基因表达载体的构建是基因工程的核心。图1为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图2表示目的基因及限制酶切点，图3表示目的基因上的DNA片段，图4表示质粒。回答下列问题：
（1）若用图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，就其特异性而言，切开的是__________ 之间相连的键。
（2）图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述正确的是__________ 。
A.若图中的ACT能决定一个氨基酸，则ACT可称为一个密码子
B.DNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于②处，解旋酶作用于①处
C.若只用这个片段中的3个碱基对，排列出的DNA片段有64种
D.就游离的磷酸基而言，该片段与重组质粒相比多了2个游离的磷酸基
（3）若利用PCR技术增加目的基因的数量，由图2可知，A、B、C、D四种单链DNA片段中应选取__________ 作为引物（DNA复制子链的延伸方向5’→3’）。该DNA分子在PCR仪中经过4次循环后会产生等长的目的基因片段__________ 个。
（4）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是__________ 。如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同时对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等，则形成含有完整抗四环素基因的DNA片段有__________ 种。
（5）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含__________ 基因，以利于筛选出含重组质粒的受体菌。目的基因能在大肠杆菌细胞内表达出相同的蛋白质，其遗传学基础是____________________ 。
（1）若用图1所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，就其特异性而言，切开的是
（2）图3为目的基因中的某一片段，下列有关叙述正确的是
A.若图中的ACT能决定一个氨基酸，则ACT可称为一个密码子
B.DNA聚合酶和DNA连接酶都可作用于②处，解旋酶作用于①处
C.若只用这个片段中的3个碱基对，排列出的DNA片段有64种
D.就游离的磷酸基而言，该片段与重组质粒相比多了2个游离的磷酸基
（3）若利用PCR技术增加目的基因的数量，由图2可知，A、B、C、D四种单链DNA片段中应选取
（4）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是
（5）如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含
更新时间：2017-05-31 20:31:22
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【推荐1】人胰岛素基因表达的最初产物是一条肽链构成的前胰岛素原，经加工后形成两条肽链（A链和B链）的有生物活性的胰岛素。此后科学家又提出了利用基因工程改造大肠杆菌生产人胰岛素的两种方法：“AB”法是根据胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列人工合成两种DNA片段，利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素；“BCA”法是利用人体某细胞中的mRNA得到胰岛素基因，表达出胰岛素原后再用特定酶切掉C肽段。这两种方法使用同一种质粒作为载体。请据图分析并回答下列问题：
(1)由于________________________ ，“AB”法中人工合成的两种DNA片段均有多种可能的序列。“BCA”法是利用人体__________________ 细胞中的mRNA，再由mRNA经__________________ 得到的胰岛素因，__________________ （填“AB”、“BCA”或“AB和BCA”）法获取的目的基因中不含人胰岛素基因启动子。
(2)如图是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。为使目的基因与载体正确连接，在设计PCR引物时可添加限酶__________________ 识别序列，PCR引物应该添加在识别序列的______________ （填“3’或5’）端。通过上述方法获得人的胰岛素基因后，需要通过PCR技术进行扩增，若计划用1个胰岛素基因为模板获得m（m大于2）个胰岛素基因，则消耗的引物总量是_______________ 个。引物序列中的的GC含量越高，对PCR过程中的__________________ 步骤（写出具体过程）影响最大，越_______________ （填“有利于”或“不利于”）目标DNA的扩增。
(3)PCR扩增的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，下列叙述中正确的有____________。
(4)β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。经钙离子处理大肠杆菌后，与重组质粒混合培养一段时间，将大肠杆茵接种到添加了____________ 和X-gal的培养基上筛选出_________ 色的菌落即为工程菌种。
(1)由于
(2)如图是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。为使目的基因与载体正确连接，在设计PCR引物时可添加限酶
(3)PCR扩增的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，下列叙述中正确的有____________。
| A．PCR反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶，该酶主要在退火过程起作用 |
| B．待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶的浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率 |
| C．进行电泳时，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动 |
| D．琼脂糖溶液中加入的核酸染料利于DNA在紫外灯下被检测 |
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【推荐2】在过去的新冠疫情中，新冠病毒抗原检测试剂盒曾被广泛投入使用，各地区也在广泛进行核酸检测。为了探究这两种检测方式的准确性（结果以阳性比例为指标）随感染天数的变化规律，进行了以下实验。
(1)实验思路：选取健康未感染过新冠病毒的小鼠100只，分别标号1－100：并同时进行病毒感染处理，然后______ ，计算小鼠的抗原检测阳性和核酸检测阳性比例。
(2)实验分析：
抗原检测（原理见上图）往往是通过鼻拭子采集细胞及黏液样本，在缓冲液里进行细胞破碎处理，释放出各种物质，然后加入样品槽中，与样品槽中的新冠病毒蛋白单抗混合后，利用______ 法进行分离，从而确定是否为抗原阳性。核酸检测往往是通过咽拭子采集细胞及黏液样本，经一定的处理后得到病毒遗传物质，然后经过______ 扩增，通过检测产物量来确定是否为核酸阳性。若抗原检测阳性，则会在______ 线上出现阳性标记，若C线上没有出现阳性标记，则可能的原因有（填出一个即可）______ 。实验结果发现核酸检测阳性结果的出现早于抗原检测，且核酸检测阳性的小鼠比例都高于抗原检测阳性比例，可能的原因是______ 。
(3)实际应用：
与核酸检测相比，抗原检测有______ 的优点；实际使用中发现，若人体感染了其他病毒，在非常偶然的情况下也会造成抗原检测出现假阳性，原因是______ 。
(1)实验思路：选取健康未感染过新冠病毒的小鼠100只，分别标号1－100：并同时进行病毒感染处理，然后
(2)实验分析：
抗原检测（原理见上图）往往是通过鼻拭子采集细胞及黏液样本，在缓冲液里进行细胞破碎处理，释放出各种物质，然后加入样品槽中，与样品槽中的新冠病毒蛋白单抗混合后，利用
(3)实际应用：
与核酸检测相比，抗原检测有
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【推荐3】稻瘟病和褐飞虱是严重影响水稻生产的两大病虫害。稻瘟病病菌种类繁多，为培育抗病虫害的水稻新品种，育种工作者进行了下列相关研究。
(1)现有纯合水稻品系甲和乙，甲对稻瘟病病菌X表现为抗病，对稻瘟病病菌Y感病；乙对病菌Y抗病，对病菌X感病。对病菌X的抗病与感病由一对基因M、m控制；对病菌Y的抗病与感病由一对基因H、h控制。
①育种工作者将甲和乙作为亲本进行杂交，得到F1,F1自交得F2。F1对病菌X和Y均表现为抗病，检测F2统计结果如下表所示。
据表推测这两对抗病基因在染色体上的位置关系为______ 。甲和乙的基因型分别为___________ 。同时对病菌X和Y具有抗性的F2植株中纯合子所占比例为___________ 。
②育种工作者根据M/m、H/h的基因序列设计特异性引物，分别对F2部分植株的DNA进行PCR扩增。已知M比m片段短，h比H片段短，扩增结果如图所示。据图判断符合选有目标的植株编号为___________ ，依据是_______ 。
①若F2对病菌Z的表型及比例为___________ ,则甲和乙对病菌Z的抗性基因可能位于同一个位点。
②若F2对病菌Z的表型及比例为___________ ，则甲和乙对病菌Z的抗病基因位于两对同源染色体上。
(3)通过筛选获得具有上述抗病基因且品质优良的纯合品系丙，欲将抗褐飞虱性状（由一对等位基因控制）与品系丙的抗病及各种优良性状整合在同一植株上，可采用的正确有种步骤是___________ （按正确顺序选填下列字母）。
a．抗褐飞虱品系与野生型进行杂交
b．抗褐飞虱品系与品系丙进行杂交
c．品系丙与野生型进行杂交
d．杂交后代自交筛选抗褐飞虱个体，使其与品系丙杂交
e．杂交后代自交筛选抗稻瘟病个体，使其与抗褐飞虱品系杂交
f．多次重复d,筛选抗褐飞虱个体
g．多次重复e,筛选抗稻瘟病个体
自交，后代中选取目的基因纯合的植株，进行稻瘟病抗性和褐飞虱抗性田间实验鉴定。
(1)现有纯合水稻品系甲和乙，甲对稻瘟病病菌X表现为抗病，对稻瘟病病菌Y感病；乙对病菌Y抗病，对病菌X感病。对病菌X的抗病与感病由一对基因M、m控制；对病菌Y的抗病与感病由一对基因H、h控制。
①育种工作者将甲和乙作为亲本进行杂交，得到F1,F1自交得F2。F1对病菌X和Y均表现为抗病，检测F2统计结果如下表所示。
对病菌Y 对病菌X | 抗病 | 感病 |
抗病 | 150株 | 53株 |
感病 | 52株 | 17株 |
②育种工作者根据M/m、H/h的基因序列设计特异性引物，分别对F2部分植株的DNA进行PCR扩增。已知M比m片段短，h比H片段短，扩增结果如图所示。据图判断符合选有目标的植株编号为
①若F2对病菌Z的表型及比例为
②若F2对病菌Z的表型及比例为
(3)通过筛选获得具有上述抗病基因且品质优良的纯合品系丙，欲将抗褐飞虱性状（由一对等位基因控制）与品系丙的抗病及各种优良性状整合在同一植株上，可采用的正确有种步骤是
a．抗褐飞虱品系与野生型进行杂交
b．抗褐飞虱品系与品系丙进行杂交
c．品系丙与野生型进行杂交
d．杂交后代自交筛选抗褐飞虱个体，使其与品系丙杂交
e．杂交后代自交筛选抗稻瘟病个体，使其与抗褐飞虱品系杂交
f．多次重复d,筛选抗褐飞虱个体
g．多次重复e,筛选抗稻瘟病个体
自交，后代中选取目的基因纯合的植株，进行稻瘟病抗性和褐飞虱抗性田间实验鉴定。
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【推荐1】为获得转G3-GFP融合基因纯合小鼠，科研人员将绿色荧光蛋白（GFP）基因和G3基因拼接到一起，然后导入小鼠受精卵。目的基因和载体所在DNA上的限制酶识别位点及相关限制酶识别序列如图1所示，A、B、C、F、R为不同引物。实验获得能正常表达两种蛋白质的杂合子雌、雄小鼠各一只，利用荧光蛋白活体成像系统进行检测，发现两者均为GFP转基因阳性小鼠。____ （填“3′”或“5'”）端需分别插入限制酶________ 的识别序列。
(2)在GFP基因的扩增及重组载体的构建过程中，除限制酶外，还需要的酶有________ 。
(3)将实验获得的两只雌、雄杂合子小鼠（P）进行杂交获得F1若干，利用荧光蛋白活体成像系统检测后，研究人员从这些小鼠中提取Gata3基因相关DNA片段，设计了引物A和C用于PCR扩增，扩增产物电泳结果如图2所示，则________ 小鼠是Gata3-GFP基因纯合子小鼠；若用引物A和B进行PCR扩增，________ （填“能”或“不能”）区分GFP转基因阳性小鼠中的杂合子和纯合子，原因是________ 。
(4)研究人员常用DNA分子杂交技术检测目的基因是否整合到受体细胞的染色体DNA上，检测时用____ 标记的目的基因单链片段作为探针。不对称PCR能够大量制备单链DNA片段，其基本原理是采用不等量的一对引物，经若干次循环后，低浓度的引物（限制性引物）被消耗尽，以后的循环只产生高浓度引物（非限制性引物）的延伸产物，结果获得大量单链DNA（ss-DNA）。若反应体系中原有100个模板DNA,最初10个循环后限制性引物耗尽，再进行20个循环，理论上可制备ss-DNA________ 个（用科学记数法表示），在这30个循环中ss-DNA的产生量主要受________ 的影响。
(2)在GFP基因的扩增及重组载体的构建过程中，除限制酶外，还需要的酶有
(3)将实验获得的两只雌、雄杂合子小鼠（P）进行杂交获得F1若干，利用荧光蛋白活体成像系统检测后，研究人员从这些小鼠中提取Gata3基因相关DNA片段，设计了引物A和C用于PCR扩增，扩增产物电泳结果如图2所示，则
(4)研究人员常用DNA分子杂交技术检测目的基因是否整合到受体细胞的染色体DNA上，检测时用
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【推荐2】大豆是中国重要粮食作物之一，原产于中国，古称菽，有五千年栽培历史，主产区为中国东北，其种子含有丰富的植物蛋白质。大豆最常用来做各种豆制品、榨取豆油、酿造酱油和提取蛋白质，豆渣或磨成粗粉的大豆也常用于禽畜饲料。大豆的研究和改良对保障粮食生产安全有着重要意义。研究发现，DNA序列D能在基因A表达的转移酶作用下，从序列D所在染色体的某个位置转移到其他位置，或随机转移到其他染色体上。科研人员利用这一原理来构建稳定遗传的大豆突变体库。
（1）科研人员分别将序列D和基因A作为_______ ，插入Ti质粒的特定序列，利用农杆菌转化植物，从而筛选得到转D植株和转A植株，此转化过程的原理是_______ 。
（2）科研人员将纯合的转D植株与转A植株杂交，并根据转入两种植株中的DNA序列的差异，用PCR方法确定杂交是否成功，结果如下图所示。
据图可知，F1植株编号为_______ 的杂交组是杂交成功的，分析其他杂交组杂交不成功的原因是_______ 。
（3）对杂交成功的所有F1植株进行序列D检测，发现其位置均没有发生转移，推测序列D的转移只发生在_____ （填“体细胞”或“配子”）中，按照这种推测，如果让杂交成功的F1植株自交，理论上F2植株中序列D发生了位置转移的最多可占_______ 。
（4）序列D随机转移会导致被插入基因发生突变，从而可以在F2植株中筛选得到多种突变体。让F2植株自交，应在F3中筛选出_______ 的植株（从序列D和基因A的存在情况考虑）用作构建突变体库，原因是这种植株_______ 。
（1）科研人员分别将序列D和基因A作为
（2）科研人员将纯合的转D植株与转A植株杂交，并根据转入两种植株中的DNA序列的差异，用PCR方法确定杂交是否成功，结果如下图所示。
据图可知，F1植株编号为
（3）对杂交成功的所有F1植株进行序列D检测，发现其位置均没有发生转移，推测序列D的转移只发生在
（4）序列D随机转移会导致被插入基因发生突变，从而可以在F2植株中筛选得到多种突变体。让F2植株自交，应在F3中筛选出
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【推荐3】阿尔茨海默病是一种持续性神经功能障碍，患者脑部大多有β-淀粉样蛋白（Aβ）沉积形成的斑块且患者神经元会发生“过劳死”。淀粉样前体蛋白（APP）的酶切片段被分泌到细胞外发挥功能，其中一段会形成Aβ，因此以往研究更多关注在Aβ上。然而针对Aβ研发的药物在近年均被证明无效，为寻找阿尔茨海默病的新治疗途径，研究者希望通过实验了解APP其他酶切片段（比如sAPPα）的生理功能。
（1）由于APP蛋白集中表达于神经元突触部位，研究者推测，分泌的sAPPα可能与突触部位细胞表面的_______ 结合，进而影响神经调节。经过筛选，发现sAPPα能与GABABR蛋白结合。为确定sAPPα与GABABR蛋白的结合区域，研究者分别构建了含_____ 、编码GABABR不同亚基的目的基因、一段特殊多肽（HA）的基因以及终止子的_________ ，转入细胞。
（2）将sAPPα加入实验组转基因细胞的培养基中一段时间，去除培养基，利用特异性荧光抗体可分别标识出细胞膜上的GABABR蛋白不同亚基及sAPPα。虽然GABABR蛋白不同亚基的抗体较难获得，但研究者可用共转入细胞的_____________ 标识出细胞膜上表达的GABABR蛋白亚基，因为______________ 。根据图1实验结果，可知sAPPα仅与GABABR1a亚基相结合，判断依据是 ____________ 。
（3）为研究sAPPα对神经元电信号的影响，在体外培养自身不表达APP蛋白的神经元，并在实验组细胞的培养基中加入sAPPα，对比神经元电信号的变化（如图2），可知_________________ 。
（4）进一步研究显示，sAPPα通过图3所示途径影响神经元之间的信号传递。请结合图3内容，解释sAPPα的作用机理________ 。
（5）最终，研究者发现sAPPα中一个由17个氨基酸组成的多肽片段（APP 17mer）就具有sAPPα的生理功能。为验证该多肽在生物个体水平是否有效，有人设计了以下实验方案：
将同一批正常小鼠分为两组，一组为实验组，一组为对照组。
①请指出该实验方案存在的缺陷：_____ 。
②请改进本实验方案（写出实验组和对照组处理）：___________ 。
（6）本研究对阿尔茨海默病治疗的启发是______________ 。
（1）由于APP蛋白集中表达于神经元突触部位，研究者推测，分泌的sAPPα可能与突触部位细胞表面的
（2）将sAPPα加入实验组转基因细胞的培养基中一段时间，去除培养基，利用特异性荧光抗体可分别标识出细胞膜上的GABABR蛋白不同亚基及sAPPα。虽然GABABR蛋白不同亚基的抗体较难获得，但研究者可用共转入细胞的
（3）为研究sAPPα对神经元电信号的影响，在体外培养自身不表达APP蛋白的神经元，并在实验组细胞的培养基中加入sAPPα，对比神经元电信号的变化（如图2），可知
（4）进一步研究显示，sAPPα通过图3所示途径影响神经元之间的信号传递。请结合图3内容，解释sAPPα的作用机理
（5）最终，研究者发现sAPPα中一个由17个氨基酸组成的多肽片段（APP 17mer）就具有sAPPα的生理功能。为验证该多肽在生物个体水平是否有效，有人设计了以下实验方案：
将同一批正常小鼠分为两组，一组为实验组，一组为对照组。
| 组别 | 实验处理 | 检测 |
| 实验组 | 给小鼠喂食人工合成的该多肽片段（APP 17mer） | 分别检测实验组和对照组小鼠海马神经元的电信号 |
| 对照组 | 给小鼠喂食清水 |
①请指出该实验方案存在的缺陷：
②请改进本实验方案（写出实验组和对照组处理）：
（6）本研究对阿尔茨海默病治疗的启发是
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【推荐1】普通棉花中含β-甘露糖苷酶基因（GhMnaA2），能在纤维细胞中特异性表达，产生的β-甘露糖苷酶催化半纤维素降解，棉纤维长度变短。为了培育新的棉花品种，科研人员构建了反义 GhMnaA2基因表达载体，利用农杆菌转化法导入棉花细胞，成功获得转基因棉花品种，具体过程如下。其中SmaⅠ、NotⅠ、HindⅢ、 BamHⅠ四种限制酶的识别序列和酶切位点分别为 CCC↓GGG、 GC↓GGCCGC、A↓GCTT、 G↓GATCC。请分析回答：
（1）①过程中所用的限制性内切酶是___________ 。用SmaⅠ切割DNA后形成_____ 末端。影响限制酶处理效果的因素可能有___________ 。
①反应温度 ②缓冲液pH ③限制酶的浓度 ④DNA样品的纯度
（2）基因表达载体除了图示组成外，至少还有___________ 等（至少答两个）。
（3）③过程中用酶切法可鉴定正、反义表达载体。SmaⅠ酶和NotⅠ酶切正义基因表达载体获得0．05kb、3．25kb、5．95kb、9．45kb四种长度的DNA片段，则用NotⅠ酶切反义基因表达载体获得DNA片段的长度应是___________ kb和___________ kb。
（4）④过程表示利用农杆菌介导转化棉花细胞的过程。农杆菌中可以整合到棉花细胞染色体DNA的区段是___________ 。
（5）导入细胞内的反义 GhMnaA2转录的mRNA能与胞内的 GhMna2转录的mRNA互补配对，从而抑制基因的表达，其意义是______________________ 。
（1）①过程中所用的限制性内切酶是
①反应温度 ②缓冲液pH ③限制酶的浓度 ④DNA样品的纯度
（2）基因表达载体除了图示组成外，至少还有
（3）③过程中用酶切法可鉴定正、反义表达载体。SmaⅠ酶和NotⅠ酶切正义基因表达载体获得0．05kb、3．25kb、5．95kb、9．45kb四种长度的DNA片段，则用NotⅠ酶切反义基因表达载体获得DNA片段的长度应是
（4）④过程表示利用农杆菌介导转化棉花细胞的过程。农杆菌中可以整合到棉花细胞染色体DNA的区段是
（5）导入细胞内的反义 GhMnaA2转录的mRNA能与胞内的 GhMna2转录的mRNA互补配对，从而抑制基因的表达，其意义是
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【推荐2】为研究肝癌致病机理，科研工作者利用下图所示的差异杂交法和基因工程获取相关癌基因以作进一步研究。请据图回答问题：
（1）D过程需要回收__________ （填“未杂交”或“杂交分子”）的含32P的cDNA单链，继而通过人工合成，获得__________ ， 并用其构建基因文库。用该种方法构建的基因文库与基因组文库相比，不同之处在于①__________________ ；②___________________
（2）从图1构建的基因文库中获取的目的基因，一般还需进行人工改造后才能用于基因表达载体的构建，改造需在基因两端添加__________ ，以便其随载体导入到受体细胞后，能正常调控表达过程；同时还需添加______________ ，以便目的基因与运载体的成功连接。
（3）上图2为改造后的目的基因。图3为两种质粒，其中Ampr为氨苄青霉素抗性基因，Tetr为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，其表达产物可使底物X-Gal呈蓝色。EcoRⅠ（0.7Kb）、NotⅠ（1.2Kb）等为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离（1kb=1000个碱基对）。
①图3中能作为载体的最理想的质粒是__________ （填“X”或“Y”），用选定的质粒与图2的目的基因构建基因表达载体时，应选用的限制酶是__________ 。为筛选出成功导入目的基因的受体细胞，培养基中应适量添加__________ 。
②若用EcoRⅠ完全酶切上述①中获得的重组质粒，并进行电泳观察，可出现四种长度不同的片段，其长度分别为1.7kb、5.3kb、__________ 。
（1）D过程需要回收
（2）从图1构建的基因文库中获取的目的基因，一般还需进行人工改造后才能用于基因表达载体的构建，改造需在基因两端添加
（3）上图2为改造后的目的基因。图3为两种质粒，其中Ampr为氨苄青霉素抗性基因，Tetr为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，其表达产物可使底物X-Gal呈蓝色。EcoRⅠ（0.7Kb）、NotⅠ（1.2Kb）等为限制酶及其切割位点与复制原点之间的距离（1kb=1000个碱基对）。
①图3中能作为载体的最理想的质粒是
②若用EcoRⅠ完全酶切上述①中获得的重组质粒，并进行电泳观察，可出现四种长度不同的片段，其长度分别为1.7kb、5.3kb、
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【推荐3】我国动物胚胎学家童第周与美国坦普恩大学生满江先生合作，做了如下实验：他们从单尾鳍鲫鱼的卵细胞质内，提取了一种小分子核酸，并将这种核酸注射到双尾鳍金鱼的受精卵中，在发育成长的320条幼鱼中，有106条鱼由双尾鳍变成了单尾鳍，双尾鳍金鱼表现出鲫鱼的单尾鳍性状。由上述资料回答下列问题：
（1）他们提取的这种核酸是__________ ，该核酸应该由控制鲫鱼单尾鳍发育的基因_________ 产生。
（2）实验中还有214条幼鱼没有发育成双尾鳍，可能的原因有：__________ （写出三点原因）
（3）推测106条双尾鳍鱼发育成熟后相互交配，生出的子代小鱼尾鳍的性状是_______ （单尾鳍或双尾鳍），理由是__________ 。
（4）如果对注射了核酸的双尾鳍金鱼的受精卵进行胚胎分割，应在_____ 期进行，分割时必须将____ 平分。
（1）他们提取的这种核酸是
（2）实验中还有214条幼鱼没有发育成双尾鳍，可能的原因有：
（3）推测106条双尾鳍鱼发育成熟后相互交配，生出的子代小鱼尾鳍的性状是
（4）如果对注射了核酸的双尾鳍金鱼的受精卵进行胚胎分割，应在
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【推荐1】菊天牛是菊花的主要害虫之一。科研人员将抗虫基因转入菊花，培育出抗虫菊花。下图是获得转基因菊花的技术流程。请据图回答下列问题：
(注：卡那霉素抗性基因KanR为标记基因，菊花叶片对卡那霉素高度敏感）
（1）质粒是基因工程中最常用的载体，其化学本质是___________ 。
（2）限制酶M和N切割后产生的相同黏性末端是_________ ，连接它们所需要的基本工具是_________ 。
（3）为了促进对重组质粒的吸收，可用________ 处理土壤农杆菌；使其处于感受态。
（4）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素、营养物质以及_______ 的固体培养基中，在适宜条件下进行培养，筛选转基因菊花。
（5）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据抗虫基因（目的基因）两端的部分碱基序列设计特异引物，若其中一种引物共用了31个，则目的基因最多扩增了_______ 次。
（6）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如表所示。请据表回答：
①对照组应饲喂_____________ 与人工饲料混合物。
②实验结果显示_____________ 差异显著，说明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫有较强的毒杀作用。
(注：卡那霉素抗性基因KanR为标记基因，菊花叶片对卡那霉素高度敏感）
（1）质粒是基因工程中最常用的载体，其化学本质是
（2）限制酶M和N切割后产生的相同黏性末端是
（3）为了促进对重组质粒的吸收，可用
（4）将愈伤组织转移到添加一定浓度植物激素、营养物质以及
（5）用PCR方法检测转基因菊花是否含有目的基因时，需根据抗虫基因（目的基因）两端的部分碱基序列设计特异引物，若其中一种引物共用了31个，则目的基因最多扩增了
（6）将转基因菊花嫩茎及叶片与人工饲料以适当比例混合后饲喂菊天牛2龄幼虫，实验结果如表所示。请据表回答：
| 组别 | 处理 | 菊天牛死亡率（％) |
| 实验组 | 饲喂转基因菊花植株的嫩茎及叶片与人工饲料混合物 | 53.33 |
| 对照组 | 13.33 |
①对照组应饲喂
②实验结果显示
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(0.4)
【推荐2】某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题：
（1）若利用PCR技术获取抗盐基因，需利用_____________ 寻找抗盐基因的位置并进行扩增。
（2）将含有抗盐基因的烟草细胞培养为烟草植株需借助_______________ 技术。
（3）在构建重组质粒时，应选用_______________ 两种酶对质粒和抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的惟一性。
（4）为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的_______________ 作探针进行分子杂交检测，又要用_______________ 方法从个体水平鉴定烟草植株的耐盐性。
（1）若利用PCR技术获取抗盐基因，需利用
（2）将含有抗盐基因的烟草细胞培养为烟草植株需借助
（3）在构建重组质粒时，应选用
（4）为了确定抗盐烟草是否培育成功，既要用放射性同位素标记的
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较难
(0.4)
【推荐3】Cre/loxP酶系统是在基因或染色体水平上对生物基因进行遗传改造的一种技术，可以在DNA的特定位点上执行碱基序列的删除、插入以及重组等，从而实现基因的定点编辑。
(1)图1是利用Cre/loxP酶系统敲除基因的过程。loxP序列具有方向性，由中间的间隔序列和两侧的反向重复序列组成。当某一条DNA片段上待敲除基因的两端存在同向loxP序列时，Cre酶识别并结合到loxP序列的反向重复序列区。两个loxP序列的间隔序列被Cre酶定点切开，4个黏性末端序列交错两两连接，其中待敲除基因两端的序列进行连接，连接时形成的化学键是___________ ，敲除的基因片段会形成___________ （填“线状”或“环状”）结构。
(2)图2是利用Cre/loxP酶系统构建融合基因的过程。首先要用PCR对Bt基因和Bar基因分别扩增，以获得所需要的DNA片段，然后对连接后的DNA片段用Cre/loxP酶系统处理获得Bt-Bar融合基因片段。在用PCR1扩增Bt基因时，所用的2种引物的结合位置在____________ ；又有研究表明，大多数限制酶对裸露的位点不能识别切割，因此必须对识别序列5'末端进行修饰并加上一个至几个保护碱基，如GGG。由此推测，对Bar基因引物5’端序列的要求是___________ 。
(3)图3是用Cre/loxP酶系统敲除转基因烟草细胞内Bar基因的部分过程。已知图中的启动子和终止子可在烟草细胞中正常发挥作用，Cre酶基因在环境中存在Tam化学物质时才能激活表达。重组Ti质粒中的Bar基因作为基因表达载体中的___________ 可对转化后的烟草细胞进行筛选。进行图3所示敲除后，DNA片段1中的Bt基因不能正确表达，据图分析，原因是___________ ；若不对融合基因中的Bar基因进行敲除处理，仅在翻译水平上不让Bar基因表达，请利用Cre/loxP酶系统提出解决方案___________ 。
(4)图4是经过修饰后的转基因烟草细胞内的融合基因所在片段及相关引物的结合位点。为检测Bar基因是否被成功敲除同时未影响Bt基因的正常表达，可用PCR技术进行鉴定：
实验组：首先提取在有Tam环境下培养的转基因烟草细胞质中的总RNA，进行逆转录获得cDNA，然后加入引物1和引物2进行PCR扩增，再进行琼脂糖凝胶电泳，观察有无Bt基因和Bar基因的条带。
对照组：用未进行敲除处理的转基因烟草细胞，其余同实验组。
若实验组敲除成功，则实验组和对照组的电泳结果分别为___________ 。
(1)图1是利用Cre/loxP酶系统敲除基因的过程。loxP序列具有方向性，由中间的间隔序列和两侧的反向重复序列组成。当某一条DNA片段上待敲除基因的两端存在同向loxP序列时，Cre酶识别并结合到loxP序列的反向重复序列区。两个loxP序列的间隔序列被Cre酶定点切开，4个黏性末端序列交错两两连接，其中待敲除基因两端的序列进行连接，连接时形成的化学键是
(2)图2是利用Cre/loxP酶系统构建融合基因的过程。首先要用PCR对Bt基因和Bar基因分别扩增，以获得所需要的DNA片段，然后对连接后的DNA片段用Cre/loxP酶系统处理获得Bt-Bar融合基因片段。在用PCR1扩增Bt基因时，所用的2种引物的结合位置在
(3)图3是用Cre/loxP酶系统敲除转基因烟草细胞内Bar基因的部分过程。已知图中的启动子和终止子可在烟草细胞中正常发挥作用，Cre酶基因在环境中存在Tam化学物质时才能激活表达。重组Ti质粒中的Bar基因作为基因表达载体中的
(4)图4是经过修饰后的转基因烟草细胞内的融合基因所在片段及相关引物的结合位点。为检测Bar基因是否被成功敲除同时未影响Bt基因的正常表达，可用PCR技术进行鉴定：
实验组：首先提取在有Tam环境下培养的转基因烟草细胞质中的总RNA，进行逆转录获得cDNA，然后加入引物1和引物2进行PCR扩增，再进行琼脂糖凝胶电泳，观察有无Bt基因和Bar基因的条带。
对照组：用未进行敲除处理的转基因烟草细胞，其余同实验组。
若实验组敲除成功，则实验组和对照组的电泳结果分别为
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