【推荐1】下图是几种常见的单细胞生物，请据图回答下列问题：
   
(1)图中______（填序号）具有核膜。图①~⑤中生物，不具有的生命系统结构层次是____________。
(2)图中④的绝大多数种类是营腐生或寄生的异养型生物，而图中的______（填序号）是自养型生物，其中⑤含有的色素是____________。
(3)淡水水域中N、P等无机盐过量时，造成____________现象，使蓝细菌和绿藻等大量繁殖，会形成水华，影响水质和水生动物的生活。

【推荐2】哈瓦苏湖是一个位于科罗拉多河上的人工湖。湖内有机质较丰富，有较多的蓝细菌、绿眼虫、变形虫、草履虫及水生植物等。请回答：

（1）研究人员对哈瓦苏湖水体制作装片，在显微镜下观察进行研究，在低倍镜下看到了物像如图甲所示。要对①放大进行重点观察，显微镜的操作包括以下步骤：
a．移动载玻片；b．调节光圈和反光镜；c．转动转换器；d．转动细准焦螺旋。
正确的操作顺序是_______________________。
（2）该研究人员通过正确的操作在高倍镜下观察①，绘制模式图如图乙所示。据图可以判断该细胞属于______（填“原核细胞”或“真核细胞”）。
（3）湖内能进行光合作用的生物，除绿色植物外，还有______________等。若哈瓦苏湖水体被污染造成富营养化，导致鱼类大量死亡，请分析可能原因是____________________。

【推荐3】如图表示动、植物细胞二合一亚显微结构模式图。请据图回答：（在[   ]内填数字， 上填文字。）

(1)与原核细胞相比，图中细胞结构具有的特征是______。
(2)和动物细胞比较，高等植物细胞特有的细胞结构是______、______、______。
(3)蛋白质等生物大分子物质的合成、加工和运输通道是[       ]______。
(4)12 还可以分布在______细胞中。该细胞器与细胞的______有关。
(5)能生成 ATP 的细胞器有[       ]______、[       ]______。
(6)细胞中的分泌蛋白最初在______中合成，随后转移到结构 8 中形成有一定空间结构的蛋白质。5 和 8 之间可通过______在结构和功能上建立联系。

【推荐1】工业上所说的发酵是指微生物在有氧或无氧条件下，通过分解与合成代谢将某些原料物质转化为特定产品的过程。利用微生物发酵制作酱油在我国具有悠久的历史。某企业通过发酵制作酱油的流程示意图如下。

回答下列问题：
(1)米曲霉发酵过程的主要目的是使米曲霉充分生长繁殖，大量分泌制作酱油过程所需的酶类，这些酶中的____________、____________能分别将发酵池中的蛋白质和脂肪分解成易于吸收、风味独特的成分，如将蛋白质分解为小分子的肽和____________。
(2)在发酵池发酵阶段添加的乳酸菌属于____________（填“自养厌氧” “异养厌氧”或“异养好氧”），酵母菌是一种单细胞真菌，能以___________作为主要营养物质和能量来源。
(3)为了在发酵池中添加性状优良的菌种，科技人员进行了下列PCR部分实验操作。请完成表格相关内容：

参与成分	相关操作
缓冲液	PCR反应缓冲液中一般要添加①____
模板、引物、原料和酶	需提供DNA模板、2种引物、4种脱氧核苷酸和②____
PCR仪	能够自动调节③_____的仪器
反应过程	每次循环一般分为④_____三步
循环次数	一次PCR一般要经历⑤________循环
产物鉴定	常采用⑥___来鉴定PCR的产物

【推荐2】抗除草剂转基因作物的推广可有效减轻除草劳动强度、提高农业生产效率。图1为抗除草剂转基因玉米的技术流程。

   

(1)为了减少限制酶识别序列的影响，科研人员研发了新的DNA重组方法：无缝克隆In-Fusion技术（图2），其中In-Fusion酶可以将任何具有相同15bp末端序列的线性DNA分子进行连接，类似同源重组。

   

①科研人员希望应用以上方法构建含有A和GUS基因的重组DNA分子，首先获得了3种DNA分子如图3，然后混合进行In-Fusion反应。

如果引物2上额外添加的片段对应于GUS基因中加粗的e片段，那么引物1和引物4上额外增加的片段分别对应载体中的片段______。完成重组反应后，将产物表达载体加入经过______处理的农杆菌中。
②为筛选成功转入目标重组DNA分子的菌落，可以选取引物______扩增目的基因并电泳检测。请在图4中画出阳性菌落（成功转入目标重组DNA分子的菌落）的电泳结果______。
(2)农杆菌转化愈伤组织时，用含______的选择培养基筛选转化的愈伤组织。转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化愈伤组织（假阳性）也可能在选择培养基上生长。已知报告基因GUS表达产物能催化无色物质K呈现蓝色，则排除假阳性的原理是：报告基因GUS在______细胞中表达，而在农杆菌中不表达，因此用无色物质K处理上述能正常生长的愈伤组织，假阳性的农杆菌______（出现/不出现）蓝色。

【推荐3】某地中海贫血（TDT）是单基因病，严重时可能危及生命。人类γ基因启动子上游的调控序列中含有BCL11A 蛋白结合位点，该位点结合B CL11A 蛋白后，γ基因的表达被抑制。通过改变该结合位点的序列，解除对γ基因表达的抑制，可对TDT患者进行基因治疗。科研人员扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，以确定BCL11A 蛋白结合位点的具体位置。相关信息如图所示。

(1)图中启动子是_______________识别和结合位点，且启动子是具有方向性的，目的基因只有正确插入启动子和终止子之间才能正确表达。在表达载体中绿色荧光蛋白基因作为___________，要使绿色荧光蛋白基因表达出来，图b中还缺启动子，请判断即将插入的启动子方向_____________（填“向左”“向右”）。
(2)PCR 扩增 γ基因上游不同DNA 片段的原理是__________________，为使PCR 反应体系中的模板解链为单链，需要满足的条件是_____________________。
(3)将扩增后的产物定向插入载体指导绿色荧光蛋白基因表达，需要在引物末端添加限制酶识别序列。据图可知，在R末端添加的序列所对应的限制酶应为_______________，在F₁～F₇末端添加的序列所对应的限制酶是________________。
(4)从产物扩增到载体构建完成的整个过程中，除限制酶外，还必须用到的工具酶有DNA连接酶和_____________________，其中前者催化形成的化学键是_______________。
(5)将构建的载体导入除去BCL11A基因的受体细胞，成功转化后，含F₁～F₆与R扩增产物的载体表达荧光蛋白，受体细胞有荧光，含F₇与R扩增产物的受体细胞无荧光。含F₇与R扩增产物的受体细胞无荧光的原因是____________________。
(6)向培养液中添加适量的雌激素，含F₁～F₄与R扩增产物的受体细胞不再有荧光，而含F₅～F₆与R扩增产物的受体细胞仍有荧光。若γ基因上游调控序列上与引物序列所对应的位置不含有 BCL11A 蛋白的结合位点序列，据此结果可推测，BCL11A 蛋白结合位点位于_________________________。

【推荐1】EPO是促红细胞生成素的英文简称，是一种激素样物质，可促进体内新红细胞生成。人类已可通过基因工程合成EPO基因，并采用中国仓鼠卵巢（CHO）细胞表达系统来获取产物，其过程如图。
   
(1)从人体组织中提取EPO的mRNA，通过逆转录得到_____，再通过______获得大量EPO基因。
(2)供体母鼠通常情况下每次排卵8~12枚，为使其超数排卵，需注射______激素以排出更多的卵子，培养到______期与获能的精子相遇时，精子穿越透明带，完成体外受精。
(3)①过程构成了基因表达载体，内部包括不可缺少的组成部分，其中______能驱动基因的转录。
(4)采用_______技术，将重组表达载体导入小鼠受精卵中，将受精卵移入发育培养液中继续培养。培养液成分除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及________等物质。
(5)当胚胎发育至________时期，向受体移植，为获得更多个转基因胚胎，要将囊胚阶段的胚胎的_______均等切割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。此外，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行_____。
(6)若想检验转基因仓鼠是否成功表达EPO，可以采用______技术对血液来进行检测。

【推荐2】回答有关基因工程的问题。
科学家将人的生长激素基因与某质粒进行重组，将得到的重组质粒导入受体菌，经筛选后获得含重组质粒受体菌。如图表示人生长激素基因的定位及所用质粒有关信息。请据图回答下列问题：

（1）基于上述信息，该项基因工程的目的基因是______。
（2）如同时用图中三种限制酶完全切割图中质粒和含目的基因的DNA的片段，分别可得到______个DNA片段。
A．3和3    B．3和4     C．4和3     D．4和4
（3）为了让目的基因与质粒DNA合理重组，同时便于筛选重组质粒，选用的限制酶最可能为______。
A．酶E和酶G     B．酶F和酶G    C．只用酶E    D．只用酶G
为了得到含重组质粒的受体菌，需要对导入操作后的受体菌进行培养筛
（4）图2中A、B培养基一般为______（固体/液体）培养基。
（5）所选用受体菌的相关要求是______。
A．需要含有Ap^r，不能含有Tc^r
B．需要含有Tc^r，不能含有Ap^r
C．需要含有 Ap^r和Tc^r
D．不能含有Ap^r和Tc^r
（6）若能成功筛选，请描述A、B两个培养基中存活受体菌的差异？______

【推荐3】三氯生是一种广谱抗菌剂，广泛应用于肥皂、牙膏等日用化学品中，可替代抗生素用于基因工程中筛选含目的基因的受体细胞。已知fabV基因（从霍乱弧菌中发现的烯酯酰ACP还原酶基因）可以使大肠杆菌抵抗三氯生，下图1是培育抗三氯生大肠杆菌的流程示意图。回答下列问题：

(1)通过PCR方法获取fabV基因时，需要先根据______设计两种特异性引物序列，引物的作用是使DNA聚合酶从引物的______（填“5＇”或“3＇”）端开始连接脱氧核糖核苷酸。扩增过程中，DNA链变性后，控制温度下降到50℃左右，目的是______。
(2)在步骤②中，要将fabV基因插入到质粒的______之间。在步骤③中，重组质粒“移植”入大肠杆菌前，先用Ca²⁺处理大肠杆菌细胞，这样做的目的是______。在步骤④中，将得到的受体大肠杆菌接种在含有______的培养基中选择培养。
(3)fabV基因的部分碱基序列如下图2所示，不同限制酶的切割位点如表所示，则切割fabV基因可选择表中的______两种限制酶。

限制酶	Nco I	Sph I	Nhe I	BamH I
识别序列和切割位点	5＇-C↓+CATGG-3＇	5＇-GCTAG↓C-3＇	5＇-G↓GATCC-3＇	5＇-G↓CTAGC-3＇

【推荐1】请回答下列有关基因工程及其应用的问题：
（1）多种限制酶和DNA连接酶，以及_________酶的发现，为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。
（2）基因工程的核心步骤是_________；重组Ti质粒载体结构中T-DNA的作用是_________________。
（3）科学家设法使烟草细胞形成微创伤，受伤部位细胞产生的乙酰丁香酮可吸引农杆菌向受伤部位集中，这时农杆菌携带某种目的基因进入烟草细胞。获得的转基因烟草细胞通过_________技术最终获得转基因烟草，检测烟草细胞是否成功导入该目的基因的方法是_________。
（4）利用_____________处理植物体细胞可得到原生质体，将目的基因导入原生质体的方法中，除题（3）所述方法外，还可采用_________。

【推荐2】Bt基因为苏云金芽胞杆菌基因，因其表达产物Bt毒蛋白具有杀虫效果好、安全、高效等优点而成为应用最为广泛的杀虫基因。以下为培育转Bt基因抗虫棉幼苗的基本操作过程:请分析回答:
(1)目的基因的获取 从基因组文库中获取目的基因，建立基因组文库需用到______酶:也可以从cDNA文库中获取，从其中获取的Bt基因因为缺少______而不利于其在受体细胞中表达；还可以提取______作为模板，通过PCR技术获得。
(2)构建基因表达载体 基因表达载体应具有______有利于整合Bt基因。为了方便筛选含有Bt基因的细胞以及使Bt基因能独立复制并稳定存在细胞中，作为表达载体应含有______及______。
(3)将目的基因导入受体细胞 通常用农杆菌转化法将外源基因导入到植物细胞，将______的农杆菌与棉花的愈伤组织细胞混合进行转化，影响转化效率的因素有______ (A.重组Ti质粒大小B.愈伤组织的生理状态C.培养基的物理性质D.农杆菌的活性)。然后用______处理以去除农杆菌及筛选含有目的基因的愈伤组织细胞。也可将愈伤组织细胞放在较高渗透压甘露醇溶液内，通过机械法或酶解法获得______，采用______技术将外源基因导入细胞。
(4)检测目的基因及其表达产物 可制备______作为基因探针，利用______技术检测棉花细胞中是否存在Bt基因。利用______作为抗原，制备单抗来检测Bt基因是否表达。

【推荐3】人乳头瘤病毒（HPV）是一组球形、微小、无包膜的环状双链DNA病毒，该病毒的持续感染是女性宫颈癌的主要发病原因。HPV的主要衣壳蛋白是L₁，结构如图1所示。注射HPV疫苗作为目前唯一可以有效预防宫颈癌的有效方法，一直受到公众的高度关注，HPV疫苗（不含核酸）制备的基本流程如图2所示。回答下列问题：

(1)图2中用于制备HPV疫苗的目的基因是____，可以用______方法获取和扩增该基因。
(2)利用基因工程生产HPV疫苗的核心步骤是____（序号），该步骤用到的酶有____。③过程通常需要用____处理酵母菌或大肠杆菌，使之处于感受态。
(3)HPV持续感染导致细胞癌变的过程中，细胞发生的变化有：____（至少写出两点）。
(4)接种HPV疫苗时，一般需要连续接种3针，是否接种3针疫苗的间隔时间越长，其免疫预防的效果越好？并说明原因____。据图分析，该HPV疫苗安全又有效的原因是____。