【推荐1】2020年诺贝尔化学奖授予新型基因编辑技术CRISPR/Cas9的研发者。研究发现，细菌细胞中的一种适应力免疫系统可以侦测到病毒DNA并消灭它。病毒感染细菌后，细菌通过向导RNA把Cas9蛋白引导到外源DNA并与之结合，然后利用Cas9蛋白的DNA内切酶活性将病毒DNA分解，阻断病毒在细菌体内的繁殖。在利用基因工程生产Cas9蛋白的过程中，可以由mRNA反转录形成Cas9的cDNA。回答下列问题：
(1)Cas9的cDNA合成过程需要用到___酶，形成RNA-DNA杂交分子，核酸酶H破坏___键使RNA-DNA杂交分子中的RNA链降解，使之成为单链DNA，在合成另一条链形成双链DNA时___（填“会”或“不会”）形成DNA-蛋白质复合体，原因是___。
(2)获取Cas9的cDNA作为目的基因后需要通过PCR技术扩增，该技术的前提是___，以便合成引物，在___酶的作用下从引物起始进行互补链的合成。
(3)基因工程的核心是___。质粒中插入的目的基因的上下游应分别具有___才能使目的基因表达和发挥作用。

【推荐2】2022年诺贝尔生理学或医学奖授予斯万特·帕博，以表彰他在“关于已灭绝人类基因组和人类进化的发现”方面的贡献，斯万特·帕博及其团队从古骨遗骸中分离DNA并进行DNA测序，从而进一步研究人类进化的进程。DNA测序常用双脱氧链末端终止法，其基本原理如图所示。ddNTP是一种类似于正常dNTP的双脱氧核苷三磷酸，具有终止DNA单链延伸的作用，它能随机渗入合成的DNA链，一旦渗入，合成立即终止，于是得到各种不同大小的片段。请回答下列问题：

(1)双脱氧链末端终止法进行DNA测序的主要原理是____________，图中过程①需要的条件为______，目的是____________。
(2)据图可知该反应体系中除引物、模板DNA、4种dNTP和DNA聚合酶外还需要加入______，以获得不同长度的DNA单链片段。PCR反应过程中，引物的作用是____________。据图中的电泳结果可确定DNA的碱基序列，其原理是____________。
(3)斯万特·帕博团队为研究智人与已知最近、但已灭绝的亲属尼安德特人之间的关系，决定先分析尼安德特人线粒体的DNA而不是核DNA，原因是____________。（答出两点即可）

【推荐3】科学家将肠乳糖酶基因导入奶牛受精卵核基因组中，再通过核移植、胚胎培养和胚胎移植等技术获得转基因克隆牛分泌的乳汁，乳汁中乳糖含量大大降低。这有利于解决我国约有1/3的成年人因对乳糖不耐受食用牛奶后出现腹泻等不适症状的问题。分析回答下列问题：
(1)利用PCR技术扩增肠乳糖酶基因时，PCR反应中的每次循环可分为变性、复性和__________三步，其中使反应体系中的模板DNA解聚为单链的条件是__________，解聚为单链过程破坏了DNA双链分子中的__________，复性的结果是__________。
(2)科学家将肠乳糖酶基因与__________细胞中特异表达的基因的启动子等调控元件重组在一起，以使乳汁中的乳糖含量降低。构成启动子的基本单位是__________。
(3)为了促进转肠乳糖酶基因牛的繁育，将含肠乳糖酶基因的胚胎细胞的细胞核移入牛的__________。然后用物理或化学方法激活重构胚，激活重构胚的目的是__________。

【推荐1】人胰岛素基因表达的最初产物是一条肽链构成的前胰岛素原，经加工后形成具有两条肽链（A链和B链）的有生物活性的胰岛素。此后科学家又提出了利用基因工程改造大肠杆菌生产人胰岛素的两种方法：“AB”法是根据胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列人工合成两种DNA片段，利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素；“BCA”法是利用人体购胞中的mRNA得到胰岛素基因，表达出胰岛素原后再用特定酶切掉C肽段。这两种方法使用同一种质粒作为载体。

(1)由于_____，AB法中人工合成的两种DNA片段均有多种可能的序列

A．一种密码子可能对应多种氨基酸

B．一种氨基酸可能对应多种密码子

C．一种氨基酸可能对应多种反密码子

D．多种氨基酸可能对应一种反密码子

(2)“BCA”法是利用人体_____细胞中的mRNA（选填：胰岛A细胞、胰岛B细胞、受精卵、血细胞）再由mRNA经_____过程得到胰岛素基因，_____（选填“AB”、“BCA”、“AB和BCA”）法获取的目的基因中不含肾上腺素基因。
(3)如图是用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。为使目的基因与载体正确连接，在设计PCR引物时可添加限制酶_____的识别序列，PCR引物应该添加在识别序列的_____（3' /5'）端。通过上述方法获得人的胰岛素基因后，需要通过PCR技术进行扩增胰岛素基因，则加入的引物种类是_____种。引物序列中的GC含量越高，对PCR过程中的_____步骤（写出具体过程）影响最大，越_____（有利于/不利于）目标DNA的扩增。
(4)PCR扩增的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，正确的_____

A．PCR反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶，该酶主要在退火过程起作用

B．待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率

C．PCR技术在生物体外模拟了细胞内DNA边解旋边复制的DNA半保留复制过程

D．PCR技术除了可以进行DNA体外扩增，还可以用于基因的定点突变

(5)半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色。经钙离子处理大肠杆菌后，与重组质粒混合培养一段时间，将大肠杆菌接种到添加了_____和_____的培养基上后，筛选出的_____色菌落即为工程菌种。

【推荐2】科研人员构建了可表达GM-CSF（一种细胞因子）的重组质粒，以增加白细胞数量，通过基因工程技术大量生产GM-CSF，满足临床需求。M-CSF基因及相关限制酶的酶切位点如图所示。请回答下列问题。                                                    

(1)利用PCR技术扩增CM-CSF基因时，需要在引物上添加_____限制酶的识别序列，同时也便于与质粒正确连接。
(2)质粒和GM-CSF基因结合形成的重组质粒在受体细胞中能够稳定存在并发挥作用，在CM-CSF基因的首端必须具有_____，其作用是_____
(3)筛选已导入GM-CSF基因的大肠杆菌时，先将大肠杆菌接种到含有抗生素______的培养基中培养，从获得的菌落中取菌体接种到含有抗生素_____的培养基中，若_____（填“有菌落生长”或“无菌落生长”），则获得的培养物符合要求。

【推荐3】油菜是我国重要的油料作物，黄籽油菜比黑籽油菜的含油量更高，色素积累更少，但我国主栽的甘蓝型油菜缺乏天然的黄籽种质资源。研究表明，TT8基因作为一个重要的基因参与了黄籽性状的形成。科研人员首次利用CRISPR/Cas9技术对甘蓝型油菜中的BnaTT8基因进行定点突变改造（如图1），PCR扩增BnaTT8基因，构建基因表达载体（如图2），再将重组质粒通过农杆菌转化法导入受体甘蓝型油菜甲9707（J9707）中，创建甘蓝型油菜黄籽突变体，CRISPR/Cas9介导的BnaTT8基因突变可以显著提高种子的含油量和蛋白质含量，使得用甘蓝型油菜种子生产的菜籽油的营养价值更高。请回答下列问题：

(1)图1中向导RNA与BnaTT8基因按照_______原则特异性结合，Cas9蛋白切割BnaTT8基因使a链和互补链中的_______断裂，通过随机增添、删除或替换部分碱基对，获得所需目的基因。
(2)PCR扩增目的基因的原理是_______。为保证BnaTT8基因正确插入质粒中，需要在引物的_______（填“3'端”或“5'端”）添加限制酶的识别序列。
(3)图2字母A~E表示不同限制酶的切割位点，构建基因表达载体时，将BnaTT8基因插入_______（填字母）处，目的是_______。重组质粒导入受体细胞后，可在个体水平上通过_______来鉴定BnaTT8基因是否表达。

【推荐1】重组人血小板生成素（rhTPO）是一种新发现的造血生长因子，下图为通过乳腺生物反应器产生rhTPO的相关过程。回答下列问题：

(1)乳腺生物反应器的原理是rhTPO基因与________的启动子等调控组件构建成基因表达载体，通常采用________技术将重组质粒导入受精卵，获得转基因动物。最终使rhTPO基因在转基因动物的乳腺中表达，通过分泌乳汁获得rhTPO。
(2)采用SRY—PCR方法对早期胚胎进行性别鉴定，样本细胞取自________，以Y染色体中含有的特异性SRY基因为探针，通过________方法进行胚胎的性别鉴定。
(3)据图分析，筛选含有重组质粒的受体细胞需要在含卡那霉素的培养基上进行，原因是________。

【推荐2】北极比目鱼中有抗冻基因，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，请回答：

（1）利用过程①的方法构建的基因文库称为__________。与真核基因相比，其结构中不含______序列。
（2）为使过程①获取的目的基因在番茄细胞中能够表达，在构建表达载体时，需在目的基因的两端加入__________，确认抗冻基因是否正确表达，应检测植株中__________是否呈阳性。
（3）将重组质粒导入农杆菌，并通过农杆菌的转化作用，可以将目的基因导入番茄体细胞中染色体的DNA上，其原理是________________。
（4）发现一种抗冻能力很强的细菌（Ac菌），通过细胞融合技术构建杂种抗冻体系的植株过程中能否只用一种酶分离原生质体？___________，理由是_________________。

【推荐3】为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。
（1）获得耐盐基因后，可通过_____扩增目的基因。构建重组DNA分子所用的限制性核酸内切酶作用于图中的_____处，DNA连接酶作用于_____处。（填“a”或“b”）
（2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞常用的方法有_____法和_____法。
（3）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的_____作探针进行分子杂交检测，又要用_____方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。
（4）若将该转基因植株的花药在高盐碱的培养基上作离体培养，则获得的再生植株群体中耐盐型植株大约占_____%。
（5）利用基因工程技术培育耐盐水稻新品系，相比传统的杂交育种方法，其优点主要表现为_____。