【推荐1】研究人员利用小鼠的单倍体 ES 细胞（只有一个染色体组），成功培育出转基因小鼠。 其主要技术流程如图所示，请分析回答下列问题：

注：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ代表四种限制酶。箭头指向的位置为限制酶的切割位点：Ampr 是氨苄青 霉素抗性基因，Neor 是 G418 抗性基因。
（1）图中细胞乙与_____类似，图中桑椹胚需通过_______技术移入代孕小鼠子宫内继 续发育，进行该操作前需对受体小鼠进行同期发情处理，目的是_____。
（2）在基因工程操作步骤中，过程①②称为_____。已知氨苄青霉素不能有效杀 死小鼠细胞，而一定浓度的 G418 能有效杀死不具有 Neor 的小鼠细胞。结合上图推测，过程①选用的 2 种限制酶是_____（填图中的编号），③处的培养液应添加______（填“氨苄青 霉素”或“G418”）。
（3）基因工程对 DNA 的需求量较大，利用 PCR 技术可以大量扩增目的基因。PCR 反应体系 中除含缓冲液、模板 DNA、dNTP（包含 dATP、dCTP、dGTP、dTTP）、引物外，还应含有__________；引物应选用下图中的______（填图中字母）。

【推荐2】近年来，基因治疗(genetherapy)作为一种新的治疗手段，可以治疗多种疾病。研究表明转基因水通道蛋白具有巨大的潜力，能帮助头颈部癌症幸存者克服慢性口干。水通道蛋白基因编码的蛋白质能促使细胞膜自然形成孔状的水通道，有利于推动流体，就好比唾液腺细胞分泌唾液进入口中。如图是研究人员构建的含水通道蛋白基因的表达载体，回答下列问题：

（1）若用限制酶XhoⅠ切下GDNF基因，并将之取代载体上相应的限制酶XhoⅠ～限制酶XhoⅠ区域（即100 kb），则所形成的重组载体长度为___________，该重组载体能否被限制酶XhoⅠ识别并切割开？_______。
（2）完成图中①过程，除了图中所示的必需工具外，还需要的工具酶是_______，该酶的作用是_______，常见的有____________和____________。
（3）形成图中重组载体所用的限制酶只能选择限制酶_______，经酶切后的载体与GDNF基因连接，可形成_______种含有二者的连接产物。

【推荐3】干扰素具有干扰病毒复制作用，对治疗乳腺癌、淋巴癌、多发骨髓瘤和某些白血病等也有一定的疗效。
I.下图为科研人员制备能合成干扰素的人参愈伤组织细胞的流程，①～④表示相关的操作，EcoRⅠ、BamHⅠ为限制酶，它们的识别序列及切割位点如下表所示。请回答：

限制酶	识别序列和切割位点
EcoR l	G↓AATTC
BamH l	G↓GATCC

(1)步骤①中常利用PCR技术获取和扩增干扰素基因，除含有干扰素基因的DNA片段之外，该过程需要提供_________以及引物。设计引物序列时的主要依据是_________，科研人员还需在两种引物的一端分别加上相应的碱基序列，以便于后续基因的剪切和连接，这两种碱基序列分别是_________。
(2)过程②所构建的基因表达载体中标记基因的作用是_________。
(3)过程③中需先用_________处理根瘤农杆菌，可使根瘤农杆菌处于_________的状态，以便将基因表达载体导入细胞。
(4)④过程检测人参愈伤组织细胞是否产生干扰素，所用的方法是_________。
II.干扰素在体外保存相当困难。科学家采用重叠延伸PCR技术，将干扰素基因中相应位点的C//G碱基对特定突变为G//C碱基对，从而使干扰素中的第17位氨基酸由半胱氨酸变成丝氨酸。该技术采用具有互补末端的引物，使PCR产物形成了重叠链，从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸，将不同来源的扩增片段重叠拼接起来，获得定点突变的干扰素基因，然后导入受体细胞生产表达新的干扰素，这种改造的干扰素可在-70℃条件下保存半年。原理如图。

(5)利用重叠延伸PCR技术诱变干扰素基因时，将预期的突变碱基设计在PCR的引物3和引物4中，制备出“PCR体系1”和“PCR体系2”，分别进行PCR扩增。“PCR体系1”中加入的引物是_________。PCR体系1和PCR体系2必须分开进行的原因是_________。得到图中由c、d链构成的完整DNA分子至少需要“PCR体系2”进行_________次循环。
(6)将PCR体系1、2的产物（图中ab和cd）混合后，继续进行下一次PCR反应。在该PCR反应体系中经过高温变性后，当温度下降到55℃，能够互补配对的DNA链相互结合，理论上有_________种结合的可能，其中能进行进一步延伸的有_________种。

【推荐1】1965 年中国科学家人工合成了具有生物活性的结晶牛胰岛素，摘取了人工合成蛋白质的桂冠。此后科学家又提出了利用基因工程改造大肠杆菌生产人胰岛素方法：利用胰岛素的 mRNA 得到胰岛素基因，导入工程菌获得胰岛素。下图是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。lacZ 基因表达产物β-半乳糖苷酶可以分解无色的 X-gal 产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。回答下列问题。
   
(1)获取胰岛素 mRNA 可以从_____细胞中获取，在_________催化下获得胰岛素基因。之后需要通过 PCR 技术进行扩增，已知胰岛素基因 a 链①处的碱基序列为－CCTTTCAG－， 则其中一种引物设计的序列是 5′-___________-3′。
(2)为使目的基因与载体正确连接，在设计 PCR 引物时可对目的基因添加限制酶_____ 的识别序列。
(3)经_____处理的大肠杆菌与重组质粒混合培养一段时间后，筛选出工程菌。筛选思路为___。
(4)工业化生产过程中，最初多采用重组大肠杆菌生产胰岛素，现在生产胰岛素多采用重组的酵母菌作为受体细胞，后者的优势是_______。

【推荐2】【生物——选修3:现代生物科技专题】MagaininmⅡ是非洲爪蟾皮肤分泌的一种抗菌肽，能对细菌、真菌、肿瘤细胞等产生明显的抑制效果。科学工作者通过基因工程技术获得能表达该种抗菌肽的大肠杆菌。请回答下列问题：
(1)和抗体相比，抗菌肽的抗菌作用具有________________特点。
(2)MagaininmⅡ基因能与运载体能结合，是由于它们在结构上具有_____等共同点（至少回答两点）；能在大肠杆菌细胞中表达出相同抗菌效果的抗菌肽，其原因是________。
(3)用PCR技术对MagaininmⅡ基因进行扩增时, 加热至_____℃使MagaininmⅡ基因解链为单链，_________与该单链中的相应互补序列结合，然后在Taq酶的作用下进行延伸。
(4)下图为某质粒的示意图,若目的基因插入b位点，则筛选出导入重组质粒的受体菌的方法是_________________。

【推荐3】为增加油菜种子的含油量，研究人员从陆地棉中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因：

（1）要获得酶D基因和转运肽基因A、D端相连的融合基因，首先需要用________酶和________酶处理可得到。
（2）将上述融合基因插入如图所示_________的T-DNA中，构建基因表达载体并导入农杆菌中，构建基因表达载体的目的是_______________________________________。
（3）携带外源DNA片段的质粒进入受体细胞后，在细胞中进行___________，或_________，随染色体DNA进行同步复制。
（4）要检测转基因油菜中是否插入了融合基因，可以用_____________________作探针，使探针与_______________杂交，如果显示出__________，就说明融合基因已插入成功。

【推荐1】马铃薯是种植广泛的农作物，常见的繁殖方式为无性繁殖，这种繁殖方式会导致病毒积累，从而使产量及品质大幅下降，培育脱毒和抗毒的马铃薯品种是提高产量的有效方法。请分析并回答以下问题：

(1)人工培养脱毒苗时，选择马铃薯茎尖或根尖作为外植体的理由是________。培养基中添加_________(填激素名称)，诱导离体组织细胞的增殖与分化，从而形成脱毒苗。为监控脱毒苗的质量，可采用________的方法检测病毒的蛋白质。
(2)为获得抗病的马铃薯，往往采用转基因技术，将病毒复制酶基因转移到马铃薯体内。其大致过程如图所示。
①a过程所用的工具酶有____________；b过程要使用__________处理农杆菌，致使农杆菌处于能从外界吸收DNA的生理状态；d、e过程分别表示_______________。
②目的基因在马铃薯幼苗体内能否成功转录，可采用的检测方法是________，马铃薯产生的配子中_____(填“一定”或“不一定”)含有目的基因。

【推荐2】“玉米的祖先”——大刍草经过9000多年人工驯化，被改造成现代玉米，成为世界上最高产的农作物之一。中国科学院的科学家经过不懈努力，从野生玉米中成功找回玉米人工驯化过程中丢失的一个控制高蛋白含量的优良基因THP₉，克隆出来并将此基因导入玉米细胞的染色体上，使玉米蛋白含量大幅提高并在三亚南繁基地进行了大规模田间试验。请回答下列问题：
(1)扩增优良基因THP₉常使用______技术，主要依据的原理是______。扩增时，需在DNA聚合酶催化下，在引物______端进行DNA链的延伸。
(2)利用野生玉米的优良基因THP₉并将其导入玉米自交系培育转基因玉米的主要四个步骤是目的基因的筛选与获取、______、______、目的基因的检测与鉴定。在该过程中，需要将优良基因THP₉插入启动子与终止子之间，其目的是______。
(3)将从新鲜的玉米叶片上取下的圆形小片与农杆菌共培养，筛选转化细胞并生成转基因植株。欲从个体水平检测转基因玉米是否培育成功，实验方法是____________。
(4)若转基因玉米体内含两个THP₉基因，且其自交后代全部表现为高蛋白子代，则说明______。

【推荐3】利用基因工程等技术手段可以生产各种抗性植物品种。如科学家将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。回答下列问题：
（1）基因工程技术的核心步骤是___________，这一过程中需要用到的工具酶是___________。
（2）在基因工程中，将鱼的抗冻蛋白基因导入番茄细胞最常采用的方法是_______。通常采用_______技术来检测鱼的抗冻蛋白基因是否插入了番茄的基因组。鱼的抗冻蛋白基因在番茄细胞中表达时是遵循中心法则的，请用箭头和文字写出基因表达的过程中遗传信息在不同分子之间的流动情况：_________________。
（3）将含有鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞培育成具有抗冻能力的番茄植株，运用的生物技术是_______，该技术的理论基础是___________。所用培养基中需要添加生长素和细胞分裂素，它们的作用是启动细胞进行有丝分裂，诱导离体细胞经过___________，从而形成具有抗冻能力的番茄植株。