哈佛大学研究团队开发了一种C-G碱基对转变为T-A碱基对的单碱基编辑工具（简称CBE系统），近年来成为关注的热点。该系统由三个元件构成，其中“dCas9蛋白+脱氨酶”在sgRNA的引导下，对结合区域第4-8位点的碱基C脱氨反应变成U，最终实现C→T的不可逆编辑，不需要DNA链断裂（如图1）。（限制酶识别序列和切割位点如下，XbaI：T^TCGAG SmaI：CCC^GGG EcoRI：G^AATTC SacI：C^TCGAG HindI：A^AGCTT）
(1)下列关于CBE系统的说法中不正确的是
(2)图中CBE系统与靶DNA结合区域可能存在的碱基互补配对有_______ 。（序号选填）
①A-T ②C-T ③C-U ④A-U ⑤U-T ⑥C-G
(3)根据所学知识分析，CBE系统不可以___
某研究发现在二倍体野生草莓和八倍体栽培草莓中，花青素合成过程的关键转录因子之一MYB10基因自然变异导致草莓果实成白色，严重影响营养价值。科学家利用单碱基编辑系统对二倍体野生草莓果实中MYB10基因定点突变，为培育优良草莓品种提供了有价值的候选基因。
(4)已知二倍体野生草莓中MYB10基因编码链第468-488位碱基序列为5’-ACAGGACATGGGACGGATAA-3’为实现该区域编码多肽链中的组氨酸定点突变为酪氨酸，应设计的sgRNA序列是 （组氨酸：CAU、CAC酪氨酸：UAU、UAC）
(5)利用图质粒和目的基因构建CBE系统，为高效连接和筛选，结合pHSE401质粒上限制酶识别位点，推测目的基因上游和下游含有的限制酶识别位点组合可以为_________ 。（序号选填）
①XbaI和SacI②EcoRI和SacI③XbaI和HindⅢ④SmaI和SacI⑤HindⅢ和EcoRI⑥XbaI和EcoRI
(6)除上述单碱基编辑技术获得定点突变目的基因，还可以采用PCR技术获得单碱基突变基因。你倾向于选择哪种技术获得定点突变基因，并阐述理由_______ 。
(1)下列关于CBE系统的说法中不正确的是
| A．过程①中发生了氢键的断裂和形成 |
| B．过程②中发生了磷酸二酯键的断裂和形成 |
| C．过程③中以B链为模板进行DNA复制形成碱基编辑DNA |
| D．该系统中单碱基编辑属于基因突变 |
(2)图中CBE系统与靶DNA结合区域可能存在的碱基互补配对有
①A-T ②C-T ③C-U ④A-U ⑤U-T ⑥C-G
(3)根据所学知识分析，CBE系统不可以___
| A．提供更多生物进化的原材料 |
| B．改变基因库 |
| C．改变生物进化的方向 |
| D．改变基因频率 |
某研究发现在二倍体野生草莓和八倍体栽培草莓中，花青素合成过程的关键转录因子之一MYB10基因自然变异导致草莓果实成白色，严重影响营养价值。科学家利用单碱基编辑系统对二倍体野生草莓果实中MYB10基因定点突变，为培育优良草莓品种提供了有价值的候选基因。
(4)已知二倍体野生草莓中MYB10基因编码链第468-488位碱基序列为5’-ACAGGACATGGGACGGATAA-3’为实现该区域编码多肽链中的组氨酸定点突变为酪氨酸，应设计的sgRNA序列是 （组氨酸：CAU、CAC酪氨酸：UAU、UAC）
| A．5’-UGUCCUGUACCCUGCCUAUU-3’ |
| B．3’-UGUCCUGUACCCUGCCUAUU-5’ |
| C．5’-ACAGGACAUGGGACGGAUAA-3’ |
| D．3’-ACAGGACAUGGGACGGAUAA-5’ |
(5)利用图质粒和目的基因构建CBE系统，为高效连接和筛选，结合pHSE401质粒上限制酶识别位点，推测目的基因上游和下游含有的限制酶识别位点组合可以为
①XbaI和SacI②EcoRI和SacI③XbaI和HindⅢ④SmaI和SacI⑤HindⅢ和EcoRI⑥XbaI和EcoRI
(6)除上述单碱基编辑技术获得定点突变目的基因，还可以采用PCR技术获得单碱基突变基因。你倾向于选择哪种技术获得定点突变基因，并阐述理由
更新时间：2024-03-14 13:29:56
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【推荐1】某果蝇(2n=8)的基因组成为AaBb，两对基因均在常染色体上，细胞乙是由细胞甲通过减数分裂产生的一个精细胞，图丙为果蝇一个精原细胞进行分裂时细胞内同源染色体对数的变化曲线。请回答下列问题：
（1）细胞甲产生细胞乙的过程中最可能发生了___________ ，实现了同源染色体_____________ (填等位基因或非等位基因)的重新组合，这是产生配子多样性的原因之一。
（2）产生细胞乙的次级精母细胞的基因型为__________________ 。
（3）图丙中CD段细胞含有_________ 个染色体组，若细胞甲产生基因组成为AaBb的配子，则分裂异常发生在图丙中的_________ 段，异常的原因是__________________________________ 。
（4）将含31P的果蝇精原细胞置于含32P的培养基中培养，进行一次有丝分裂后，将其中一个细胞置于含31P的培养液中接着进行减数分裂，则在减数第一次分裂后期被32P标记的染色体数目为__________ ，请说出你的判断理由：___________________________________________ 。
（1）细胞甲产生细胞乙的过程中最可能发生了
（2）产生细胞乙的次级精母细胞的基因型为
（3）图丙中CD段细胞含有
（4）将含31P的果蝇精原细胞置于含32P的培养基中培养，进行一次有丝分裂后，将其中一个细胞置于含31P的培养液中接着进行减数分裂，则在减数第一次分裂后期被32P标记的染色体数目为
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【推荐2】甲磺酸乙酯（EMS）能使鸟嘌呤（G）的N位置上带有乙基而成为7-乙基鸟嘌呤，这种鸟嘌呤不与胞嘧啶（C）配对而与胸腺嘧啶（T）配对，从而使DNA序列中G—C对转换成A—T对。育种专家为获得更多的变异水稻亲本类型，常先将水稻种子用EMS溶液浸泡，再在大田种植，通过选育可获得株高、穗形、叶色等性状变异的多种植株。请回答下列问题：
(1)下图表示水稻一个基因片段的部分碱基序列。若用EMS溶液浸泡处理水稻种子后，该DNA序列中所有鸟嘌呤（G）的N位置上均带有了乙基而成为7-乙基鸟嘌呤。请在答题卡相应方框的空白处，绘出经过一次DNA复制后所形成的两个DNA分子（片段）的碱基序列。
(2)水稻矮秆是一种优良性状。某纯种高秆水稻种子经EMS溶液浸泡处理后仍表现为高秆，但其自交后代中出现了一定数量的矮秆植株。请简述该矮秆植株形成的过程___________________________ 。
(3)某水稻品种经处理后光反应酶的活性显著提高，这可能与相关基因突变有关。在叶肉细胞内控制光反应酶的相关基因可能分布于________________________ （填细胞结构名称）中。
(4)已知水稻的穗形受两对等位基因（Sd1和sd1、Sd2和sd2）共同控制，两对基因独立遗传，并表现为基因互作的累加效应，即：基因型为Sd1_Sd2_的植株表现为大穗，基因型为sd1sd1Sd2_、Sd1_sd2sd2的植株均表现为中穗，而基因型为sd1sd1sd2sd2的植株则表现为小穗。某小穗水稻种子经EMS处理后，表现为大穗。为了获得稳定遗传的大穗品种，下一步应该采取的方法可以是______________________ 。
(5)实验表明，某些水稻种子经甲磺酸乙酯（EMS）处理后，DNA序列中部分G—C碱基对转换成A—T碱基对，但性状没有发生改变，其可能的原因有_______ （至少写出两点）。
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【推荐3】如图1表示细胞中DNA分子复制的部分示意图。图中虚线表示DNA复制原点（启动DNA复制的特定序列）所在位置；泡状结构叫作DNA复制泡，是DNA上正在复制的部分。回答下列问题：____ （按5'→3'的顺序写）。DNA分子中____ 碱基对比例越高，DNA分子越稳定。
(2)据图1分析，模板DNA链的端点a、b和新合成DNA子链的端点c、d中，表示5'端的是____ ，判断依据是____ 。
(3)通常DNA分子复制从一个复制起始点开始，有单向复制和双向复制（如图2）。放射性越高的3H-胸腺嘧啶脱氧核糖核苷（3H-脱氧胸苷）在放射自显影技术的图像上感光还原的银颗粒密度越高。请利用放射性自显影技术、低放射性3H-脱氧胸苷和高放射性3H-脱氧胸苷，设计实验探究大肠杆菌DNA复制的方向，实验思路：复制开始时，首先用含低放射性3H-脱氧胸苷培养基培养大肠杆菌、一段时间后转移到____ 的培养基中继续培养，用放射自显影技术观察____ 。
预测实验结果和得出结论；①若____ ，则DNA分子复制为单向复制；②若____ 则DNA分子复制为双向复制。
(2)据图1分析，模板DNA链的端点a、b和新合成DNA子链的端点c、d中，表示5'端的是
(3)通常DNA分子复制从一个复制起始点开始，有单向复制和双向复制（如图2）。放射性越高的3H-胸腺嘧啶脱氧核糖核苷（3H-脱氧胸苷）在放射自显影技术的图像上感光还原的银颗粒密度越高。请利用放射性自显影技术、低放射性3H-脱氧胸苷和高放射性3H-脱氧胸苷，设计实验探究大肠杆菌DNA复制的方向，实验思路：复制开始时，首先用含低放射性3H-脱氧胸苷培养基培养大肠杆菌、一段时间后转移到
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【推荐1】青蒿素是治疗疟疾的重要药物。利用雌雄同株的野生型青蒿（二倍体，体细胞染色体数为18），通过传统育种和现代生物技术科培育高青蒿素含量的植株。请回答以下相关问题：
（1）假设野生型青蒿白青杆（A）对紫红杆（a）为显性，稀裂叶（B）对分裂叶（b）为显性，两对性状独立遗传，则野生型青蒿最多有___________ 种基因型；若F1代中白青杆、稀裂叶植株所占比例为3/8，则其杂交亲本的基因型组合为_____________________ 。
（2）低温处理野生型青蒿正在有丝分裂的细胞，从而获得四倍体细胞并发育成四倍体植株，低温诱导产生四倍体的原因是_____________ ，四倍体青蒿与野生型青蒿杂交后代体细胞的染色体数最多为____ 条。
（3）从青蒿中分离了cyp基因（注：下图为基因结构示意图；图中K、M不编码蛋白质；与RNA聚合酶结合位点位于基因结构的左侧），其编码的CYP酶参与青蒿素合成。若cyp基因的一个碱基对被替换，使CYP酶的第50位氨基酸由谷氨酸变成缬氨酸，则该基因突变发生的区段是______ （填字母）
（4）研究人员已经弄清了青蒿细胞中青蒿素的合成途径（如图中实线方框内所示），并且发现酵母细胞液能够产生合成青蒿素的中间产物FPP（如下图中虚线方框内所示）。
①在FPP合成酶基因表达过程中，完成过程②还需要__________ （至少写三种）等物质或结构的参与。
②根据图示代谢过程，科学家在培育能产生青蒿素的酵母细胞过程中，需要向酵母细胞中导入的目的基因是___________________ 。
③实验发现，酵母细胞导入相关基因后，这些基因能正常表达，但酵母菌合成的青蒿素很少。为提高酵母菌合成的青蒿素的产量，请提出一个合理的思路___________ 。
（5）控制青蒿株高的等位基因有4对，它们对株高的作用相等，且分别位于4对同源染色体上。已知基因型为ccddeeff的青蒿高为10cm，基因型为CCDDEEFF的青蒿高为26cm。如果已知亲代青蒿高是10cm和26cm，则F1青蒿高是___________ cm，F2中株高不同于亲代的几率是________________ 。
（1）假设野生型青蒿白青杆（A）对紫红杆（a）为显性，稀裂叶（B）对分裂叶（b）为显性，两对性状独立遗传，则野生型青蒿最多有
（2）低温处理野生型青蒿正在有丝分裂的细胞，从而获得四倍体细胞并发育成四倍体植株，低温诱导产生四倍体的原因是
（3）从青蒿中分离了cyp基因（注：下图为基因结构示意图；图中K、M不编码蛋白质；与RNA聚合酶结合位点位于基因结构的左侧），其编码的CYP酶参与青蒿素合成。若cyp基因的一个碱基对被替换，使CYP酶的第50位氨基酸由谷氨酸变成缬氨酸，则该基因突变发生的区段是
（4）研究人员已经弄清了青蒿细胞中青蒿素的合成途径（如图中实线方框内所示），并且发现酵母细胞液能够产生合成青蒿素的中间产物FPP（如下图中虚线方框内所示）。
①在FPP合成酶基因表达过程中，完成过程②还需要
②根据图示代谢过程，科学家在培育能产生青蒿素的酵母细胞过程中，需要向酵母细胞中导入的目的基因是
③实验发现，酵母细胞导入相关基因后，这些基因能正常表达，但酵母菌合成的青蒿素很少。为提高酵母菌合成的青蒿素的产量，请提出一个合理的思路
（5）控制青蒿株高的等位基因有4对，它们对株高的作用相等，且分别位于4对同源染色体上。已知基因型为ccddeeff的青蒿高为10cm，基因型为CCDDEEFF的青蒿高为26cm。如果已知亲代青蒿高是10cm和26cm，则F1青蒿高是
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【推荐2】人类15号染色体上UBE3A基因参与控制神经细胞的正常生理活动。在一般体细胞中，来自父本和母本的15号染色体上的UBE3A基因都可以表达，但在神经细胞内，只有来自母本15号染色体上的UBE3A基因得到表达，来自父本染色体上的该基因不表达。若来自母本15号染色体上的UBE3A基因有缺陷，使得神经细胞中UBE3A蛋白含量或活性低可导致发育迟缓、智力低下而患天使综合征（AS）。请分析回答以下问题：______ 性。
(2)据图甲分析在人神经细胞中，来自父方的UBE3A基因无法表达的原因是______ 。
(3)对多数AS综合征患儿和正常人的UBE3A基因进行测序，相应部分碱基序列如图乙所示。由此判断多数AS综合征的致病机理是______ 。若某患者的亲本均表现正常，则其致病基因来自______ （填“祖父”“祖母”“外祖父”或“外祖母”）。
(4)在受精卵及其早期分裂阶段，若某一同源染色体存在三条，细胞有一定概率会随机清除其中的一条，称为“三体自救”。某15号染色体为“三体”的受精卵（其中的UBE3A基因全部正常），若经“三体自救”发育成AS综合征患儿，则染色体数目异常的配子来自______ （填“父方”“母方”或“父方或母方”），丢失的一条15号染色体来自______ （填“父方”“母方”或“父方或母方”）。
(2)据图甲分析在人神经细胞中，来自父方的UBE3A基因无法表达的原因是
(3)对多数AS综合征患儿和正常人的UBE3A基因进行测序，相应部分碱基序列如图乙所示。由此判断多数AS综合征的致病机理是
(4)在受精卵及其早期分裂阶段，若某一同源染色体存在三条，细胞有一定概率会随机清除其中的一条，称为“三体自救”。某15号染色体为“三体”的受精卵（其中的UBE3A基因全部正常），若经“三体自救”发育成AS综合征患儿，则染色体数目异常的配子来自
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(0.4)
【推荐3】皮肤的完整性对于人体的健康至关重要。遗传性大疱性表皮松解症（epidermolysisbullosa， EB）是由于皮肤结构蛋白缺陷导致皮肤脆性增加，EB患者从出生开始其皮肤如蝴蝶翅膀般脆弱，因此也被称为蝴蝶宝贝。下图是某EB家系，请回答有关问题：
（1）据家系图判断，该病为_____ 遗传， II3的基因型是_____ （基因用A，a表示）。
（2）进一步研究发现，EB患者发病与KLHL24基因有关。科研人员对该家系成员进行基因检测，首先提取不同个体DNA作为模板，通过_________ 技术获得大量KLHL24基因片段，然后进行DNA测序，结果如图所示：
通过测序发现，I1、III2的该基因为纯合，而II2、III1基因的变异区域出现两种峰叠加的情况，说明II2、III1为_________ 。由此可知该病为_________ ，II2、III1患病的原因分别是______________ 。
（3）研究人员进一步分析测序结果发现突变基因中发生的碱基对变化是________ ，表达生成的蛋白质比正常的蛋白质少了前28个氨基酸，可能的原因是_________________ 。
（4）后续研究发现，KLHL24蛋白是一种泛素化连接酶，可使皮肤角蛋白14（KRT14）被泛素化。已知在正常皮肤中，KLHL24蛋白会发生自身泛素化和降解，因此含量维持在较低水平。在EB病人皮肤中KLHL24蛋白的前28个氨基酸缺失，导致其自身泛素化和降解的过程被_________ ，其含量升高，进而导致_________ 的过度泛素化并被降解，从而使表皮基底层细胞变的脆弱和易脱落。
（1）据家系图判断，该病为
（2）进一步研究发现，EB患者发病与KLHL24基因有关。科研人员对该家系成员进行基因检测，首先提取不同个体DNA作为模板，通过
通过测序发现，I1、III2的该基因为纯合，而II2、III1基因的变异区域出现两种峰叠加的情况，说明II2、III1为
（3）研究人员进一步分析测序结果发现突变基因中发生的碱基对变化是
（4）后续研究发现，KLHL24蛋白是一种泛素化连接酶，可使皮肤角蛋白14（KRT14）被泛素化。已知在正常皮肤中，KLHL24蛋白会发生自身泛素化和降解，因此含量维持在较低水平。在EB病人皮肤中KLHL24蛋白的前28个氨基酸缺失，导致其自身泛素化和降解的过程被
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(0.4)
【推荐1】果蝇常被用作生物学研究的材料。请分析下列资料，并回答相关问题。
（1）摩尔根的学生布里吉斯重复实验时发现：红眼雄果蝇（XWY）和白眼雌果蝇（XwXw）杂交产生的大量子一代中出现了一只白眼雌果蝇（注：W和w基因都缺失时，胚胎致死；各类型配子活力相同；XXY的个体为雌果蝇，XO的个体为雄果蝇），推测可能是由于母本在减数分裂时形成了染色体数目异常的配子。用显微镜观察细胞中的染色体，如果子一代中_____ ，则证明该推测正确；该子代白眼雌果蝇能够产生的配子种类及比例为_____ 。
（2）研究发现，果蝇棒眼性状是由于X染色体上16A区段重复导致，具体对应关系见下表：
请回答：
①将雌果蝇c与雄果蝇e杂交，正常情况下F1都为棒眼，但出现了少数正常眼和重棒眼果蝇。经分析，是由于亲本雌果蝇c发生X染色体不等交换，从而产生了_____ 的配子所导致；该种变异类型属于_____ 。
②科研人员构建了一个棒眼雌果蝇品系XmBXb，其中B代表两个16A区段，b代表 一个16A区段，基因m始终与B连在一起，且m基因纯合时（XmBXmB，XmBY）使胚胎致死。将该棒眼雌果蝇（XmBXb）与正常眼雄果蝇（XbY）杂交获得F1，再让F1雌雄果蝇自由交配得到的F2中，m的基因频率为_____ 。
（3）科学家利用某品系果蝇进行了如下图所示的实验，培养的环境条件均符合要求且相同。
经过八代或更长时间后，甲箱果蝇体色变浅，乙箱果蝇体色变深，再混养时果蝇的交配择偶出现严重的同体色偏好。请分析，甲、乙品系果蝇之间的差异体现的是_____ （填“基因”或“物种”）多样性，理由是_____ 。
（1）摩尔根的学生布里吉斯重复实验时发现：红眼雄果蝇（XWY）和白眼雌果蝇（XwXw）杂交产生的大量子一代中出现了一只白眼雌果蝇（注：W和w基因都缺失时，胚胎致死；各类型配子活力相同；XXY的个体为雌果蝇，XO的个体为雄果蝇），推测可能是由于母本在减数分裂时形成了染色体数目异常的配子。用显微镜观察细胞中的染色体，如果子一代中
（2）研究发现，果蝇棒眼性状是由于X染色体上16A区段重复导致，具体对应关系见下表：
请回答：
①将雌果蝇c与雄果蝇e杂交，正常情况下F1都为棒眼，但出现了少数正常眼和重棒眼果蝇。经分析，是由于亲本雌果蝇c发生X染色体不等交换，从而产生了
②科研人员构建了一个棒眼雌果蝇品系XmBXb，其中B代表两个16A区段，b代表 一个16A区段，基因m始终与B连在一起，且m基因纯合时（XmBXmB，XmBY）使胚胎致死。将该棒眼雌果蝇（XmBXb）与正常眼雄果蝇（XbY）杂交获得F1，再让F1雌雄果蝇自由交配得到的F2中，m的基因频率为
（3）科学家利用某品系果蝇进行了如下图所示的实验，培养的环境条件均符合要求且相同。
经过八代或更长时间后，甲箱果蝇体色变浅，乙箱果蝇体色变深，再混养时果蝇的交配择偶出现严重的同体色偏好。请分析，甲、乙品系果蝇之间的差异体现的是
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(0.4)
【推荐2】乳汁中的乳糖经消化道乳糖酶分解产生葡萄糖和半乳糖，半乳糖咋人体内的代谢途径如图所示
编码半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶（GPUT）的基因G位于常染色体上，若G基因异常则体内缺乏GPUT，导致半乳糖血症。回答下列问题。
(1)理论上，半乳糖血症在男女中的发病率_____ （填“相等”或“不等”）。与正常人相比，半乳糖血症患者体内半乳糖-1-磷酸的含_____ 。
(2)G基因异常导致半乳糖血症，该实例说明基因控制生物性状的方式是_____ 。
(3)在一个遗传平衡群体中，男性红绿色盲患者（XbY）在男性中的发病率为8%。某一表型男子有一个患半乳糖血症和红绿色盲的哥哥，其父母表型正常。
①该男子哥哥的红绿色盲基因来自_____ ，其母亲的基因型为_____ 。
②该男子与人群中一个携带半乳糖血症致病基因但不患红绿色盲的女性结婚，生出患半乳糖血症孩子的概率是_____ ，生出既患半乳糖血症又患红绿色盲病孩子的概率是_____ 。
编码半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶（GPUT）的基因G位于常染色体上，若G基因异常则体内缺乏GPUT，导致半乳糖血症。回答下列问题。
(1)理论上，半乳糖血症在男女中的发病率
(2)G基因异常导致半乳糖血症，该实例说明基因控制生物性状的方式是
(3)在一个遗传平衡群体中，男性红绿色盲患者（XbY）在男性中的发病率为8%。某一表型男子有一个患半乳糖血症和红绿色盲的哥哥，其父母表型正常。
①该男子哥哥的红绿色盲基因来自
②该男子与人群中一个携带半乳糖血症致病基因但不患红绿色盲的女性结婚，生出患半乳糖血症孩子的概率是
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(0.4)
【推荐3】β-地中海贫血病人由于HBB基因（H基因）发生突变（如 h1、h2等），导致β链的生成受到抑制，无法与α链结合产生足量的血红蛋白A．纯合突变体或双重杂合突变体会表现为重型贫血，而单杂合子病症轻微或无症状。很多重型地中海贫血病人由于携带DNA甲基转移酶1（DNMTl）的突变基因而造成γ链基因（HBG 基因）被激活，高表达的γ链能替代缺失的β链与α链形成血红蛋白 F，从而明显减轻症状。下图1表示对患者家系进行基因测序后获得的结果（不同区域涂黑代表携带相应的突变基因，不考虑交换）， 图2是正常人和图1中“某个体”体内相关蛋白的电泳图谱。请回答问题：
(1)图2中的“某个体”可能对应于图1中的_______ 个体；DNMT1基因控制贫血性状发生的方式为____________ 。
(2)根据图 1 分析：
①H基因和DNMT1基因都位于____________ （常/X/Y）染色体上；
②H基因和DNMT1基因位于_________ 对同源染色体上，判断的理由是_____________ 。
(3)I-1和I-2 再生育一个与Ⅱ-2基因型相同孩子的概率是____________ 。
(4)假设人群中携带DNMT1 突变基因的纯合个体占p。若Ⅱ-1 与一个β-地中海贫血携带者婚配，则后代表现为重型β-地中海贫血的概率是___________ 。
(1)图2中的“某个体”可能对应于图1中的
(2)根据图 1 分析：
①H基因和DNMT1基因都位于
②H基因和DNMT1基因位于
(3)I-1和I-2 再生育一个与Ⅱ-2基因型相同孩子的概率是
(4)假设人群中携带DNMT1 突变基因的纯合个体占p。若Ⅱ-1 与一个β-地中海贫血携带者婚配，则后代表现为重型β-地中海贫血的概率是
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(0.4)
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【推荐1】下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHI、HindIII、SmaI指示线所示为三种限制酶的酶切位点。
据图回答：
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用________ 限制酶，同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含____________ 的培养基上进行。
（2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是( ) （填字母代号）
A．启动子 B．tetR C．复制原点 D．ampR
（3）过程①可采用的操作方法是( ) （填字母代号）
A．农杆菌转化 B．大肠杆菌转化 C．显微注射 D．细胞融合
（4）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用( ) （填字母代号）技术。
A．核酸分子杂交 B． 基因序列分析 C．抗原—抗体杂交 D． PCR
（5）基因工程的四个基本操作步骤是_____________ 、_______________ 、_______________ 和_______________ 。
据图回答：
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用
（2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是
A．启动子 B．tetR C．复制原点 D．ampR
（3）过程①可采用的操作方法是
A．农杆菌转化 B．大肠杆菌转化 C．显微注射 D．细胞融合
（4）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用
A．核酸分子杂交 B． 基因序列分析 C．抗原—抗体杂交 D． PCR
（5）基因工程的四个基本操作步骤是
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【推荐2】下图表示的是一种常用质粒（pIJ702），其中tsr为硫链丝菌素（一种抗生素）抗性基因，mel是黑色素合成基因，表达后能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落；限制酶ClaI。BglH、PstI、SacI、SphI在pIJ702上分别只有一处识别序列。以SacI和SphI切取质粒PU702获得一个0.4kb（lkb=1000对碱基）的较小片段，现用一段目的基因替换了该小片段，重新构成了重组质粒pZHZ80表中列出了这两种质粒被相应的限制酶切割后的DNA片段长度。
（1）除题目中已给的，质粒作为将外源基因送入细胞的载体的原因还有_______ 。
（2）限制酶切割出该0.4kb小片段的过程需要破坏_______ 个磷酸二酯键，重组质粒PZHZ8中至少含有________ 个限制酶切位点。
（3）综上分析重组质粒pZHZ8中目的基因的长度为______ ，已知pIJ702上含mel基因的ClaI/PstI区域长度为2.2kb，若用Clal和PstI联合酶切pZHZ8，则参照表中数据分析酶切所得片段长度为______ kb。
（4）在含硫链丝菌素的固体培养基上能够生长的链霉菌细胞含有的质粒为______ 。如果菌落的颜色为_________ ，可以确定链霉菌细胞中含有重组质粒pZHZ8.
| pIJ702 | pZHZ8 | |
| BglⅡ | 5.7kb | 0.2kb 6.9kb |
| ClaI | 5.7kb | 2.2kb 4.9kb |
| PstI | 5.7kb | 1.8kb 5.3kb |
（1）除题目中已给的，质粒作为将外源基因送入细胞的载体的原因还有
（2）限制酶切割出该0.4kb小片段的过程需要破坏
（3）综上分析重组质粒pZHZ8中目的基因的长度为
（4）在含硫链丝菌素的固体培养基上能够生长的链霉菌细胞含有的质粒为
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非选择题-解答题
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较难
(0.4)
名校
【推荐3】采矿污染和不当使用化肥导致重金属镉（Cd）在土壤中过量积累。利用植物修复技术将土壤中的Cd富集到植物体内，进行后续处理（例如，收集植物组织器官异地妥善储存），可降低土壤中Cd的含量。为提高植物对Cd污染土壤的修复能力，研究者将酵母液泡Cd 转运蛋白（YCF1）（其基因序列内含有1个↓GATC一序列）基因导入受试杨树，并检测了相关指标。回答下列问题：
(1)通过生物信息学分离得到的YCF1基因可通过PCR进行扩增，扩增过程中DNA聚合酶具有_____ 的特点，某次PCR扩增产物电泳结果显示：实验组和对照组都没有任何条带，从引物角度分析可能的原因有_____ 。
(2)利用下图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用_____ 酶切割质粒，酶切后的载体和目的基因片段，通过_____ 酶作用后获得重组质粒。转入了重组质粒的受体菌，在分别含有四环素和氨苄青霉素的培养基中的生长情况分别为_____ ，从平板上长出的菌落中提取质粒利用Sau3AⅠ进行酶切，最多可以得到_____ 种大小不同的DNA片段。
(3)进行前期研究时，将含有YCF1基因的_____ 导入大肠杆菌。研究者进一步获得了转YCF1基因的雄性不育杨树株系，采用不育株系作为实验材料的目的是_____ 。
(4)进行前期研究时，将含有YCF1基因的重组载体导入受试双子叶植物印度芥菜，常用的方法是_____ 。研究者进一步获得了转YCF1基因的不育杨树株系，采用不育株系作为实验材料的目的是_____ 。
(5)将长势一致的野生型和转基因杨树苗移裁到Cd污染的土壤中，半年后测定植株干重（图1）及不同器官中Cd含量（图2）。据图1可知，与野生型比，转基因植株对Cd具有更强的_____ （填“耐性”或“富集能力”）；据图2可知，对转基因植株的_____ 进行后续处理对于缓解土壤Cd污染最为方便有效。
(6)已知YCF1特异定位于转基因植物细胞的液泡膜上。据此分析，转基因杨树比野生型能更好地适应高Cd环境的原因是_____ 有利于植株吸水。
(1)通过生物信息学分离得到的YCF1基因可通过PCR进行扩增，扩增过程中DNA聚合酶具有
(2)利用下图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用
| 限制酶 | BamHI | XmaI | BclI | SmaI | Sau3AI |
| 识别序列及切割位点 | -G↓GATCC- | -C↓CCGGG- | -T↓GATCA- | -CCC↓GGG- | -↓GATC- |
(4)进行前期研究时，将含有YCF1基因的重组载体导入受试双子叶植物印度芥菜，常用的方法是
(5)将长势一致的野生型和转基因杨树苗移裁到Cd污染的土壤中，半年后测定植株干重（图1）及不同器官中Cd含量（图2）。据图1可知，与野生型比，转基因植株对Cd具有更强的
(6)已知YCF1特异定位于转基因植物细胞的液泡膜上。据此分析，转基因杨树比野生型能更好地适应高Cd环境的原因是
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