【推荐1】下图示人体内某些淋巴细胞的分化和免疫过程，数字表示过程，字母表示细胞或物质。请分析并回答：

（1）造血干细胞在胸腺和骨髓内转变为a、b、c等细胞的过程被称为______________。
（2）③过程是在X的刺激和a 细胞等的参与下共同完成的。这属于___________免疫，与③过程相比，④过程的应答特点是_______________。
（3）⑤过程的产物Y的化学本质是_______________，参与其合成并分泌的膜性细胞器有____________________________________等。
（4）若X是禽流感病毒，则患者彻底消灭X必须依靠a增殖分化的淋巴细胞去裂解____________________。如果X是HIV，则由于图中__________细胞的大量死亡，导致患者免疫系统瘫痪，功能瓦解。

【推荐2】人乳头瘤病毒（HPV）是一类专门感染人皮肤及黏膜上皮细胞的DNA病毒，会诱发宫颈癌等疾病。如图是HPV入侵机体后的生理活动和机体部分免疫应答过程。回答下列问题。

(1)经[甲]_____________细胞传递HPV抗原后，辅助性T细胞（Th）会向Th2方向分化，Th2__________并与B细胞结合，为B细胞的激活提供了第二个信号。同时，Th能分泌物质a抑制HPVmRNA的形成，a在免疫系统的组成中属于______________。
(2)当HPV侵入皮肤细胞后，Th向Th1方向分化并分泌物质b，促进____________细胞与靶细胞接触使其裂解，此过程中，靶细胞中的_____（细胞器）发挥了重要作用。
(3)HPV病毒主要局限于皮肤黏膜表皮细胞层的感染，极少进入血液，因此细胞免疫在病毒的清除中占有主要作用。据图推测，HPV可能通过以下途径来逃避免疫系统的“追杀”：一是被HPV感染的组织中，免疫应答会向___________（填“Th1”或“Th2”）方向漂移，二是皮肤细胞中___________，从而抑制细胞免疫，使病原体癌基因更易逃避宿主的免疫_____________功能，增加宿主患宫颈癌的概率。

【推荐3】食品安全问题得到社会的高度重视。过期食品通常伴有细菌性混合污染，并产生大量毒素。当胃或肠道遭受毒素入侵后，分布在肠嗜铬细胞膜上的Ca²⁺通道被激活，并释放大量5-羟色胺（5–HT），其周围的迷走神经感觉神经末梢能接收5-HT并将信号传送到脑干孤束核，脑干孤束核内的神经元一方面激活“厌恶中枢”，产生与“恶心”相关的厌恶性情绪；另一方面激活脑干的呼吸中枢，通过调节负责膈肌和腹肌同时收缩的神经元，引发呕吐行为。从肠道到大脑的防御反应神经通路如下图所示。

(1)毒素引发呕吐属于__________（非条件/条件）反射，含毒素的过期食品诱发小鼠出现呕吐反应过程中。这种机制是长期进化的结果，对机体的意义是____________。
(2)作为小分子物质，5—HT能通过胞吐方式释放到突触间隙的原因是__________。
(3)在某些特殊的情况下，人可以忍住不呕吐，这说明___________。
(4)毒素进入机体还可引起特异性免疫中的__________免疫。

【推荐1】红景天中的HMA3基因能编码Cd（镉）转运蛋白，科研人员将红景天中的HMA3基因转入栾树，以实现栾树的定向改良，使其增强对Cd的富集能力，从而更有效治理Cd污染。主要技术流程如下图，请回答：
   
(1)重组质粒的构建、扩增、保存。为构建Cd转运蛋白与绿色荧光蛋白（GFP）的融合蛋白，需确保目的基因与质粒正确连接。构建重组质粒时用_______酶切PCR纯化产物（已添加相应酶切位点）及Ti质粒，然后通过DNA连接酶进行连接制备重组质粒，并依次转入大肠杆菌和农杆菌。
(2)栾树愈伤组织的诱导。切割无菌苗将其茎段插入愈伤组织培养基，培养基应添加______等植物激素，放入培养箱，经过21d的黑暗诱导，茎段经_______形成愈伤组织。
(3)农杆菌介导转化体系的建立。用农杆菌单克隆菌株对栾树愈伤组织进行侵染转化，并用添加______的培养基筛选出转化成功的愈伤组织，将愈伤组织继续培养成完整植株。
(4)原生质体制备及目的基因的检测和鉴定。取愈伤组织用______处理一段时间获得原生质体，在激光共聚焦下观测到细胞膜发出绿色荧光。据此可知，在本研究中选择GFP与Cd转运蛋白构建融合蛋白的目的是______。若要从个体生物学水平上进行目的基因的检测与鉴定，则可以检测比较转基因栾树与野生型栾树______。

【推荐2】靛蓝是最早发现的天然染料之一。研究人员将靛蓝色素酶基因（IDG）与启动子PTL12相连以构建基因表达载体（如图，KpnⅠ、HindⅢ、BamHⅠ、PstⅠ代表不同限制酶，图中质粒上酶的位置为其对应的酶切位点），并最终培育出能在棉纤维细胞中表达靛蓝色素酶的彩色棉新品种。请据图回答下列问题：

(1)图中所示是基因工程操作步骤中的______，该过程用到______种酶。
(2)本研究中将IDG与启动子PTL12结合的主要目的是______。
(3)过程①②都使用KpnⅠ切割质粒，目的是______，过程③使用的Ti质粒中的T-DNA内部至少应含有的限制酶是______。
(4)利用农杆菌转化法将目的基因导入棉花细胞的过程：首先将______转入农杆菌，然后通过农杆菌侵染植物细胞将______转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的______上。

【推荐3】图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列现有Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I 4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G ↓ GATCC、↓GATC、CCC ↓GGG。 请回答下列问题：

（1）若用限制酶Sma I完全切割图1中DNA片段，其产物长度为____________________。
（2）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从隐性纯合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，产物中共有____种不同DNA片段。为了提高实验成功率，需要通过______________技术扩增目的基因，以获得大量的目的基因。
（3）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是______________。在导入重组质粒后，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般先用添加_________的培养基
进行培养，然后将生长的菌接种到只含____________的培养基中培养，可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞。
（4）假设用BamH I切割DNA获取目的基因，用Mbo I切割质粒，然后形成重组质粒， 若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，能否用BajnH I ? ___________。为什么？______________________。

【推荐1】径柳匙叶草是一种泌盐植物。科研工作者将径柳匙叶草液泡膜Na⁺/K⁺逆向转运蛋白基因（TaNHX2基因）转移到棉花细胞内，获得了转基因耐盐棉花新品种。图1是获取的含有目的基因的DNA片段，Sau3A I、EcoR I、BamH I为三种限制酶，图中箭头所指为三种限制酶的切点；图2是三种限制酶的识别序列与酶切位点示意图；图3是土壤农杆菌中用于携带目的基因的Ti质粒结构示意图。回答下列问题：

(1)利用PCR技术获取目的基因的前提是_________，与细胞内DNA复制相比，PCR反应体系中加入的酶具有_________的特点。
(2)为使目的基因和质粒定向拼接，应选用_________酶切割含目的基因的DNA片段，形成的黏性末端利用_________酶进行连接，形成的重组质粒不一定能被BamH I切割。
(3)从分子水平上检测棉花细胞中TaNHX2基因是否表达的方法是_________，从个体水平上检测棉花细胞中TaNHX2基因是否表达的方法是_________。

【推荐2】下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，下图甲是某种基因表达载体及限制酶切割位点示意图，图乙是利用图甲所示的基因表达载体获得的含目的基因的表达载体。请回答下列有关问题：


（1）基因工程操作过程中，能作为载体的除质粒外，还包括_____________。质粒作为基因工程的载体，应具备的基本条件有________________________________________________（答两点）。
（2）某DNA片段经BamHⅠ酶切割得到的目的基因，能与图甲基因表达载体被__________（填“EcoRⅠ”或“Sau3AⅠ”）酶切割后的产物连接，原因是____________________________________________________。
（3）构建基因表达载体，需要限制酶和_____________等工具酶。图乙所示的表达载体能否在宿主细胞中表达目的基因产物，并说明原因。____________________________________________________。

【推荐3】P450是石油降解的关键酶。用SalI和NdeI联合酶切获得P450基因，与甲图所示的质粒重组后，导入大肠杆菌中获得基因工程菌。甲图中mel基因表达能使白色菌落变成黑色，aacCI是庆大霉素（抗生素）抗性基因。甲图中箭头位置是不同限制酶的切割位点，乙图表示几种限制酶对应的识别序列及切割位点。回答下列问题：

(l)甲图所示质粒中没有Sal I酶的切割位点，切割质粒时可用乙图中的____酶代替，原因是____。酶切后的质粒与目的基因（P450基因）在____酶的作用下形成重组质粒。
(2)经测定图甲质粒长度为7.6kb(lkb为1000个碱基对)，重组质粒经Nde I、SspI联合酶切后获得了6．0kb和1.2kb的两个片段，据此推测，目的基因的长度应为____kb。基因表达载体中必须含有启动子，它的作用是____。
(3)将重组质粒导入大肠杆菌时，常用Ca²⁺处理大肠杆菌，使细胞处于一种____的生理状态，这种细胞称为感受态细胞。由于重组质粒导入受体细胞的成功率很低，需要接种到含有_____的固体培养基上，选择颜色为____的菌落扩大培养，进而筛选出所需的工程菌。

【推荐2】干燥综合征（SS）是临床常见的一种自身免疫病，患者血清中存在多种抗体，其中以SSB抗体特异性最强。下图表示科研人员利用基因工程技术获得SSB蛋白及利用SSB蛋白对小鼠进行免疫的过程。回答下列问题：

(1)利用RNA通过①过程获得cDNA需要________酶。已知真核生物mRNA在3'端加有PolyA（多聚腺嘌呤核糖核苷酸）保护尾部不被降解。为了针对性获得cDNA，应如何设计逆转录第一步时的DNA引物______，设计引物的目的是______。
(2)为确保与pET41a质粒定向连接，对逆转录得到的cDNA扩增时，应在相应引物的_______（填“5'”或“3'”）端加上______酶切位点。
(3)③过程用重组质粒转染大肠杆菌时，需要用Ca²⁺处理大肠杆菌，目的是______，然后将处理后的大肠杆菌先接种在添加_______的培养基（A）上培养，待长出菌落后再利用无菌膜同位置转移到添加______的培养基（B）上培养，收集_______菌落进一步纯化后将菌体破碎处理，筛选得到SSB蛋白。
(4)将改造后的大肠杆菌生产的SSB蛋白注入到小鼠体内是为了检测该蛋白是否具有抗原性，则后续实验内容应为抽取小鼠血液_______。

【推荐3】乳铁蛋白广泛分布于人和其他哺乳动物的乳汁中，具有抑菌、抗肿瘤等功能。利用转基因技术生产重组人乳铁蛋白不仅能解决天然乳铁蛋白资源短缺的问题，而且能够提供对人类更有价值的人乳铁蛋白（hLF）。重组人乳铁蛋白转基因奶山羊的制备流程如图1所示。回答下列问题：
   

限制酶	AseI	SalI	BamHI
识别序列及切割位点	5'-AT↓TAAT-3' 3'-TAAT↑TA-5'	5'-G↓TCGAC—3' 3'-CAGCT↑G—5'	5'-G↓GATCC-3' 3'-CCTAG+G↑5'

(1)图1中，选择人乳腺细胞作为提取RNA的材料，是因为____。
(2)图1中，①过程需要用到的工具酶是____，②过程常用的方法是____。
(3)图2为pEB质粒的模式图，其中AseI、SalI、BamHI代表限制酶切点（识别序列及切割位点如表所示），neoR为新霉素抗性基因，GFP基因为绿色荧光蛋白基因，GFP基因的作用是____。图2中的启动子应选择在奶山羊乳腺细胞中特异性表达的基因的启动子，目的是____。
(4)为保证质粒和hLF基因的正确连接，结合表和图2信息可知，图1中PCR扩增时应选用下列4种引物中的____。
①5'-GCATTAATATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3'
②5'-GCGTCGACATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3'
③5'-GTTATTAATTCACACTCTAGGATCGTTGGTAAGGGACAC-3'
④5'-GTTGGATCCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3'
(5)为检测转基因奶山羊体内的hLF基因是否成功表达，可以采用的方法是____。