【推荐1】PCR技术可用于扩增目的基因、引入定点突变等。大引物PCR定点诱变技术的操作过程如图所示。回答下列问题：

(1)PCR过程中，温度的控制至关重要。若变性温度过低，则会因___导致反应效率降低；若退火温度过高，则会因___导致目标产物的量减少。利用PCR技术扩增目的基因时，需要加入引物的原因是___。一般还要向PCR反应缓冲溶液中添加Mg²⁺，目的是___。
(2)进行大引物PCR定点诱变时，需要进行两轮PCR（PCR1和PCR2）。在PCR1中，至少需要经过___个循环才能获得图中所示大引物。在PCR2中，若要获得带有突变位点的改良基因，则应选择的引物是___（填“①”或“②”）。
(3)PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。凝胶中DNA分子的迁移速率与___（答1点）有关。若在某次利用PCR扩增目的基因后，发现有除目的基因外的其他DNA片段存在，可能的原因是___（答2点）。

【推荐2】人血清白蛋白（HSA）具有重要的医用价值，只能从人血浆中制备。下图是以基因工程技术获取重组HSA 的两条途径，其中报告基因表达的产物能催化无色物质K呈现蓝色。据图回答下列问题：

(1)若要体外获得大量的人血清白蛋白基因，可采用PCR技术。该技术的前提是要根据一段已知目的基因的_________设计引物，而后经过变性、复性和_________三个步骤的循环对目的基因进行扩增。若该目的基因循环扩增4次，理论上需要消耗_________个引物。
(2)已知碱性磷酸酶能除去核苷酸末端的5'磷酸，构建表达载体的过程中用该酶处理 Ti质粒，但HSA基因不用碱性磷酸酶处理，这样做的目的是_________，在上述条件下 DNA 连接酶可以使 HSA基因和Ti质粒之间形成_________个磷酸二酯键。
(3)将重组质粒通过_________法导入绵羊的受体细胞时，常选用受精卵作为受体细胞的主要原因是_________。
(4)科学家最初利用大肠杆菌生产重组人血清白蛋白，结果没有得到有活性的人血清白蛋白，而转基因植物细胞能够产生有活性的人血清白蛋白。其原因是_________。

【推荐3】干扰素是动物或人体细胞产生的一种糖蛋白，具有抗病毒的作用。我国科学家成功地把人的干扰素基因“嫁接”到了烟草的DNA分子上，使烟草获得了抗病毒能力。请回答下列问题：
（1）科学家欲从人淋巴细胞的DNA中获取干扰素基因，此时需要用到_________酶进行切割。利用PCR技术扩增干扰素基因时，进行n次循环的扩增，第n次时理论上至少需要______个引物。
（2）获得干扰素基因后，要构建基因表达载体，此时需要________酶把干扰素基因与质粒连接起来。一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须要有________以及标记基因等，其中标记基因的作用是___________。
（3）将含有干扰素基因的基因表达载体导入烟草细胞中，常用的方法是__________。将干扰素基因导入烟草细胞后，要检测______________，这是干扰素基因能否在烟草细胞中稳定遗传的关键。
（4）如何检测培育的转干扰素基因烟草是否具有抗病毒能力?______________。

【推荐1】人类是乙型肝炎病毒的唯一宿主，接种乙肝疫苗是预防乙型肝炎的最有效方法。下图为利用基因工程技术生产乙肝疫苗的流程和作用机理，质粒中lacZ基因可用于“蓝白斑”筛选，含有lacZ基因的细菌可分解X-gal而使菌落显现蓝色，不含lacZ基因的细菌菌落则呈白色。回答下列问题：
   
(1)上图中质粒除含有青霉素抗性基因和lacZ基因外，还应含有启动子、_____等元件；其中启动子的作用是______。
(2)获取乙肝病毒基因后，需用PCR技术进行扩增和琼脂糖凝胶电泳进行检测。PCR反应体系中需加入______种引物和HBsAg基因；
(3)根据质粒和HBsAg基因所在DNA上酶切位点的分布情况可知，若过程a用一种限制酶应选择______。实际操作中，通常选用两种限制酶，其目的是_____。
(4)重组质粒导入后，还需检测工程菌是否合成了相应蛋白质，从分子水平上检测该蛋白质常采用的方法是_____。以上检测可使用单克隆抗体检测试剂盒，利用单克隆抗体制备检测试剂盒的优点是_____。

【推荐3】打新冠疫苗是建立新冠病毒免疫屏障的重要措施之一，目前已临床应用的腺病毒载体重组疫苗制备的技术线路如下：提取新冠病毒RNA→生产cDNA→S蛋白基因→构建基因表达载体→导入CHO细胞→纯化S蛋白→加入佐剂、稀释液等制成疫苗。构建基因表达载体过程如下图。回答下列问题：
   
(1)技术路线中的“提取新冠病毒RNA→cDNA→S蛋白基因”是基因工程的第一步，被称为____________，获得cDNA的方式是___________，获得大量S蛋白基因需要采取____________技术。
(2)基因表达载体的构建是基因工程的核心，其目的是__________，此基因表达载体的组成，除了有S蛋白基因外，还必须有启动子、终止子、__________和复制原点等。
(3)题干与图示说明腺病毒载体重组疫苗制备过程是将新冠病毒的基因插入至_____________中，使腺病毒表达出新冠病毒的抗原而不产生新冠病毒的毒性，然后__________，从而帮助人体产生特异性免疫。

【推荐1】遗传毒性物质常存在于被化学物质污染的水体，可损伤生物的DNA，严重威胁人类健康。研究人员通过基因工程改造大肠杆菌，筛选对遗传毒性物质反应灵敏的工程菌株，以用于水质检测。
(1)大肠杆菌DNA中存在可被遗传毒性物质激活的毒性响应启动子序列，将毒性响应启动子插入图1所示表达载体的P区，获得基因工程改造的大肠杆菌。当改造后的大肠杆菌遇到遗传毒性物质时，________识别并与启动子结合，驱动噬菌体裂解基因（SRR）________，表达产物可使大肠杆菌裂解。
(2)研究人员选取启动子sul准备与图1表达载体连接。图2显示了启动子sul内部存在的酶切位点，横向箭头表示转录方向。

①据图1、2信息，为确保启动子sul可与已被酶切的表达载体正确连接，克隆启动子sul时，应在其A端和B端分别添加限制性内切核酸酶________的酶切位点。
②将重组表达载体导入大肠杆菌，置于含有________的选择培养基中进行筛选、鉴定及扩大培养，获得工程菌sul。
(3)研究人员陆续克隆了其他4种启动子（rec、imu、qnr、cda），分别连入表达载体，用同样的方法获得导入重组载体的工程菌，以筛选最灵敏的检测菌株。
①将5种工程菌和对照菌在基础培养基中培养一段时间后，检测菌体密度，结果如图3，说明工程菌在自然生长状态下不会产生自裂解现象，理由是________。
②上述菌株在基础培养基中生长 2 h时加入遗传毒性物质，检测结果如图4。据图可知，5种工程菌均启动了对遗传毒性物质的响应，且转入rec启动子的菌株最________。

(4)下列关于该工程菌的叙述，正确的包括________

A．该工程菌可能用于检测土壤、蔬菜中的农药残留量

B．该毒性响应启动子序列广泛存在于自然界所有物种中

C．其表达产物可裂解大肠杆菌，检测后的剩余菌液可直接倒掉

D．低温保存该工程菌，是为了降低细胞呼吸以减少有机物的消耗

【推荐2】下图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoR Ⅰ（0.7Kb）、PvuⅠ（0.8 Kb）等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离，1Kb=1000个碱基对长度。请据图回答：

（1）质粒A、C不能作为目的基因运载体的理由分别是_____、_____。
（2）将图中的目的基因与质粒B进行重组，需要用到_____酶和DNA连接酶。
（3）基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤。现运用_____酶切质粒，完全酶切后进行电泳观察，若出现长度为1.1kb和_____kb，或者_____kb和_____kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功（重组质粒上目的基因的插入位点与EcoRⅠ的识别位点之间的碱基对忽略不计）。

【推荐2】人们试图利用基因工程技术将牵牛花的蓝色基因导入白玫瑰中，以培育转基因的蓝色玫瑰花。请回答下列问题：
（1）将牵牛花的蓝色基因导入白玫瑰细胞之前需要先构建基因表达载体，这一过程所需要的工具酶是_______。基因表达载体中除含有蓝色基因外，还应含有_________、终止子、标记基因和复制原点。在体外，可通过PCR技术扩增蓝色基因，为了保证PCR反应的进行，反应体系需要加入_____________酶、模板DNA、dCTP，dATP、dGTP、dTTP，以及____________等。
（2）将基因表达载体导入白玫瑰细胞内常用的方法是____________，而检测目的基因是否导入白玫瑰染色体DNA上，常用____________技术。
（3）将导入了蓝色基因的白玫瑰细胞培养成个体，需采用________技术，该技术利用的原理是_________。

【推荐3】R—7是家蚕体内的一种小分子非编码RNA，可与某些mRNA尾端的一段非编码序列（3’—UTR）结合，进而影响基因的表达。为研究R—7是否影响家蚕基因B（调控家蚕眼睛发育）的表达，科研人员将基因B中对应3’—UTR的DNA片段与荧光素酶基因（该基因的表达不受R—7的影响）重组如甲图所示，将该重组载体导入家蚕胚胎细胞并观察其表达结果如乙图所示。回答下列问题：

(1)要想短时间内获得大量目的基因需用到的技术是____________________，该技术的原理是____________________。
(2)图甲中对应3’—UTR的DNA片段应插入到位点__________，原因是__________，基因工程的核心步骤是____________________，其目的是____________________。
(3)科研人员从乙图所示的实验组和对照组细胞中提取蛋白质，经处理检测后获得相对荧光值（在适宜条件下，荧光素酶可催化荧光素发生氧化反应并发出荧光）。实验组为将重组载体导入含R—7的家蚕胚胎细胞中，对照组1为将含有荧光素酶基因的表达载体（不含对应3’—UTR的DNA片段）导入含R—7的家蚕胚胎细胞中，则对照组2应为__________，由结果推知R—7通过____________________进而抑制基因B的表达。