【推荐1】烟青虫是一种对烟草危害极大的昆虫，现要将一段抗烟青虫基因通过农杆菌转入烟草细胞，再通过组织培养技术得到抗烟青虫的转基因烟草。
(1)在构建表达载体的过程中，要先用两种不同的______分别切割目的基因和质粒，原因是防止，质粒自身环化，并保证______之后用连接酶连接形成______
(2)在以上重组质粒中，目的基因和抗卡那霉素抗性基因，都应该位于质粒的______片段内，原因是______
(3)用______处理农杆菌，可使重组的质粒更容易转入农杆菌，然后将得到的农杆菌和烟草细胞愈伤组织共同培养一段时间后，将愈伤组织置于含有______（抗生素）的培养基上进行组织培养，通过调整______（植物激素）的比例使其脱分化、再分化形成转基因植株，再用烟青虫进行进一步选择。

【推荐2】核酸疫苗是指将含有编码抗原蛋白的基因序列的质粒载体，通过一定的方法递送到宿主体内，通过宿主细胞表达抗原蛋白，从而诱发机体对该蛋白的免疫反应，进而达到预防疾病的目的。核酸疫苗包含DNA疫苗和mRNA疫苗两种，其中mRNA疫苗的安全性更高。回答下列问题:
(1)在构建抗原蛋白基因表达载体前，常通过___技术扩增该基因，利用该技术扩增目的基因时，需要2种引物，每次循环分___三步。反应体系中的模板DNA解为单链的条件是加热至90~95°C，目的是破坏DNA分子中的___键。
(2)构建的抗原蛋白基因表达载体除了含有目的基因外，还必须有启动子、终止子以及___等。其中，启动子是位于基因首端的一段特殊结构的DNA片段，是___识别和结合的部位。
(3)与DNA疫苗相比，mRNA疫苗的安全性更高，原因是______。

【推荐3】基因工程是新品种花卉培育中的一种重要技术手段。研究发现普通矮牵牛花因缺乏蓝色色素合成所需的转座酶而不能开蓝色花，因此研究人员尝试将从蔷薇花瓣细胞中分离提取的转座酶F35H基因转入普通的矮牵牛中，以期获得蓝色矮牵牛新品种，该过程所用的质粒与含转座酶F35H基因的DNA片段上相关限制酶的酶切位点分别如图1、图2所示。限制性内切核酸酶BamH I、Sau3A I、Hind III识别的碱基序列和酶切位点分别为、、。

请回答下列问题：
(1)图1质粒中没有显示的结构是______，启动子的功能是______________。
(2)基因工程中除质粒外，______也可以作为运载体。若用图中质粒和转座酶F35H基因构建基因表达载体时，最好选用______两种限制酶来切割质粒和含目的基因的DNA片段，理由是________。
(3)将构建好的重组质粒转入土壤农杆菌，最终成功导入蓝色素基因的农杆菌，在含氨苄青霉素培养基、含四环素培养基、同时含氨苄青霉素和四环素的培养基上的生存状况应该是_______________。
(4)检测转座酶F35H基因是否成功在普通矮牵牛细胞中转录，常采用的检测技术是______。
(5)通过基因工程，将转座酶F35H基因导入普通矮牵牛中，获得蓝色矮牵牛花新品种的育种原理是__________________。相比传统的花卉育种方法，利用基因工程育种的优点是_________（答出2点即可）。

【推荐1】根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
(1)限制酶切割DNA分子后产生的DNA片段，其末端类型通常有________和________。
(2)质粒载体用限制酶X(识别的序列由6个核苷酸组成)切割后产生的片段如下：

该酶识别的序列为__________________，切割的部位是________。
(3)为使切割后的载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用限制酶X切割外，还可用限制酶Y切割，两种酶共同的特点是______________________________。
(4)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即________DNA连接酶和________DNA连接酶，其中后者只能连接一种末端。
(5)基因工程中除质粒外，______________和________也可作为载体。

【推荐2】抗菌肽通常是由短氨基酸序列构成的小肽，具有广谱的杀菌活性。下图为通过基因工程生产抗菌肽的示意图（甲、乙、丙是局部放大图），请回答下列问题：
   
(1)PCR技术是基因工程中获取目的基因常用方法。PCR反应中每个循环包括变性、____________ 和_____________ 三个环节，需要在PCR反应体系中加入的酶是_____________ 。
(2)PCR反应中需要根据_____________ 设计引物，据图甲分析应选用的引物是______________ 。（填字母）
(3)据图乙、丙分析，过程①____________ （填名称）时选用限制酶________ ，以防自身环化。
(4)过程②需要用Ca²⁺处理大肠杆菌细胞，目的是____________ 。
(5)过程③将大肠杆菌放在含_____________ 的培养基上培养，可以筛选出菌落1、2、3、4、5，再影印到含____________ 的培养基上培养，即可得出1、5菌落为含目的基因的菌落。

【推荐3】人的生物节律异常与高血压、糖尿病和内分泌异常等多种疾病有关。我国科学家利CPISPR/Cas9基因编辑技术成功敲除猕猴成纤维细胞中的生物节律核心基因BMAL1，并将其与去核的卵母细胞融合，发育形成的早期胚胎植入代孕雌猴，共获得5只克隆猴，用于研究生物节律机制。回答下列问题：
(1)CPISPR/Cas9基因编辑技术的基本原理是利用特定的sgRNA与靶向基因的单链进行______而定位，并引导Cas9蛋白对靶向基因进行切割，从而将靶向基因进行定向敲除。可见，Cas9蛋白相当于基因工程中的_______。猕猴成纤维细胞中的生物节律核心基因BMAL1被CPISPR/Cas9技术切割后，还需用______处理，使切割后的基因BMAL1与外源DNA片段相连，实现对基因BMAL1的敲除，以破坏其功能。
(2)通常用_________的方法将成纤维细胞与去核的卵母细胞构建成重组细胞。重组细胞需要在发育培养液中培养，该培养液的营养成分比较复杂，除含无机盐和有机盐以外，还需要添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养物质，以及动物_____等天然成分。早期胚胎培养到_______期就可以进行胚胎移植，分娩后的猕猴经鉴别并确定是否为转基因猕猴。
(3)成纤维细胞能培育成转基因猕猴，说明__________。科学家选择转基因猕猴，而不选择小鼠等其他哺乳动物作为研究对象来研究生物节律机制，主要的原因是______________。

【推荐1】如图是将乙肝表面抗原基因转移到烟草细胞内生产乙肝疫苗的示意图，请据图回答下列问题：

   

(1)乙肝表面抗原基因常用PCR快速扩增，其原理是_______，一般分为_______三步。
(2)过程①表示______。为了使目的基因正常表达，其首端必须有启动子，它是_______识别和结合的部位。若限制酶切出了平末端，要选择______进行连接。
(3)图中将乙肝表面抗原基因导入烟草细胞的方法称为______。它利用了载体Ti质粒中含有_____序列，可以将目的基因整合到宿主细胞的染色体上。
(4)要检测烟草细胞中乙肝表面抗原基因是否合成出乙肝表面抗原蛋白，采用的方法是_______。

【推荐2】马铃薯是种植广泛的农作物，病毒侵染后导致产量大幅下降，培育脱毒和抗毒的马铃薯品种是提高产量的有效方法。请分析并回答。
（1）马铃薯茎尖病毒极少甚至无病毒，因此可将马铃薯茎尖接种在培养基中，培养基中添加生长素和细胞分裂素，诱导离体细胞经过_______________和_____________完成组织培养过程，从而形成脱毒苗。此过程说明植物细胞具有________________。
（2）为获得抗病毒的马铃薯植株，往往采用转基因技术，将病毒复制酶基因转移到马铃薯体内。其过程大致如下图所示。

①上述过程中，将目的基因导入马铃薯细胞使用了______________法。导入农杆菌时，首先要构建基因表达载体，这里需要的工具酶有_______________和_____________。目的基因导入马铃薯细胞后，是否可以稳定维持和表达，要通过检测与鉴定，马铃薯的DNA上是否插入了目的基因的检测方法是_______________，目的基因是否转录出了mRNA的检测方法是_______________________；通过做抗病毒接种实验，可以检测马铃薯是否具有抗病毒的特性，属于________水平的检测。
②该转基因马铃薯产生的配子中___________(填“一定”或“不一定”)含有目的基因。

【推荐3】下图为“乙肝基因工程疫苗”生产过程图解，质粒上箭头所指部位为相应的限制酶的切割位点。质粒中lacZ基因编码产生的酶可以分解培养基中的X-gal，产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。请回答下列问题：

回答下列问题。
(1)过程①选用限制酶的最佳方案是________。

A．只有BamHI	B．BamHI和EcoRI
C．EcoRV和BamHI	D．EcoRV和EcoRI

(2)构建基因表达载体时，一般将目的基因插在启动子和终止子之间。启动子的作用是_____________。
(3)过程②需要先将大肠杆菌用___________处理，目的是____________________。
(4)为了筛选含目的基因表达载体的大肠杆菌，可在培养大肠杆菌的通用培养基中额外加入__________，培养一段时间后挑选出____________（填“蓝色”或“白色”）的菌落进一步培养，从而获得大量目的菌。
(5)目的基因导入受体细胞后，常用___________技术检测目的基因是否翻译出乙肝病毒外壳。

【推荐2】植物叶肉细胞原生质体的分离和培养的主要过程可用下图所示图解简单表示：

（1）培育胚状体利用了_____________这一项生物技术，培养基中除了含有一定的营养外，还必须含有___________等植物激素，还需要对培养基进行严格的灭菌。
（2）愈伤组织再分化形成的胚状体继续培养，则可培育出完整的植株，这体现了_________。
（3）从叶片的叶肉细胞到获得胚状体的过程中，需要经过 ________。①无丝分裂②有丝分裂③减数分裂④原代培养⑤传代培养⑥植物体细胞杂交⑦细胞融合⑧脱分化⑨再分化
A．①④⑤⑦⑧       B．②④⑤⑥⑧⑨       C．②⑧⑨       D．③⑥⑧⑨
（4）从图解可知，需要在培养基中加入激素调整细胞分裂分化的是________（用字母a～e回答）阶段，若为了获得三七的细胞产物，则只需培养到__________________。

【推荐3】马铃薯是同源四倍体，是由正常二倍体通过染色体加倍形成的，通常通过无性繁殖产生后代。长期种植会使病毒积累在体内，使其产量降低，品质变差。下图是利用马铃薯外植体（即离体的器官、组织或细胞）经植物组织培养技术培育脱毒马铃薯苗的过程。据图回答：

(1)外植体能够形成幼苗所依据的原理是_____；图中①、②过程分别是_____。
(2)培育脱毒苗时，一般选取（一定大小的）茎尖作为外植体，经过植物组织培养，再生植株就有可能不带病毒，原因是_____。
(3)若用基因型为AAaa的四倍体马铃薯的花药作为外植体进行组织培养，经诱导染色体加倍后得到的马铃薯幼苗的基因型是_____。