【推荐1】【选修3——现代生物科技专题】
下图为某科研小组采用“基因靶向”技术先将小鼠的棕褐毛基因导入黑色纯种小鼠的胚胎干细胞（ES细胞）中，再将改造后的胚胎干细胞移植回囊胚继续发育成小鼠的过程。据图分析回答：

（1）天然质粒往往需要经过改造才能作为基因工程中的运载体，经改造后的质粒同时具备的条件有___________（填序号）。
①标记基因            ②多个限制酶切割位点            ③对受体细胞无害        ④启动子        ⑤起始密码子
（2）该过程使用了工具酶___________和DNA连接酶，完成目的基因的获取和___________。
（3）过程III常用的方法是___________，第III步操作后，还需经过筛选出含___________的重组DNA分子胚胎干细胞的过程，才能将该胚胎干细胞注射到囊胚中。
（4）改造后的胚胎干细胞移植回囊胚能继续发育成小鼠，其根本原因是______________________。
（5）胚胎干细胞在功能上具有发育的全能性，形成组织、器官必须要进行______________________。
（6）若经过图示过程培育成的小鼠仍为黑色，则能否说明未成功导入棕褐毛基因？_________。你的理由是____________________________________________________________。

【推荐2】科研人员利用转基因技术将抗TMV基因（一种抗烟草花叶病毒的基因）转入到烟草细胞中，从而培育出抗TMV的烟草，主要流程如图所示。请回答下列问题。

(1)科研人员通过逆转录的方法人工合成目的基因，并利用PCR技术进行扩增，在PCR反应体系中除了含有缓冲溶液、目的基因、原料之外，还应含有________。
(2)构建重组Ti质粒时需要使用________将目的基因和Ti质粒进行拼接，这类酶的作用是恢复被同种限制酶切开的______。重组Ti质粒中包含启动子、终止子及抗生素抗性基因等，其中启动子是_________的部位，从而驱动目的基因的转录。
(3)构建成功的重组Ti质粒常用_________法导入到烟草细胞中。将烟草细胞培养在含卡那霉素的培养基中的目的是____________，从而培育出抗TMV的烟草植株。

【推荐3】农业科技工作者在烟草中找到了一抗病基因，现拟采用基因工程技术将该基因转入棉花，培育抗病棉花品系。请回答下列问题。
（1）要获得该抗病基因，可采用__________________、_____________等方法。
（2）将载体与该抗病基因连接，连接后得到的DNA分子称为_________________。
（3）再将连接得到的DNA分子导入农杆菌，然后用该农杆菌去_____________棉花细胞，利植物细胞具有的______________性进行组织培养，从培养出的植株中______________出抗病的棉花。
（4）该抗病基因在棉花细胞中表达的产物是_______
A．淀粉                    B．脂类                           C．蛋白质                    D．核酸

【推荐1】抗凝血酶Ⅲ在人体中主要由肝脏合成，是存在于血浆中的一种重要的抗凝血因子。研究者将人的抗凝血酶Ⅲ基因导入奶山羊细胞，获得乳汁中含有大量人抗凝血酶Ⅲ的转基因克隆奶山羊。已知β-酪蛋白广泛存在于哺乳动物的乳汁中。回答下列问题：
(1)获取人抗凝血酶Ⅲ基因：从人的肝细胞中提取mRNA，再通过_________获取cDNA，利用PCR扩增目的基因。根据人抗凝血酶Ⅲ基因上游及下游的碱基序列，设计2种特异性引物，在PCR过程中，引物的作用是_________。
(2)基因表达载体的构建：重组人抗凝血酶Ⅲ基因表达载体由山羊β-酪蛋白基因启动子、人抗凝血酶Ⅲ基因、标记基因和终止子等结构组成，其中_________决定了人抗凝血酶Ⅲ基因只能在山羊乳腺细胞中特异性表达。
(3)成纤维细胞的转化：取幼龄雌性动物的组织，经酶处理后获得成纤维细胞悬液，放在动物细胞培养液中培养，从幼龄动物取材的原因是_________。然后用_________法将基因表达载体导入成纤维细胞。
(4)转基因奶山羊的获得：从奶山羊中获取卵母细胞，将阳性转基因成纤维细胞注入_________，通过电融合法使两细胞融合，供体进入卵母细胞，形成重构胚。常通过_________（填物理方法）激活重构胚。经胚激活，培养获得早期胚胎，胚胎移植前，需要用孕激素对受体母羊进行同期发情处理。
(5)克隆羊的鉴定：取少量克隆羊组织细胞提取DNA，将用_________处理后的产物进行电泳，检测目的基因是否成功导入。待克隆羊成年并产奶，收集奶样，可用_________技术鉴定克隆羊是否成功表达人抗凝血酶Ⅲ。若最终获得的抗凝血酶Ⅲ不能很好地完成其功能，可利用_________工程进行改造。

【推荐2】大肠杆菌pUC18质粒是基因工程中常用的载体。某限制酶在此质粒上的唯一酶切位点位于LacZ基因中，如果没有插入外源基因，LacZ基因便可表达出β-半乳糖苷酶。当培养基中含有IPTG和X—gal时，X—gal便会被β-半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落。反之，则形成白色菌落。下图表示利用此质粒实施基因工程的主要流程。请分析并回答下列问题：

(1)对已获得的目的基因可利用______技术进行扩增。
(2)目的基因插入质粒构建重组质粒的过程中，需要DNA连接酶恢复______键。
(3)将试管Ⅰ中的物质和大肠杆菌共同置于试管Ⅱ进行转化，大肠杆菌需事先用Ca²⁺进行处理，目的是_________。
(4)将试管Ⅱ中的菌液接种于选择培养基上培养，培养基中应含有大肠杆菌必需的营养物质和生长因子，还应加入IPTG、X-gal以及氨苄青霉素，其中加入氨苄青霉素的作用是筛选出______。
(5)若观察到培养基上出现______色菌落，则说明大肠杆菌中已成功导入了重组质粒。如果作为受体细胞的大肠杆菌也含有LacZ基因，则不利于重组质粒的筛选，原因是______。

【推荐3】如图为培育蓝玫瑰的过程（字母A代表相应的结构，数字代表过程或方法）。回答下列问题：

（1）可以根据基因的__________（答出三点）等特性，从基因文库中得到我们所需要的目的基因，如蓝色素基因。
（2）过程①需要用到的工具酶有__________。经③和④得到蓝玫瑰的过程体现了植物细胞的__________。
（3）一个基因表达载体的组成，除了目的基因以外，还必须有启动子、终止子和标记基因等。标记基因的作用是____________________。
（4）过程②中采用最多的方法是农杆菌转化法。采用农杆菌感染时，常将含重组质粒的农杆菌与受伤的叶片等共同培养，采用受伤叶片的原因是____________________。
（5）可以通过__________的方法来检测目的基因是否翻译成蛋白质。

【推荐1】黄萎病是一种危害棉花的常见疾病，科学工作者通过转基因技术将抗黄萎病基因——葡萄糖氧化酶基因（GO）导入棉花，获得抗黄萎病棉花。下图为构建的重组质粒的示意图，已知T-DNA上的基因在农杆菌中不能表达，而在植物细胞中能表达。请回答下列问题：
(1)构建基因表达载体时，利用______酶将GO定向接入Ti质粒。Ti质粒上nptII作为______，用于鉴别、筛选有重组质粒的受体细胞。
(2)在下图所示重组质粒中，目的基因的启动子和终止子应位于______（填“Bar的两端”或“GO的两端”或“Bar-GO的两端”）。启动子具有______的作用。

(3)切取经无菌培养的棉花幼苗下胚轴，直接转入含重组质粒的农杆菌培养液中侵染5~10min后，将下胚轴放入愈伤组织诱导培养基中培养2天。成功转化的棉花细胞能在含有______的培养基中生长增殖，未成功转化的细胞不能在该培养基中生长增殖。为了检测转基因棉花是否含有葡萄糖氧化酶，可采用______法进行检测。

【推荐2】PCR是一种体外扩增DNA片段的技术，能在短时间内以少量的DNA为模板复制出大量的DNA,在临床的病原菌检测、遗传病的产前诊断和基因工程等方面具有非常重要的价值。回答下列问题。
(1)PCR需要在一定的缓冲液中提供DNA模板、分别与两条模板链相结合的两种引物、_____和______酶，使用该酶是因为_______。
(2)PCR循环过程中，95°C的作用是_______，引物可在______过程中与模板DNA通过___键结合。
(3)基因工程中利用PCR技术扩增目的基因时，一个目的基因片段经过30次循环后可得到____个目的基因片段。
(4)要检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因以及目的基因是否转录出了mRNA,检测方法是_______检测原理是_______。

【推荐3】抗虫和耐除草剂玉米双抗12-5是我国自主研发的转基因品种。为给转基因生物安全的监管提供依据，采用PCR方法进行目的基因监测，反应程序如图所示。请回答下列问题：

(1)培育转基因玉米将目的基因插入质粒构建重组载体时，所需要的工具酶是_____________构建的重组基因表达载体中必须含有标记基因，其作用是______________________。
(2)图示预变性及后延伸的作用分别是__________________________。
(3)利用PCR技术体外扩增目的基因时，需要有____________，以便根据这一序列合成引物。PCR35次循环共需引物_____个。
(4)有人认为对于转基因品种经检测含有目的基因后即可上市，这种说法错误的原因是_____

【推荐1】如图是牛胚胎分割示意图，请据图回答问题：

（1）成熟的精子必须经历________过程才能与次级卵母细胞结合，然后次级卵母细胞再继续完成分裂。
（2）胚胎分割应选择发育到______或______期的胚胎进行操作。
（3）囊胚内有一团细胞，逐渐发育成______，最终发育成动物体的______。
（4）通过胚胎分割产生的两个或多个个体具有什么特点?___________________。

【推荐2】通过体细胞核移植技术发展的治疗性克隆，解决了器官移植中供体器官的短缺和排斥反应的问题。下图是治疗性克隆的过程图解。回答下列问题：

（1）去核的卵细胞取自于女性卵巢排卵后在输卵管中_________期的卵母细胞。
（2）重组细胞发育的过程中，细胞开始分化发生在____________期。其中的个体较大的细胞_____，将来发育为有特定功能的组织；个体较小的细胞叫_____________细胞。
（3）治疗性克隆时要想获得基因型完全相同的两个胚胎，可采用___________________技术，然后再在培养过程中诱导分化，如血液组织干细胞可用于治疗___________病等。
（4）若病人是红绿色盲的女性，移植器官成功后，该病人和色觉正常的男性结婚，为避免生出红绿色盲的小孩建议出生性别为________________的小孩，原因是______________________。

【推荐3】人的血清白蛋白在临床上需求量很大。将人的血清白蛋白基因转入奶牛细胞中，就可以利用牛的乳腺细胞生产血清白蛋白。大致过程如下：

(1)获得人血清白蛋白基因后，常利用_____技术，在体外将其大量扩增。要使人的血清白蛋白基因在奶牛乳腺细胞中特异性表达，完整的基因表达载体要包括目的基因、_____、_____、标记基因等部分。
(2)通过①采集的精子需放在一定浓度的肝素溶液中进行培养，其目的是_____。受精过程中防止多精入卵的生理反应包括_____反应和卵细胞膜反应。
(3)要实现过程②超数排卵，应在性成熟母牛发情期某一阶段用 _____处理，然后在恰当时期进行胚胎收集，这个收集过程称为_____。
(4)若要一次获得多只完全相同的转基因牛，在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，应注意将_____均等分割。一般将胚胎培养至_____ 或_____期。
(5)进行动物早期胚胎的体外培养时，培养液中除了含有各种无机盐、有机盐、维生素、氨基酸、核苷酸等营养成分外，还要添加激素，以及 _____ 等天然成分。
(6)转基因牛进入泌乳期后，可以通过分泌乳汁来生产人类所需的血清蛋白，因而称为_____。