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题型:非选择题-解答题 难度:0.65 引用次数:248 题号:22252727
血管为肿瘤的增殖和转移提供了有利条件。M蛋白是人体内抑制血管生长的因子,可作为肿瘤治疗的潜在药物。将控制M蛋白合成的基因m导入酵母细胞中进行表达,可获得大量M蛋白。下图为酵母表达载体(质粒K)的示意图(SacI、EcoRI、NotI、SalI为限制酶切割位点,切割产生的黏性末端均不相同)。

回答下列问题。
(1)5'—AOX位于基因的上游,紧邻转录起始位点,该结构最可能是____
(2)已知基因m中无上述任一限制酶切割位点。为提高连接效率并保证基因m和载体的正确连接,对基因m进行PCR扩增时,需在基因m的上游引物和下游引物中分别引入____限制酶切割位点。
(3)将PCR扩增获得的基因m与酶切后的质粒K进行连接,构建基因m的表达载体。随后,将酶切后的质粒K(a组)与构建的表达载体(b组)分别转入大肠杆菌,并在含有氨苄青霉素的培养基上培养。已知未环化的质粒会被大肠杆菌核酸酶水解,若a组与b组培养基中均有菌落产生,a组出现菌落的原因可能是杂菌污染或____(答出1点即可)。由此推测,b组培养基上的菌落____(填“一定”或“不一定”)含有基因m。
(4)将构建成功的基因m表达载体导入组氨酸合成缺失的酵母突变体中,在____的培养基上培养,以筛选出含有表达载体的酵母细胞。
(5)可运用____技术在分子水平上检测M蛋白是否成功表达。若观察到M蛋白对血管内皮细胞增殖有抑制作用,说明获得的M蛋白____

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非选择题-解答题 | 适中 (0.65)
【推荐1】人乳铁蛋白(hLF)对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究,主要流程如图。图中AseI、NheI、SalI、BamHI代表相关限制酶切点,neor为新霉素抗性基因,BLG基因为B乳球蛋白基因,GFP基因为绿色荧光蛋白基因。
   
(1)过程①所需要的酶是______,该过程不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT-PCR,原因是_______
(2)为便于hLF基因插入pEB质粒中,需在引物的_______端添加______两种限制酶的识别序列。
(3)若利用PCR技术扩增某基因片段时消耗了62个引物分子,则该过程扩增了_____次。过程②中,hLF基因插入到BLG基因之后的目的是______
(4)将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养,再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞中_____,以便筛选出转染成功的细胞。
2023-05-21更新 | 68次组卷
非选择题-解答题 | 适中 (0.65)
名校
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(1)酵母菌的细胞周期包含分裂间期和分裂期,前者主要完成________
(2)研究人员检测了Whi5蛋白在细胞周期中的变化,如图1结果显示,进入细胞间期的G1期后,Whi5蛋白浓度_______,该变化完成后细胞才进入S期。由此推测Whi5蛋白浓度降低可以_______细胞分裂。


(3)为进一步确认Whi5蛋白如何感知酵母菌周围环境,从而决定是否进入细胞周期。科研人员用NaCl和乙醇处理来模拟酵母菌生活的不良环境,结果如图2。


①结合图1,据图2推测,在不良环境中,酵母菌的细胞周期可能会_______(填“变长”或“变短”)。
②为确定Whi5基因的表达情况,科研人员将其与荧光蛋白基因连接,构建同时表达两种蛋白的融合基因。据图3可知,用PCR扩增鉴定融合基因是否构建成功时,应选择的引物组合是_______

③科研人员用蛋白质合成抑制剂CHX处理酵母细胞并检测其Whi5蛋白含量变化,结果显示不良环境中的Whi5蛋白维持稳定。据此推测,在不良环境中Whi5蛋白__________(填“会”或“不会”)降解,所以酵母细胞_________________
2023-01-04更新 | 80次组卷
非选择题-解答题 | 适中 (0.65)
【推荐3】研究人员为治疗糖尿病提出了下图所示的方法。回答下列问题:

(1)为保持细胞正常的二倍体核型,图中分离培养的体细胞一般选用________的细胞。核移植的受体细胞一般选用处于M Ⅱ期的卵母细胞,进行相关显微操作时,一般用微型吸管一并吸出________
(2)图中所获得的ES细胞是从________中分离而来。利用PCR技术扩增正常胰岛素基因的前提条件是________
(3)重组细胞B进行定向诱导分化成功的标志是________。与异体移植相比,该治疗糖尿病的方法的突出优点是________
2023-02-09更新 | 80次组卷
共计 平均难度:一般