链多肽，进入内质网腔后，信号肽被切除，形成胰岛素原。高尔基体内的特异性肽酶将胰岛素原的 C 肽区域切除，A 链和 B 链通过二硫键形成共价交联的活性胰岛素（如图）。

最初用于临床的胰岛素几乎都是从猪、牛胰脏中提取的。猪、牛胰岛素与人胰岛素生理功能相似，但氨基酸序列有微小差异。接受动物胰岛素治疗的患者有5％～10％出现不同程度的过敏反应，抗动物胰岛素抗体还可能对患者的胰岛 β 细胞功能产生负面影响。
随着基因工程技术的发展，重组人胰岛素逐渐取代动物胰岛素。早期的重组人胰岛素生产，采用A、B链分别表达法。后来该方法被胰岛素原表达法取代，即由大肠杆菌合成胰岛素原，然后经细胞外酶切获得胰岛素。1987年用酵母菌生产重组人胰岛素的方法出现。重组人胰岛素的结构与人体自身分泌的胰岛素结构完全相同，但无法完全模拟生理胰岛素曲线，容易导致血糖波动，甚至导致低血糖发生。
上世纪90年代，科学家通过改变胰岛素的氨基酸序列和结构，研制出能更好模拟生理胰岛素分泌特点的胰岛素类似物，包括速效胰岛素和长效胰岛素类似物。例如，将人胰岛素 B 链第28位的脯氨酸替换为天门冬氨酸，可有效抑制胰岛素单体的聚合，皮下注射这种速效胰岛素类似物后，起效快（10-20分钟起效）、血药浓度峰值高、药效消失快，已经在临床上广泛应用。
（1）用猪胰岛素进行治疗，易诱导入体产生抗猪胰岛素抗体，原因是_____。
（2）人胰岛素基因有 2 个内含子。利用大肠杆菌通过胰岛素原法生产重组人胰岛素，获取目的基因时，不宜采用的方法是_____
a．直接从细胞内总 DNA 中分离目的基因
b．用化学方法直接人工合成目的基因
c．以 mRNA 为模板逆转录合成目的基因
d．利用 PCR 扩增人胰岛素原基因的编码序列
（3）与大肠杆菌相比，利用酵母菌生产胰岛素的优势有_____。
（4）重组人胰岛素工程菌构建完成后，还需要通过_____工程技术进行胰岛素的生产。
（5）正常人胰岛素的生理性分泌，可分为基础胰岛素分泌（24小时持续脉冲式分泌微量胰岛素，维持空腹状态下血糖稳定）和进餐后的胰岛素分泌。能更好地模拟餐时生理胰岛素曲线的是_____（选填速效或长效）胰岛素类似物。
（6）请写出通过蛋白质工程，构建胰岛素类似物工程菌的基本过程_______________________。

【推荐2】目的基因的分离是基因工程研究中的主要方面和操作关键。下面甲、乙图表示从真核生物细胞中获取目的基因的两种方法，请回答下列问题。
   
(1)在甲图中，a过程是在________酶的作用下完成的。如果用该类酶中的一种，不一定能获取目的基因，其原因是_____________________________________________________。
(2)在乙图中，c过程在遗传学上称为________，d过程称为________，d过程需以mRNA为模板，________为原料，还需要的条件是ATP、________、DNA聚合酶等。
(3)除了上述两种方法可以获取目的基因外，请你再写出一种方法：___________________。

【推荐3】甘蓝型油菜中，抑制PEP基因的表达可提高油菜籽的含油量。通过基因工程将PEP基因反向连接在启动子后，构建转反义PEP基因油菜是提高油菜籽含油量的常用技术路径。请回答下列问题：

(1)为将PEP基因反向连接在启动子后，构建反义PEP基因，需要将限制酶酶切位点设计在引物上，PEP基因的上游引物和下游引物中应分别引入______酶切位点。
(2)该实验选用Ti质粒作为载体，除了它具有启动子等基因表达载体必备结构外，还因为______。用激光照射油菜愈伤组织时，可在细胞膜上打出一个穿孔，带有转反义PEP基因的Ti质粒由此小孔进入油菜细胞，几秒钟后小孔封闭，该过程体现了细胞膜具有______。筛选时，在激光照射下，Ti质粒导入成功的细胞一般会发出______。
(3)为检测反义PEP基因是否进入细胞，研究者通常检测细胞中是否存在ntp基因，而不检测PEP基因，其原因是______。已知PEP基因的转录模板链为A链，则反义PEP基因的转录模板为______。转反义PEP基因油菜中PEP基因的表达受阻，原因是______。