【推荐1】奶酪是一种常见的食品，传统的方法是从未断奶的小牛的胃黏膜里提取牛凝乳酶，它能水解多肽链中苯丙氨酸和甲硫氨酸之间的肽键以促使牛奶凝结来生产奶酪，此方法产量低且昂贵。如今科学家将编码牛凝乳酶的基因导入大肠杆菌中，实现牛凝乳酶的批量生产，极大的满足了奶酪生产的需求。请回答相关问题：
（1）科学家利用基因工程生产出大量的牛凝乳酶，该工程是在___________________水平上进行设计和施工的，其核心步骤是_________________________。
（2）使大肠杆菌产生牛凝乳酶的目的基因最好从________________（cDNA文库/基因组文库）中获取，原因是__________________________。
（3）利用图示目的基因和质粒构建重组质粒，最好选用_______________（填限制性核酸内切酶名称）切割，理由是___________。若要初步筛选出导入重组质粒的大肠杆菌，要在含___________________（氨苄青霉素/四环素）的培养基中进行培养。

（4）最后进行凝乳酶活性检测：将适量的大肠杆菌表达出的凝乳酶的提取物加入脱脂奶粉溶液中，37℃保温一段时间，可观察到_______________________现象。

【推荐2】蛋白质W是某种病毒的抗原。某研究小组拟仿照制备乳腺生物反应器的研究思路，制备一种膀胱生物反应器来获得W，基本过程如图所示。

回答下列问题：
(1)步骤①中需要选择的启动子是______________使目的基因能在膀胱上皮细胞中特异性表达，分泌到尿液中，随尿液排出体外。W基因的序列已知并目基因较小，那么获取W基因的方法可以是______________。
(2)①过程需要DNA连接酶，根据DNA的连接酶的来源不同，可以将这些酶分为______________和______________。构建重组表达载体中的标记基因的作用是______________。
(3)④过程的生理学基础是之一是受体对移入的外来胚胎基本______________反应，这为外来胚胎在受体子宫中存活提供可能。
(4)从上述流程可知，转基因动物发生的可遗传变异是_______________。对从尿液中提取的蛋白质还要进行检测以确定是否含有W，常采用的方法是______________。
(5)步骤④胚胎移植前是否需要对动物的性别进行鉴定______________（是/否），原因是______________。

【推荐3】人血清白蛋白（HSA） 具有重要的医用价值，只能从人血浆中制备。下图是以基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径。

（1）为获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取_____合成总cDNA，然后以cDNA为模板，采用PCR技术扩增HSA基因。下图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出另一条引物的位置及扩增方向。_____

（2）启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是_____（填写字母，单选）。
A．人血细胞启动子     B．水稻胚乳细胞启动子   C．大肠杆菌启动子 D．农杆菌启动子
（3）利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是_____。
（4）人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才有活性。与途径Ⅱ相比，选择途径Ⅰ获取rHSA的优势是_____。
（5）为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与_____的生物学功能一致。

【推荐2】下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图一、图二中箭头表示相关限制酶的酶切位点。

（1）若图二中目的基因D是人的α-抗胰蛋白酶的基因，现在要培养乳汁中含α-抗胰蛋白酶的羊，科学家要将该基因注射到羊的_______________中，则发育成的羊能分泌含α-抗胰蛋白酶的乳汁。这一过程涉及以下那些过程___________________。
A．DNA自我复制                  B．DNA以其一条链为模板合成RNA
C．RNA自我复制                  D．按照RNA上密码子的排列顺序合成蛋白质
（2）限制酶Sma和限制酶Xma作用的不同点是_________________________________。
（3）图二中的目的基因D需要同时使用Mse酶和Pst酶才能获取，而图一所示的质粒无相应的限制酶切位点。所以在用该质粒和目的基因构建重组质粒时，需要对质粒改造，构建新的限制酶切位点。试写出构建需要的限制酶切位点的过程（提供构建需要的所有条件）：
①首先用_______________酶处理质粒；
②然后用_______________酶处理质粒，使被切开的质粒末端连接上相应的脱氧核苷酸；
③再运用T₄DNA连接酶处理质粒，形成新的限制酶切位点，即可被_________酶识别。
（4）基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。下图表示运用影印培养法（使在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法）检测基因表达载体是否导入大肠杆菌。培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有________________________。从检测筛选的结果分析，含目的基因的是________（填编号）菌落中的细菌。

【推荐3】In-Fusion技术是一项新型的无缝克隆技术。该技术关键是要在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列（即同源序列，通常为15~20bp），然后用In-Fusion酶处理即可实现无缝连接。它的操作步骤大致为：①质粒线性化；②PCR扩增出两端含线性化质粒同源序列的目的基因；③目的基因与线性化质粒同源区域在In-Fusion酶的作用下形成重组质粒；④将重组质粒导入受体细胞。

(1)过程①中需要用到的酶有_________。另外，利用_________处理也可以直接得到线性化质粒。
(2)据图分析，为保证扩增出所需的目的基因，引物A或引物B要依据_________的碱基序列进行设计。过程②经过_________轮循环即可初步得到符合要求的目的基因片段。
(3)过程③中，同源序列1、2的碱基排序不同，这样设计的好处是_________（至少答两个要点）。图示In-Fusion技术可作为模型使用，一般来说只需要改变图中的_________，即可快速构建出另一种目的基因的重组质粒。
(4)若目的基因是氨苄青霉素抗性基因，以大肠杆菌作为受体细胞时，过程④需要用_________处理大肠杆菌。为检测已转化大肠杆菌的抗性效果，在含氨苄青霉素的液体培养基中培养一段时间后，分别用显微镜计数法和_________法进行计数，后一种计数结果往往比真实值_________（填“大”或“小”），原因是_________。

【推荐1】大米铁含量极低，科研人员通过基因工程、植物组织培养等现代生物技术，培育出了铁含量比普通大米高60%的转基因水稻，改良了稻米的营养品质。下图为培育转基因水稻过程示意图，其中①-⑥为过程，ECORⅠ、HindⅢ、BamHⅠ为限制酶。

(1)该转基因水稻培育过程中选取的目的基因是________。PCR 是获取大量目的基因的一种方法，PCR反应体系的成分中有两种引物，在复性时引物会结合到互补DNA链，对两种引物的设计要求之一是：两种引物之间不能碱基互补配对，试分析原因________；PCR 反应体系的成分中能够决定复制特定 DNA 片段的是________（填“模板”“引物”或“taq 酶”）；从引物设计的角度考虑，如果目的基因两侧没有酶切位点，用PCR 技术________（“可以”或“不可以”）为目的基因设置酶切位点。
(2)完成图中①过程需选用________限制酶处理Ti质粒和含目的基因的DNA。将图示重组质粒导入农杆菌时，可用________处理农杆菌，为了筛检成功导入重组质粒的农杆菌，1号培养基需要加入________。
(3)基因工程中构建的基因表达载体包括________________________、复制原点等五部分。
(4)检测目的基因是否转录的方法及原理是_________________________

【推荐2】回答下列（一）、（二）小题：
（一）酒精饮料中的尿素会与酒精反应生成氨基甲酸乙酯，是一种潜在致癌物。现欲从土壤微生物中分离出能分解尿素的微生物并用于酒精饮料的生产，进行如下实验。请分析回答：
（1）在“分离以尿素为氮源的微生物”实验中，配置的无氮源培养基应用_______灭菌。涂布后的平板应在恒温培养箱中_______培养。培养后发现平板上出现了黄色环带的菌落，该菌种直接利用的氮源可能是_______环带的大小体现了相关酶的___________________________________。
（2）有人尝试用靛酚蓝比色法定量测定脲酶活性。该方法的原理是利用铵态氮和显色试剂反应，生成水溶性蓝色染料，再通过比色计测定光密度值。关于靛酚蓝比色法的说法，错误的是________
A．该实验需要用标准铵溶液制作标准曲线
B．可用光程1cm的比色杯在550nm处测定OD值
C．测定时需用水作为空白对照
D．根据标准曲线，光密度值越大，脲酶活性越高
（3）筛选出高表达脲酶菌株并扩增后后，可从_______中获取酶，并用物理或化学的方法制成_______，在消除酒中尿素的同时又不影响酒的风味。
（二）黄曲霉毒素是黄曲霉菌产生的有毒物质，毒性比氯化物高10倍，也是自然界最强的化学致癌物质，主要污染花生、玉米等粮油食品。有人尝试将黄曲霉毒素抗体基因导入大肠杆菌和酵母菌，用生物工程技术制造抗体，导入过程如下：

请回答以下问题：
（1）配置转基因大肠杆菌的培养基时，除必要的营养物质、氯化钠、琼脂和水外，还应加入_______，获得菌落后，应用_______在_______上进行扩大培养。产生的抗体专一性强，灵敏度高，可制成相应的_______用于快速检测食物中的黄曲霉毒素
（2）本案例中，转基因成功的标志是____________________，可用_______法检测。
（3）实际结果发现，酵母菌产生的抗体活性比大肠杆菌产生的高，推测可能的原因是______________________________________________________。

【推荐3】新冠病毒感染人体的关键在于新冠病毒的棘突蛋白（S蛋白）与人体的ACE2蛋白结合，从而进入人体细胞。我国科研人员最新的一项研究发现，可以用植物来表达S蛋白，这大大降低了新冠疫苗的生产成本。本氏烟草对病毒具有易感性，现欲利用基因工程、农杆菌转化等技术获得产新冠病毒S蛋白的转基因本氏烟草，请回答下列问题：
(1)获取S蛋白基因是培育新冠病毒S蛋白转基因本氏烟草的首要步骤。科研人员从新冠患者肺部组织细胞中分离并提取到编码S蛋白的RNA，若要通过PCR获取和扩增S蛋白基因，则首先需通过______获得S蛋白的cDNA．PCR技术通过控制______使DNA复制在体外重复多次循环，每次循环可分为______三步。
(2)已知编码S蛋白的RNA两端的部分序列为3'—CUUAAGCCGGUU……CCUAGGCUUAAG—5'。如图表为Ti质粒的部分结构示意图及四种限制酶识别序列和切割位点（“↓”处为切割位点）。现有方案①：利用限制酶EcoRⅠ和Sau3AⅠ切割图示质粒和S蛋白基因以构建基因表达载体；方案②：利用限制酶EcoRⅠ和BamHⅠ切割图示质粒和S蛋白基因以构建基因表达载体，你认为应选择方案_____，不选择另一种方案的原因是_______。

限制酶	EcoR Ⅰ	Sma Ⅰ
识别序列和切割位点
限制酶	BamH Ⅰ	Sau3A Ⅰ
识别序列和切割位点

(3)用含S蛋白基因的农杆菌侵染本氏烟草获得转基因植株后，还需利用________技术对该转基因植株是否能产生S蛋白进行检测鉴定。目前，我国生产新冠病毒S蛋白的方法是将目的基因导入仓鼠卵巢细胞，通过动物细胞培养获得，与通过动物细胞培养获得S蛋白相比，通过转基因本氏烟草获得S蛋白的成本大大降低，原因是______（答出两点）。

【推荐1】草甘磷是一些除草剂的活性成分。农作物被洒到除草剂，也会死亡。草甘磷抗性基因能使植物对草甘磷具有抗性。如果这个基因能通过基因工程转入农作物中，就能使农作物即使被洒到除草剂也能存活。现有植株A、B、C、D、E、F，其中A和D对草甘磷敏感，B和E天然具有抗性，C和F经过了转基因处理，但是否有效仍然未知。植株A、B和C浇清水，D、E和F浇的水中含有草甘磷成分的除草荆。
(1)假设草甘磷抗性基因被转移到植株F中并成功表达。预测D、E和F在浇了草甘磷后是否能健康生长，并说明理由。________。
(2)要检测植株F的DNA中是否插入了草甘磷抗性基因，需要运用____方法。该方法需要用到探针，探针是指____。F植株浇的水中含有草甘磷成分的除草剂用于检测转基因是否成功，这属于___水平的检测。
(3)基因工程除了可用于抗除草剂植物的培养，还可用于进行基因治疗。基因治疗包括有________________________________________。

【推荐2】乳铁蛋白广泛分布于人和其他哺乳动物的乳汁中，具有抑菌、抗肿瘤等功能。利用转基因技术生产重组人乳铁蛋白不仅能解决天然乳铁蛋白资源短缺的问题，而且能够提供对人类更有价值的人乳铁蛋白（hLF）。重组人乳铁蛋白转基因奶山羊的制备流程如图1所示。回答下列问题：
   

限制酶	AseI	SalI	BamHI
识别序列及切割位点	5'-AT↓TAAT-3' 3'-TAAT↑TA-5'	5'-G↓TCGAC—3' 3'-CAGCT↑G—5'	5'-G↓GATCC-3' 3'-CCTAG+G↑5'

(1)图1中，选择人乳腺细胞作为提取RNA的材料，是因为____。
(2)图1中，①过程需要用到的工具酶是____，②过程常用的方法是____。
(3)图2为pEB质粒的模式图，其中AseI、SalI、BamHI代表限制酶切点（识别序列及切割位点如表所示），neoR为新霉素抗性基因，GFP基因为绿色荧光蛋白基因，GFP基因的作用是____。图2中的启动子应选择在奶山羊乳腺细胞中特异性表达的基因的启动子，目的是____。
(4)为保证质粒和hLF基因的正确连接，结合表和图2信息可知，图1中PCR扩增时应选用下列4种引物中的____。
①5'-GCATTAATATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3'
②5'-GCGTCGACATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC-3'
③5'-GTTATTAATTCACACTCTAGGATCGTTGGTAAGGGACAC-3'
④5'-GTTGGATCCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC-3'
(5)为检测转基因奶山羊体内的hLF基因是否成功表达，可以采用的方法是____。

【推荐3】某种小麦具有极强的耐盐性，其耐盐性与小麦液泡膜Na⁺/K⁺逆向转运蛋白基因（耐盐基因）有关。科学家将该基因转移到水稻细胞中，获得了转基因耐盐水稻新品种。回答下列有关问题：
（1）理论上基因组文库含有生物的________基因；而cDNA文库含有生物________的基因。
（2）若要从该种小麦中获得Na⁺/K⁺逆向转运蛋白基因，可首先建立该种植物的基因组文库，再从中________出所需基因。
（3）将Na⁺/K⁺逆向转运蛋白基因导入水稻细胞中的常用方法是________。
（4）为保证Na⁺/K⁺逆向转运蛋白基因（耐盐基因）在水稻细胞中能够表达，运载体上应含有特定的________（填“复制原点”或“启动子”或“标记基因”）
（5）筛选出含有目的基因的水稻细胞，经过________过程，培养出愈伤组织，再诱导愈伤组织形成水稻幼苗。将转基因幼苗转入高浓度的NaCl溶液中进行耐盐试验，用非转基因幼苗做对照，培养一个月后观察现象，若________则说明转基因植株获得了耐盐特性。
（6）假如用得到的二倍体转基因耐盐植株自交，子代中耐盐与不耐盐植株的数量比为3∶1时，则可推测该耐盐基因整合到了________（填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”）。